周譽(yù) 魏建國 戈立東

●論 著

CD151和整合素α3在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義

周譽(yù) 魏建國 戈立東

目的 探討CD151和整合素α3在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義。 方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)40例結(jié)腸炎組織、96例結(jié)腸癌組織中CD151及整合素α3的表達(dá)，并分析其相關(guān)性。 結(jié)果 結(jié)腸炎組織和結(jié)腸癌組織中CD151表達(dá)陽性率分別為0、88．5%；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中CD151表達(dá)陽性率分別為100%、63．3%；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中CD151表達(dá)陽性率分別為100%、78．0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05）；在結(jié)腸炎組織和結(jié)腸癌中整合素α3表達(dá)陽性率分別為0、87．5%；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)陽性率分別為100%、60．0%；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中表達(dá)陽性率分別為100%、76．0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0．05）。CD151和整合素α3的表達(dá)陽性率在結(jié)腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)分型及分化程度中的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0．05），而在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。 結(jié)論CD151和整合素α3的高表達(dá)與結(jié)腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān)，檢測(cè)CD151和整合素α3的表達(dá)可能為結(jié)腸癌的診斷、預(yù)后判斷及治療提供參考依據(jù)。

結(jié)腸癌 CD151 整合素α3 免疫組化法

目前全球范圍內(nèi)結(jié)腸癌仍然是消化道常見的惡性腫瘤之一，極易發(fā)生局部及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，甚至部分患者早期即可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[1]?；颊叩念A(yù)后與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，抑制結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移是提高患者生存率的重要途徑，因此，闡明結(jié)腸癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的機(jī)制是根治的關(guān)鍵。CD151是4次跨膜蛋白超家族(TM4SF)中的新成員，也是TM4SF中唯一的癌基因，其高表達(dá)與多種惡性腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)[2]。CD151可與多種整合素相結(jié)合，其中與整合素α3最為密切，兩者結(jié)合形成的復(fù)合物與細(xì)胞黏附和遷移轉(zhuǎn)移相關(guān)[3-4]。目前，在結(jié)腸癌中CD151和整合素α3的表達(dá)及其臨床意義國內(nèi)尚未見相關(guān)報(bào)道。因此，筆者利用免疫組化法研究結(jié)腸癌組織中CD151和整合素α3的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理資料探討其在結(jié)腸癌發(fā)生和進(jìn)展過程中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 收集2008-01—2011-06在中國人民解放軍第169醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診為結(jié)腸癌標(biāo)本96例，其中患者男63例，女33例；年齡35～74歲，平均（54.0±0.3）歲。大體類型：潰瘍型33例，腫塊型45例，浸潤(rùn)型18例。組織學(xué)分型及分化程度：高分化腺癌15例，中分化腺癌46例，低分化腺癌26例，黏液腺癌9例。腫瘤直徑1.5～5.5cm，其中＜3.5cm者45例，≥3.5cm者51例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者66例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例；發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者46例（其中23例轉(zhuǎn)移到肺，10例轉(zhuǎn)移到肝臟，5例轉(zhuǎn)移到腦，5例轉(zhuǎn)移到骨，3例轉(zhuǎn)移到前列腺），無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者50例。另選取2010-01—2011-01在中國人民解放軍第169醫(yī)院經(jīng)腸鏡活檢證實(shí)為結(jié)腸炎的組織標(biāo)本40例作為對(duì)照組，其中患者男25例，女15例，年齡32～77歲，平均（48.0±0.2）歲。本組患者術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。

1.2 試劑和檢測(cè)方法 鼠抗人CD151單克隆抗體和整合素α3單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司，免疫組化SP法試劑盒及DA月顯色液均購自福州邁新生物技術(shù)公司。采用免疫組化SP法，參照試劑盒說明書進(jìn)行，陽性組織切片作為陽性對(duì)照，而陰性對(duì)照采用P月S代替鼠抗人CD151單克隆抗體和整合素α3單克隆抗體。按照免疫組化試劑盒說明書，每張切片加入過氧化酶阻斷劑50μl在室溫下孵育10min；P月S沖洗3次，3min/次；在每張切片再加入非免疫性動(dòng)物血清50μl，室溫孵育5min；注意此步驟不沖洗，甩去多余的液體即可；于每張切片上再加入一抗50μl，放置于40C冰箱中孵育過夜；第2天用P月S沖洗3次，3min/次；每張切片再加入生物素標(biāo)記的二抗50μl，室溫下孵育大約10min，P月S沖洗3次，3min/次；每張切片再加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶溶液50μl，室溫孵育10min；P月S沖洗3次，3min/次；于每張切片加入100μl新鮮配制的DA月溶液，在顯微鏡下觀察顯色情況，然后決定停止顯色；自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 結(jié)果判斷 CD151及整合素α3蛋白陽性定位于細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)，呈棕褐色顆粒，采用半定量積分法判定結(jié)果：顯色度按細(xì)胞著色深淺計(jì)分：0分基本無色，1分淺黃色，2分淺棕色，3分深棕色。再根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分,無陽性細(xì)胞為0分；陽性細(xì)胞＜10%為1分，10%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。顯色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積≥3分為陽性，＜3分為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；各指標(biāo)間相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中CD151及整合素α3的表達(dá) CD151與整合素α3在陰性對(duì)照切片中均無陽性表達(dá)。CD151和整合素α3在結(jié)腸癌中的陽性表達(dá)率分別為88.5%和87.5%，而在結(jié)腸炎組織標(biāo)本中均無表達(dá)，見表1。

表1 兩組中CD151、整合素α3的表達(dá)[例（%）]

2.2 CD151及整合素α3表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系 在96例結(jié)腸癌組織中，CD151及整合素α3表達(dá)陽性率在患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)分型及分化程度中的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），而CD151在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)陽性率分別高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組，整合素α3在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)陽性率分別高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組（均P＜0.05），詳見表2。

2.3 CD151和整合素α3表達(dá)的相關(guān)性 CD151和整合素α3在結(jié)腸炎組織中均呈陰性表達(dá)；而在96例結(jié)腸癌患者中，85例CD151呈陽性表達(dá)，其有74例患者同時(shí)表達(dá)整合素α3。CD151和整合素α3在結(jié)腸炎癥組織和結(jié)腸癌中的表達(dá)經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，結(jié)果表明CD151和整合素α3在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.443，P＜0.01)。

3 討論

結(jié)腸癌是我國常見的惡性腫瘤，侵襲和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后及生存的主要原因之一，而侵襲和轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素參與、復(fù)雜的生物學(xué)過程，幾乎是所有惡性腫瘤所特有的本性，而細(xì)胞的遷徙運(yùn)動(dòng)參與了腫瘤轉(zhuǎn)移的整個(gè)過程。CD151基因是最近發(fā)現(xiàn)的癌基因，能夠與整合素特異性的結(jié)合從而形成復(fù)合體，進(jìn)一步參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、遷移及血管形成等過程[5-6]。最新研究表明，CD151在許多惡性腫瘤中表達(dá)均較高，如前列腺癌[7]、膀胱癌[8]、甲狀腺癌[9]、結(jié)腸癌[10]、肝癌[11]等，其高表達(dá)與惡性腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。整合素α3可以通過與其配體蛋白的相互作用，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終影響細(xì)胞遷移轉(zhuǎn)移的特性。細(xì)胞遷移信號(hào)從細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)傳遞的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是整合素-CD151復(fù)合體的形成[12]，而作為跨膜連接器的CD151在該信號(hào)傳導(dǎo)過程中起非常重要的作用，并且與整合素α3最為密切相關(guān)，整合素α3-CD151復(fù)合體的形成與細(xì)胞的增殖、黏附及遷移密切相關(guān)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CD151和整合素α3在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，并且CD151與整合素α3的表達(dá)呈正相關(guān)，進(jìn)一步提示CD151和整合素α3的結(jié)合可能在結(jié)腸癌的發(fā)生和遷移中起協(xié)同作用。國外有研究報(bào)道，細(xì)胞遷移信號(hào)從細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)傳遞的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一就是CD151-整合素復(fù)合體的形成[12]。Yauch等[13]發(fā)現(xiàn)CD151-整合素復(fù)合體形成后的白細(xì)胞在纖維粘連蛋白上的連接約減少90%，同樣表明CD151-整合素復(fù)合體的形成在細(xì)胞遷移過程中起關(guān)鍵的作用。另外，我們通過分析96例結(jié)腸癌患者臨床資料發(fā)現(xiàn)：CD151和整合素α3的表達(dá)陽性率在結(jié)腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)分型及分化程度中的差異均無統(tǒng)計(jì)意義（均P＞0.05），而在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)一步說明CD151和整合素α3參與了結(jié)腸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，可能是評(píng)估結(jié)腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力的一種新指標(biāo)，并且可能為結(jié)腸癌靶向治療提供新的分子靶點(diǎn)。因此，聯(lián)合檢測(cè)CD151和整合素α3的表達(dá)水平，能夠?yàn)樵u(píng)估腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能及判斷患者預(yù)后提供理論依據(jù)。CD151能否作為一個(gè)恰當(dāng)?shù)年P(guān)鍵點(diǎn)從而被用于腫瘤的分子靶向治療，還有待于基礎(chǔ)和臨床的進(jìn)一步研究。

表2 不同臨床病理特征結(jié)腸癌患者CD151和整合素α3表達(dá)陽性率的比較[例（%）]

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Expression of CD151 and integrin α3 in colorectal carcinoma and its clinicopathological significance

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of CD151 and integrin α3 in colorectal carcinoma and its clinicopathological significance．Methods The expressions of CD151 and integrin α3 were examined by using immunohistochemistry in tissue sections from 40 cases of colonitis and 96 cases of colorectal carcinoma．Results The positive rates of CD151 in colonitis and colorectal carcinoma tissues were 0．0%(0/40)and 88．5%(85/96),respectively;in colorectal carcinoma with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis were 100．0%(66/66)and 63．3%(19/30),respectively; in colorectal carcinoma with distant metastasis and those without distant metastasis were 100．0%(46/46)and 78．0%(39/50),respectively(all P＜0．05)．The positive rates of integrin α3 in colonitis and colorectal carcinoma tissue were 0．0%(0/40)and 87．5% (84/96),respectively;in colorectal carcinoma with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis were 100．0% (66/66)and 60．0%(18/30),respectively;in colorectal carcinoma with distant metastasis and those withour distant metastasis were 100．0%(46/46)and 76．0%(38/50),respectively(all P＜0．05)．The expression of CD 151 and integrin α3 was not correlated with age,gender,tumor size,pathological types and differentiation of colorectal carcinoma(all P＞0．05),while closely correlated with lymph node metastasis and distant metastasis．Conclusion Detection of CD151 and integrin α3 may be of value in diagnosis, prognosis and treatment monitoring of colorectal carcinoma．

Colorectal carcinoma CD151 Integrin α3 Immunohistochemistry

2013-09-18）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

421001 衡陽，中國人民解放軍第169醫(yī)院病理科（周譽(yù)、戈立東）；紹興市人民醫(yī)院病理科（魏建國）

魏建國，E-mail：mickmouse88@163.com