易遠(yuǎn)紅

（四川省成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川成都 610072）

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赤首烏與白首烏的HPLC指紋圖譜鑒定

易遠(yuǎn)紅

（四川省成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川成都 610072）

【摘要】目的分析研究白首烏和赤首烏的HPLC指紋圖譜的鑒定方法。方法采取DAD（RP-HPLC）方法，對(duì)赤首烏和白首烏進(jìn)行測(cè)定和對(duì)比分析。結(jié)果何首烏的各個(gè)樣品指紋圖譜相似，白首烏的指紋圖譜有一定區(qū)別，兩者加工之前和以后也有不同。結(jié)論對(duì)赤首烏和白首烏可以采取HPLC指紋圖譜鑒定。

【關(guān)鍵詞】指紋圖譜；HPLC；赤首烏；白首烏

根據(jù)相關(guān)報(bào)道表明[1]，何首烏一共分為兩種，其中包括赤首烏和白首烏。其具有益氣、延年益壽以及滋補(bǔ)肝腎等功效，屬于一種常用中藥。本文筆者采取HPLC方法對(duì)白首烏和赤首烏的指紋圖譜給予分析研究，現(xiàn)將具體情況報(bào)告如下。

1　材料

何首烏采自河南、廣東、四川、廣西等地方或者為市場(chǎng)銷(xiāo)售品種，一共分為十份樣品，經(jīng)過(guò)本文作者鑒定全部為蓼科植物何首烏當(dāng)中的塊根。制作何首烏來(lái)自安徽，經(jīng)過(guò)鑒定屬于其加工產(chǎn)品。白首烏采取河北以及山東等相關(guān)地方。何首烏粉來(lái)自市場(chǎng)銷(xiāo)售產(chǎn)品，來(lái)自長(zhǎng)沙博健生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證編號(hào)QS：430114020021。

2　炮制加工方法和結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：安捷倫zorbax extend-c18分析柱（250毫米×4.6毫米，5μm）。流動(dòng)相：A（水）和B（乙腈）梯度洗脫，其條件0分鐘→60分鐘，水（%）97-0，乙腈（%）2-100,60分鐘→80分鐘，水（%）0-0，乙腈（%）100→100。體積流量：每分鐘一毫升。色譜柱溫度：25°C。檢測(cè)波長(zhǎng)：210納米。參比波長(zhǎng)：360納米。分析時(shí)間為80分鐘。進(jìn)樣量為20μL。

2.2供試品制備

采取藥材粗粉5克，置入燒瓶當(dāng)中，加入酒精100毫升，采取水浴加熱回流，一共提取三次，同時(shí)聯(lián)合濾液，把其濃縮到小體積，采取氯仿40毫升，并提煉兩次，將提煉液合并，采取無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾過(guò)液一直濃縮到合適體積，蒸干，剩余殘?jiān)尤氘惐歼M(jìn)行溶解，一定要溶解到25毫升容量瓶當(dāng)中。采取濾膜（微孔）進(jìn)行過(guò)濾，其過(guò)濾液當(dāng)做供試品[2]。

2.3對(duì)照品制備

對(duì)照物品采取大黃素，其一定要適量，加入甲醇，制作成為溶液，每毫升為20μg。

2.4方法學(xué)

采取廣東產(chǎn)出得何首烏藥材當(dāng)做樣品，對(duì)其儀器精密度、穩(wěn)定性以及實(shí)驗(yàn)方法重現(xiàn)性進(jìn)行考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性明顯；（1）穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：采取相同溶液（供試品），分別在0h、2h、4h、7h、11h、16h、22h、29h、36h給予檢測(cè)，對(duì)色譜峰保留時(shí)間是否一致進(jìn)行考察，各個(gè)色譜峰的時(shí)間RSD為0.2%-2.9%；（2）精密度實(shí)驗(yàn)：采取相同溶液（供試品），一共進(jìn)樣五次，對(duì)色譜峰保留時(shí)間是否一致進(jìn)行考察，各個(gè)色譜峰的時(shí)間RSD全部在3%以下；（3）重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：采取相同溶液（供試品），一共五分，采取同一方法進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)色譜峰保留時(shí)間是否一致進(jìn)行考察，以tR為36.2分鐘的大黃素峰當(dāng)做對(duì)照組，各個(gè)色譜峰的時(shí)間RSD全部在3%以下。對(duì)疊加色譜圖進(jìn)行觀察，這樣能夠?qū)Ψ逦幻黠@重合進(jìn)行判斷[3]。

2.5建立指紋圖譜

將兩種實(shí)驗(yàn)品溶液分別吸取20μL，注入HPLC，按照選擇好的色譜條件給予檢測(cè)，具體情況見(jiàn)圖1。

2.6指紋圖譜分析

2.6.1共同擁有指紋峰標(biāo)定經(jīng)過(guò)和對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照組，何首烏標(biāo)定九個(gè)共同擁有峰當(dāng)做其特征峰，炮制何首烏標(biāo)定五個(gè)共同擁有指紋特征峰。和對(duì)照品峰當(dāng)中的五號(hào)峰作對(duì)比，其當(dāng)中的八個(gè)共同擁有指紋峰相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間包括栽培品：0.118、0.642、0.732、0.928、1.152、1.487、1.521以及2.079，野生品：0.102、0.715、0.854、0.906、1.125、1469、1.516以及2.028。炮制何首烏其他四個(gè)共同擁有指紋峰相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間包括:0.852、1.137、1.484以及2.039。白首烏的色譜圖標(biāo)定八個(gè)共同擁有指紋特征峰，以供試品當(dāng)中保留時(shí)間在38分鐘的共同擁有指紋峰當(dāng)做參照，和三號(hào)峰相對(duì)比，其余七個(gè)共同擁有指紋峰相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間包括：0.100、0.338、1.065、1.231、1.276、1.389以及1.779；

圖1　赤首烏和白首烏高效液相色譜儀指紋圖譜

2.6.2其相似程度評(píng)價(jià)把十個(gè)批次樣品測(cè)試數(shù)據(jù)放到中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件，通過(guò)選峰，并設(shè)置模板（匹配），把譜峰自主匹配。之后根據(jù)設(shè)置好的模板，對(duì)其差異和相似給予評(píng)價(jià)。兩種何首烏指紋圖譜對(duì)比：根據(jù)各個(gè)指紋圖譜當(dāng)中，能夠發(fā)現(xiàn)，兩種何首烏指紋圖譜存在差異，其特征峰部位、數(shù)目以及積分值都有明顯不同，何首烏當(dāng)中存在大黃素，然而白首烏無(wú)大黃素。

3　討論

在優(yōu)化色譜條件期間，第一是對(duì)何首烏的色譜圖進(jìn)行考察，之后對(duì)白首烏色譜峰分離情況進(jìn)行分析。通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比，以乙腈和水當(dāng)做流動(dòng)相，根據(jù)以上數(shù)據(jù)實(shí)施梯度洗脫，可以將其當(dāng)中的各個(gè)色譜峰進(jìn)行分離，同時(shí)出峰非常多。然而采取DAD對(duì)波長(zhǎng)進(jìn)行考察，同時(shí)對(duì)不是同一波長(zhǎng)的色譜圖進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果在230納米之下，何首烏色譜圖當(dāng)中的峰非常多，信息也相對(duì)較多，因此，采取230納米當(dāng)做對(duì)波長(zhǎng)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

本文結(jié)果顯示，何首烏當(dāng)中不同樣品的指紋圖譜相似度明顯，然而其和白首烏指紋圖譜有較大差異，炮制何首烏之前和以后，白首烏加工之前和以后的指紋圖譜有明顯區(qū)別。其顯示的區(qū)別，通常是因?yàn)槠洳扇∨谥埔院舐?lián)合型蒽醌量下降，然而游離型蒽醌量增多。另外，白首烏在加工期間，C21甾苷類(lèi)流失較多造成的。因此，可以表明對(duì)赤首烏和白首烏可以采取HPLC指紋圖譜鑒定，并操作非常簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性和特征性良好。

參考文獻(xiàn)

［1］劉訓(xùn)紅,陳斌,蔡寶昌,王玉璽.赤首烏和白首烏的HPLC指紋圖譜鑒定研究[J].中草藥，2011,36（11）：1705.

［2］劉旭.不同產(chǎn)地首烏藥材HPLC指紋圖譜的研究[J].中華醫(yī)藥雜志，2011,34（2）：153.

［3］何文斐，李士敏.中藥色譜指紋圖譜的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，14（4）：238.

作者簡(jiǎn)介：易遠(yuǎn)紅，1973年生，男，本科學(xué)歷，主要從事醫(yī)院相關(guān)中藥學(xué)等工作。