★ 韋英姿 宣麗華

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053；2.浙江省中醫(yī)院 浙江 杭州 310006)

周圍性面癱，屬特發(fā)性面神經(jīng)麻痹或面神經(jīng)炎范疇，是面神經(jīng)核及其以下面神經(jīng)損傷導(dǎo)致的急性面部表情肌的遲緩性麻痹，由頸乳孔內(nèi)面神經(jīng)非特異性炎癥引起，根據(jù)面神經(jīng)損傷部位及癥狀，分為單純性面神經(jīng)炎，貝爾氏(Bell'S)面癱和亨特氏(Hunt'S)面癱[1]。近年來面癱的發(fā)病率越來越高，面癱的主要癥狀是面肌癱瘓,具體來說就是表現(xiàn)為口眼歪斜。顏面部在身體的各組織器官中具有無可替代的地位和意義,患上面癱會(huì)讓生活受到很大的影響。面神經(jīng)是人類骨管中行程最長的神經(jīng)，也是面部肌肉的主要運(yùn)動(dòng)神經(jīng)，它在支配面部的對稱性、表情、動(dòng)作等方面起到重要的作用[2]。因此迫切需要對面神經(jīng)進(jìn)行研究，了解面癱的機(jī)制，從而更有效的進(jìn)行治療。由于不能人為的在人身上建立面癱模型,動(dòng)物模型是研究這個(gè)問題的一個(gè)重要的變通方法,因此,人們利用動(dòng)物模型進(jìn)行大量的研究。本文從面癱造模常用動(dòng)物種類、不同面癱動(dòng)物模型的制作、適用范圍、目前存在的問題等方面，對現(xiàn)常用的面癱動(dòng)物模型的制作與應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行歸納總結(jié)。

1 面癱動(dòng)物模型常見動(dòng)物種類

嚙齒類動(dòng)物在面神經(jīng)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)研究中優(yōu)點(diǎn)頗多,在面神經(jīng)研究中最常使用。

1.1 大鼠 大鼠易于調(diào)教和捕捉方便,再生能力和抗感染能力都很強(qiáng)，來源十分廣泛,價(jià)格相對便宜；其面神經(jīng)主干比較淺、粗大，與人類相似，故大鼠較多地用于神經(jīng)損傷性面癱造模。蘇莉莎等[3]用10%烏拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉大鼠，暴露右側(cè)頸乳孔外的面神經(jīng)主干，并將其切斷于遠(yuǎn)側(cè)神經(jīng)干，切除5mm防止再生，止血、縫合傷口。術(shù)后可見術(shù)側(cè)觸須立即失去拂動(dòng)能力，并向尾側(cè)垂下，瞬目反射遲鈍，閉眼幅度變?nèi)跎踔敛荒苷T發(fā)，則周圍性面癱模型復(fù)制成功。Jang等[4]選取10只大鼠暴露左側(cè)面神經(jīng)主干，用微血管鉗鉗夾1分鐘，最后建立左側(cè)面神經(jīng)麻痹模型。

1.2 小鼠 小鼠體型小，性情溫順，不主動(dòng)咬人，易于飼養(yǎng)管理，較多地用于病毒性面癱造模。古林濤等[5]腹腔注射10%水合氯醛(4mL/kg)麻醉小鼠，搔刮小鼠左側(cè)近耳根部耳廓皮膚，取25μL HSV-1病毒液接種于小鼠耳廓?jiǎng)?chuàng)面，接種病毒后第3天，通過觀察小鼠瞬目反射、胡須運(yùn)動(dòng)、鼻尖位置，判斷面癱造模是否成功。Hato等[6]在研究HSV-1感染導(dǎo)致貝爾麻痹發(fā)病機(jī)制實(shí)驗(yàn)中，采用62只小鼠耳后接種HSV-1病毒液建立貝爾氏麻痹模型。

1.3 兔 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔體形大，性情溫和，面神經(jīng)粗大，面肌功能相對強(qiáng)大，便于觀察，且與人類解剖及生理接近，頭面部較大，易于取穴治療。王宇娟等[7]選用新西蘭兔10只,用1%戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈推注麻醉,暴露面神經(jīng)顳外段，在進(jìn)入頸乳孔前1cm面神經(jīng)總干處切斷神經(jīng)。術(shù)后第7天肌電圖檢查發(fā)現(xiàn),所有實(shí)驗(yàn)兔患側(cè)肌出現(xiàn)失神經(jīng)肌電圖表現(xiàn)，即單側(cè)周圍性面癱兔模型制備成功。

1.4 其他 宣麗穎等[8]用健康豚鼠造面神經(jīng)麻痹模型。用0.9%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，經(jīng)面神經(jīng)管處暴露分離面神經(jīng)，用微型持針器的尖端給予壓強(qiáng)壓迫，其寬度為1.0mm，持續(xù)時(shí)間為20秒。Neiva等[9]將非人類靈長類動(dòng)物狨猴經(jīng)受了三種不同類型的面神經(jīng)損傷：第一組，切除面神經(jīng)干；第二組，用微細(xì)血管鉗壓迫面神經(jīng)；第三組，用鑷子壓迫面神經(jīng)。結(jié)果神經(jīng)壓迫的兩組面癱狨猴面神經(jīng)逐步再生恢復(fù)。

2 面癱動(dòng)物模型的常見模型

2.1 神經(jīng)損傷性面癱模型 運(yùn)用神經(jīng)損傷的方法造模是目前面癱造模的最常用手段，能反映面癱的某些特定癥狀。全世明等[10]制備外傷性周圍性面癱模型，用10%水合氯醛(500mg/kg)腹腔注射麻醉,右側(cè)耳后切口,暴露面神經(jīng)出頸乳孔后主干,剪刀銳性橫斷,神經(jīng)斷端對位但不予縫合。次日觀察動(dòng)物外觀,術(shù)側(cè)胡須靜止不能拂動(dòng)、瞬目反射消失，出現(xiàn)不同程度眼裂變小、流淚、分泌物增多、眼瞼發(fā)紅。至術(shù)后14天均無動(dòng)物出現(xiàn)明顯面癱恢復(fù)情況，提示造模成功。近年來有較多研究者采用實(shí)驗(yàn)兔造模研究神經(jīng)損傷性面癱，張微等[11]通過卡壓兔面神經(jīng)，造成面神經(jīng)損傷建立面癱模型，研究兔面神經(jīng)壓榨模型的自愈問題。將日本大耳白兔按體質(zhì)量(5mL/kg)予1%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉，于右側(cè)面部耳根與右側(cè)嘴角連線中點(diǎn)，即正對神經(jīng)干處，鈍性分離面神經(jīng)，以特制止血鉗滿扣，夾閉面神經(jīng)5min后用縫線標(biāo)記損傷段。術(shù)后1～10天(急性期)呈現(xiàn)患側(cè)瞼距逐漸增大的趨勢，10天后瞼距逐漸減小。目的是通過觀察面癱模型兔的面神經(jīng)組織形態(tài)學(xué)改變，進(jìn)一步客觀評價(jià)針灸療效。

2.2 缺血性面癱模型 面神經(jīng)進(jìn)入內(nèi)聽道后便一直在彎曲狹窄的骨管內(nèi)走行,血運(yùn)局限,側(cè)支代償差,容易引起缺血性損害,而且面神經(jīng)迷路段的骨管尤為狹窄,毛細(xì)血管密度較小,更容易發(fā)生缺血損傷。面神經(jīng)血管痙攣、面神經(jīng)缺血是貝爾面癱的可能病因之一,因此有學(xué)者選擇性切斷面神經(jīng)供血，來建立面神經(jīng)麻痹的動(dòng)物模型。王杰等[12]用苯巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉,在右頸側(cè)切口暴露頸外動(dòng)脈，手術(shù)顯微鏡下分別結(jié)扎舌動(dòng)脈、面動(dòng)脈、顳淺動(dòng)脈和近端頸外動(dòng)脈，將栓塞劑0.15～2mL注入頸內(nèi)動(dòng)脈，立即出現(xiàn)右側(cè)面癱。熒光顯微鏡下觀察面神經(jīng)表面毛細(xì)血管，可觀察到面神經(jīng)表面血管變細(xì)甚至被阻塞,尤以迷路段為甚，進(jìn)一步證實(shí)了這一動(dòng)物模型的科學(xué)性。提示:面神經(jīng)滋養(yǎng)血管堵塞或受壓后會(huì)造成可逆性面神經(jīng)麻痹，本實(shí)驗(yàn)為Bell'S面癱多發(fā)生于迷路段提供了解剖學(xué)依據(jù)。

2.3 病毒性面癱模型 研究顯示，單純皰疹病毒1型是貝爾氏麻痹的一個(gè)主要致病因素，病毒可以經(jīng)耳后支而直接侵襲面神經(jīng)主干導(dǎo)致面癱。此外耳后皮膚劃傷和面神經(jīng)耳后支切斷等操作中因損傷到三叉神經(jīng)的分支，病毒也會(huì)沿三叉神經(jīng)侵入，經(jīng)三叉神經(jīng)節(jié)、腦干而最終侵襲到面神經(jīng)，引起面神經(jīng)炎，造成面神經(jīng)腫脹受壓，面神經(jīng)與其骨管間隙變小，機(jī)械性的壓迫進(jìn)一步加重面神經(jīng)的損傷，引起面神經(jīng)髓鞘脫失及軸索變性而發(fā)生面癱。陳東等[13]通過建立1型單純皰疹病毒小鼠面癱的動(dòng)物模型,探討基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)在小鼠腦干面神經(jīng)核團(tuán)中表達(dá)的變化規(guī)律。將160只雄性小鼠隨機(jī)分為病毒接種組,生理鹽水對照組和空白對照組。均采用腹腔注射10%水合氯酸溶液(4mL/kg)的方法進(jìn)行麻醉，病毒接種組小鼠用27G針頭連續(xù)搔刮其左側(cè)耳廊后面近耳根處皮膚20～30次,將25μL HSV-1病毒液接種于創(chuàng)面上。生理鹽水組小鼠以生理鹽水代替病毒液做相同處理,空白對照組小鼠除麻醉外不做其它處理。結(jié)果：病毒接種組中有52.07%的小鼠于接種后2～5天出現(xiàn)不同程度的面癱癥狀,面癱癥狀持續(xù)3～7天自發(fā)恢復(fù)正常。單純皰疹病毒具有感染性，造模過程中安全性不夠高，因而此類造模應(yīng)用不及神經(jīng)損傷性面癱模型。

3 不同面癱動(dòng)物模型的應(yīng)用研究

根據(jù)不同的面癱造模方法分述不同面癱模型的適用范圍。

神經(jīng)損傷性面癱模型最為常用，其應(yīng)用范圍也最為廣泛，適用于研究面神經(jīng)損傷后的恢復(fù)情況、病理生理變化、失神經(jīng)支配后肌肉的運(yùn)動(dòng)、面神經(jīng)核和神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)、功能的變化以及面神經(jīng)營養(yǎng)因子與神經(jīng)損傷關(guān)系等。王衛(wèi)紅等[14]將大鼠隨機(jī)分組，組I為右側(cè)面神經(jīng)總干壓榨傷，組II為同體左側(cè)面神經(jīng)總干切斷傷，組III為正常對照側(cè)。結(jié)果表明,當(dāng)面神經(jīng)完全斷離后,不可避免地引起部分面神經(jīng)元死亡，而面神經(jīng)壓榨傷未必引起面神經(jīng)元死亡,因此,壓榨傷后面神經(jīng)的功能可望完全恢復(fù)。提示面神經(jīng)死亡由BCL-2、P53的表達(dá)變化決定。張甦琳等[15]將非人類靈長類動(dòng)物絨猴進(jìn)行不同的面神經(jīng)損傷處理：M1為完全離斷神經(jīng)的動(dòng)物，觀察期內(nèi)未出現(xiàn)恢復(fù)的跡象；M2、M3用無齒血管鉗壓迫，顯示出更早的恢復(fù)能力；M4、M5用無齒Barraquer型自動(dòng)靜態(tài)鉗子壓迫，恢復(fù)的相對較慢。結(jié)果兩種神經(jīng)壓迫后嚴(yán)重面癱的模型能夠在預(yù)估的時(shí)間內(nèi)逐漸恢復(fù)到正常水平，而切除神經(jīng)后則完全失去了面部運(yùn)動(dòng)恢復(fù)的可能。Yetiser等[16]將90只Wistar大鼠隨機(jī)分為面神經(jīng)切斷組和面神經(jīng)損傷組，對面神經(jīng)損傷和神經(jīng)營養(yǎng)變化進(jìn)行分析，結(jié)果兩組對比腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子在兩組對照中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子可以區(qū)分面神經(jīng)是否為切斷傷。

缺血性面癱模型適用于血管痙攣缺血所致的面神經(jīng)麻痹的研究。此類模型的建立主要用于面神經(jīng)病因?qū)W的研究，為進(jìn)一步研究貝爾氏面癱的病變部位、基因表達(dá)等提供了信息。Mohri[17]等設(shè)計(jì)了一個(gè)選擇性栓塞大鼠上頜動(dòng)脈的缺血性周圍性面神經(jīng)麻痹模型，觀察降鈣素基因相關(guān)肽與生長相關(guān)蛋白對大鼠c-Jun mRNA表達(dá)的影響。大鼠被證明具有一過性面癱，因此這種方法被認(rèn)為是輕微周圍神經(jīng)損傷的典范，該結(jié)果提示微小周圍神經(jīng)損傷能夠誘導(dǎo)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元mRNA的表達(dá)。同時(shí)還研究了超氧化物歧化酶的保護(hù)作用。超氧化物歧化酶是一種自由基的清除酶,參與細(xì)胞抗氧化防御系統(tǒng)。在損傷后第三天，超氧化物歧化酶明顯減輕了面癱行為障礙和降低降鈣素基因相關(guān)肽mRNA的表達(dá)。這表明缺血產(chǎn)生的自由基可能是缺血性神經(jīng)損傷和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的基因表達(dá)變化造成的。Iritani等[18]通過栓塞貓的頜內(nèi)動(dòng)脈建立貓缺血性面癱動(dòng)物模型，從而證明缺血性面神經(jīng)麻痹的病變部位在第七神經(jīng)的顳部內(nèi)。

病毒性面癱模型不僅說明了HSV-1能夠?qū)е旅嫔窠?jīng)麻痹,并為進(jìn)一步深入研究貝爾麻痹的發(fā)病機(jī)理和治療提供依據(jù)。Esaki等[19]對雌性BALB/c糖尿病及非糖尿病小鼠接種HSV-1病毒液，結(jié)果顯示非糖尿病小鼠面神經(jīng)麻痹發(fā)生率在36%，糖尿病小鼠面神經(jīng)麻痹發(fā)生率為68%。提示糖尿病本身不會(huì)引起面癱，但在HSV-1感染下能夠加速面神經(jīng)的髓鞘脫失和變性，從而導(dǎo)致面部神經(jīng)麻痹。姜振等[20]選取89只4周齡雌性小鼠隨機(jī)分為空白對照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組用26G針頭在右耳廓背面近耳根處皮膚連續(xù)搔刮后，將25μL HSV-1接種創(chuàng)面上，空白對照組不做處理。分別于面癱后6、12、24、48、72h及7d取組織，采用蛋白質(zhì)印跡法、RT-PCR法、免疫組織化學(xué)技術(shù)方法檢測小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá)變化規(guī)律。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組接種HSV-1后，面癱率為54.32%。GRmRNA在面癱早期小鼠的大腦面部運(yùn)動(dòng)皮層及面神經(jīng)核團(tuán)中表達(dá)逐漸降低，與對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GRmRNA表達(dá)變化規(guī)律與GR蛋白表達(dá)變化相一致。免疫組織化學(xué)顯示，在面神經(jīng)核團(tuán)中可見糖皮質(zhì)激素受體陽性細(xì)胞表達(dá)，并且也存在先降低后升高的變化規(guī)律。提示糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)水平與面神經(jīng)損傷的進(jìn)展密切相關(guān)，對于臨床上合理應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療貝爾氏面癱，防止激素抵抗現(xiàn)象具有指導(dǎo)意義。

4 不足與展望

綜上所述，面癱動(dòng)物模型的建立已經(jīng)成為面癱研究中使用廣泛且重要的手段之一。面癱造模的動(dòng)物種類繁多，造模方法各具特色，應(yīng)用范圍十分廣泛，根據(jù)其造模方法的不同各具優(yōu)勢，為針刺治療周圍性面癱提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。然而目前仍有許多待解決的問題：一是動(dòng)物模型的模擬未能完全貼近人面癱的實(shí)際病理情況，其作用機(jī)制還未能完全闡釋清楚，動(dòng)物模型只能間接反映人類疾病。二是造模時(shí)對動(dòng)物年齡、面神經(jīng)卡壓時(shí)間、神經(jīng)切斷長度等都沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。三是中醫(yī)認(rèn)為急性周圍性面癱有風(fēng)、寒、熱、外傷等病因，病機(jī)方面多因脈絡(luò)空虛，風(fēng)寒、風(fēng)熱之邪乘虛侵襲面部筋絡(luò)導(dǎo)致氣血阻滯、肌肉縱緩不收。但目前還少有緊扣中醫(yī)病機(jī)，符合中醫(yī)臨床發(fā)病規(guī)律的面癱病癥結(jié)合的動(dòng)物模型。在未來的研究中如何解決諸如此類的問題，有待于廣大臨床及科研工作者進(jìn)一步深入研究。在今后的研究中我們要重點(diǎn)將中醫(yī)理論與現(xiàn)代臨床研究相結(jié)合。

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