衛(wèi) 強，張國升，劉金旗，戴 一，尹 偉

（安徽新華學院 藥學院，安徽 合肥 230088）

紅豆杉中10-去乙?；涂ㄍあ蟪煞值难芯窟M展

衛(wèi) 強，張國升，劉金旗，戴 一，尹 偉

（安徽新華學院 藥學院，安徽 合肥 230088）

作為抗腫瘤藥紫杉醇和多西紫杉醇主要的合成原料，10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ具有十分重要的藥用價值.本文就紅豆杉中10-去乙?；婉R亭Ⅲ成分中涉及的細胞培養(yǎng)、提取分離、廢料轉(zhuǎn)化、中藥復方影響、含量測定等內(nèi)容進行概括和總結(jié)，以期為進一步開展研究提供新的思路.

紅豆杉；10-去乙?；涂ㄍあ螅谎芯窟M展

10-去乙?；涂ㄍあ螅?0-deacetylbaccatinⅢ，簡稱10-DABⅢ），又稱10-去乙酰基漿果赤霉素Ⅲ[1]或10-脫乙酰漿果杉亭Ⅲ[2]，可用于紫杉醇和多西紫杉醇的合成[3]，其結(jié)構(gòu)見圖1.由于10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ在紅豆杉屬植物中的含量要比紫杉醇豐富的多，分離提取的收率也比紫杉醇的高，樹葉又是可再生資源，這使其研究愈加得到關(guān)注.10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ廣泛存在于紅豆杉屬植物的樹皮、枝葉、根、種子和心材等.有報道在松科植物馬尾松(Pinus massoniana Lamb)和三尖杉科中國粗榧[Cephalotaxus sinensis(Rehd et Wils)Li]中也發(fā)現(xiàn)存在10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ[1]376.

圖1 10-去乙?；涂ㄍあ?/p>

本文對紅豆杉中化學成分類型及含量狀況進行概括總結(jié)，以期為進一步開發(fā)應用其豐富的資源奠定基礎(chǔ).

1 細胞培養(yǎng)[4]

郭玉婷等用經(jīng)多次繼代培養(yǎng)的云南紅豆杉細胞株，以改良Murashige and Skoog（MS）固體培養(yǎng)基[含2,4-二氯苯氧乙酸0.08mg·L-1、6-芐基嘌呤0.5mg·L-1、蔗糖20g·L-1、萘乙酸0.5mg·L-1]上繼代培養(yǎng),隔25天接種一次.將生長良好的細胞3g轉(zhuǎn)入含30mL MS培養(yǎng)液,25℃、110r/min振蕩培養(yǎng).將粗寡聚半乳糖醛酸(oligogalacturonic acid,OGA)粉末配成1g·L-1溶液,經(jīng)Sephdex G-10柱處理濾除Mw<700的寡聚物,以0.45μm微孔濾膜濾過除菌,作為OGA誘導子備用.細胞培養(yǎng)至第17天加入OGA,結(jié)果以40μg·mL-1OGA時細胞培養(yǎng)較好.

陳永勤[5]發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中添加1.0mmol·L-1或2.0mmol·L-1苯丙氨酸和在培養(yǎng)28d時同時補加73.0mmol·L-1蔗糖和137.3mmol·L-1甘露醇可明顯促進紅豆杉懸浮細胞生長和10-去乙?；涂ㄍあ笮纬?與陰性對照相比,添加苯丙氨酸、蔗糖、甘露醇的細胞生物量提高0.6-0.8倍,并使10-去乙?；涂ㄍあ螽a(chǎn)量提升7倍.

趙志蓮等[6-7]研究培養(yǎng)基種類、溫度、光照對云南紅豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量的影響.結(jié)果，BTM培養(yǎng)基中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是B5培養(yǎng)基的2.6倍；20℃培養(yǎng)時10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量是30℃時的5.7倍.暗細胞培養(yǎng)時10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量是強光照(3000lx)培養(yǎng)時的4.4倍.同時，研究硝酸鈰、硝酸鈰銨和硝酸鑭為稀土誘導子對云南紅豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量的影響.在培養(yǎng)12d后，加入誘導子和培養(yǎng)基.結(jié)果表明，添加0.1mmol·L-1硝酸鈰、0.01mmol·L-1硝酸鈰銨和0.01mmol·L-1硝酸鑭時10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量分別是不添加時的2.3倍、4.1倍和2.6倍.

2 提取分離

2.1 超臨界提取

馬淑楨等[8]以石油醚預處理，甲醇冷浸，輔以攪拌和超聲.先以正己烷萃取除雜，再以氯仿與水混合液(1:l)反復提取.氯仿層減壓濃縮，以硅膠色譜柱分離.得到10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ晶體，純度可達91%，整個工藝收率達7.9%.張明等[9]以南方紅豆杉的枝葉為原料，研究超臨界CO2萃取中溫度、壓力、時間、夾帶劑用量對10-去乙?；涂ㄍあ蟮挠绊?結(jié)果以夾帶劑用量15m l，萃取溫度50℃，壓力25MPa，萃取時間180min，10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ平均含量為0.600g·kg-1.

唐倩[10]以10-去乙?；涂ㄍあ笫章蕿橹笜?建立超臨界流體萃取技術(shù)對紅豆杉有效成分的萃取方法.結(jié)果以85%乙醇為夾帶劑、萃取溫度44℃、萃取壓力為27Mpa、動態(tài)萃取時間為2h時,10-去乙?；涂ㄍあ笫章适莻鹘y(tǒng)方法的2.18倍.

2.2 常規(guī)提取

李雙明[11]以超聲提取考察東北紅豆杉枝葉中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的工藝，結(jié)果較好的參數(shù)是：以80%乙醇為溶劑；固液比1:15;提取30min;提取次數(shù)為3次，10-去乙?；涂ㄍあ筇崛÷蕿?.052%.同時，得出10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ最佳的純化工藝：先醇提水沉(比例為1:3)，除去紫杉醇和三尖杉寧堿等弱極性物質(zhì)，則10-去乙?；涂ㄍあ笕苡谒?，再以氯仿萃取水相，最后進行硅膠柱層析，乙酸乙酯:石油醚（3:2，V/V)洗脫，得到10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ粗品，含量為63%，收率為86.74%.以乙睛、乙酸乙酷/石油醚重結(jié)晶，得10-DABⅢ白色粉末，純度為90%.總純化工藝下，10-去乙?；涂ㄍあ笫章蕿?9%.

3 廢料轉(zhuǎn)化[12]

以紫杉醇提取過程中的廢料作為原料,首次將含7-木糖基-10-去乙?；仙即肌?-木糖基-10-去乙?；馍紝帀A和7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇C三種化合物的混合物通過氧化、水解反應脫去紫杉烷類化合物C-7位上的木糖基,然后進行肼解反應脫去C-13位上的側(cè)鏈,最后利用重結(jié)晶純化,得到10-去乙?；涂ㄍあ?通過一定的技術(shù)處理，可利用紫杉醇廢料轉(zhuǎn)化10-去乙?；涂ㄍあ螅@有利于實現(xiàn)節(jié)能增效，保護生態(tài)環(huán)境.

4 中藥復方影響[13]

選擇以紅豆杉臨床常用劑量與3個扶正方（養(yǎng)陰方由沙參、麥冬和五味子三味藥組成,益氣方由黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓、炙甘草五味藥組成,溫陽方由附子、干姜、甘草三味藥組成）.紅豆杉藥材配伍養(yǎng)陰方，紅豆杉配伍益氣方可使10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ含量分別提高14.07%和4.59%,而紅豆杉配伍溫陽代表方組可使10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ含量降低18.17%，反映復方配伍對紅豆杉中10-DABⅢ含量溶出有顯著的影響.

5 含量測定

安春志[14]利用高相液相色譜法測定不同來源的紅豆杉中10-去乙酰巴馬亭Ⅲ的平均含量為0.0114%.利用C18色譜柱(250mm×46mm，5μm)，甲醇乙睛水(22:38:40)和甲醇乙睛水(5:35:60)分別作為流動相，檢測波長為227nm，柱溫30℃，流速1.0mL·min-1.

杜智敏等[15]測定東北紅豆杉枝葉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的含量為0.456%.采用RP-HPLC法. C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇-乙腈-水(20∶30∶50)作為流動相,檢測波長為233.9nm.

甄鏵[16-17]建立以反相高效液相色譜法測定歐洲紅豆杉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ含量的方法，10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ平均含量為0.175%.測試條件:以色譜柱為Shim-Pack VP-ODS(250mm×4.6mm, 5μm),流動相乙腈-水(梯度洗脫),流速1.0mL· min-1,柱溫40℃,檢測波長232nm.同時，采用硅膠層析柱，以甲醇-水(1:l)洗脫,對曼地亞紅豆杉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ也進行了初步分離和含量測定，結(jié)果其含量為51.3μg·g-1.HPLC檢測條件:SHIMPACK VP-ODS色譜柱(150mm×4.6mm，5μm），甲醇-水(45:55)為流動相，流速為1.0mL·min-1，柱溫為40℃，檢測波長為232nm.

張美珍等[18]測定南方紅豆杉枝葉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的平均含量為0.0570%.測試方法:采用RP-HPLC法.C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，乙腈-水(30∶70)為流動相,檢測波長232nm,流速1.0mL·min-1.

李海峰[19]采用色譜柱AgilentC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm),流動相為甲醇-乙腈-水(42∶13∶45),流速1.0mL·min-1,柱溫32℃,檢測波長234nm,測定云南紅豆杉生長過程中不同部位10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.發(fā)現(xiàn)在云南紅豆杉生長期樹皮中10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量高于枝葉,是枝葉中最高含量的1.498倍；休眠芽分化期和休眠期是10-去乙酰巴卡亭Ⅲ積累的關(guān)鍵時期，在枝葉中的含量顯著高于樹皮,最高含量達0.115%，是樹皮中最高含量的1.769倍,兩年生枝葉中含量略高于一年生枝葉.

6 總結(jié)

6.1 從目前研究來看，10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ最高含量為0.175%，最低為0.00513%,不同種植物的含量差異較大，總體含量偏低.

6.2 從提高10-去乙?；涂ㄍあ蠛康慕嵌葋砜?，傳統(tǒng)提取方法的改進，純化、分離技術(shù)的應用可以達到目的.而細胞培養(yǎng)技術(shù)、廢料轉(zhuǎn)化、復方配伍等新的研究也彰顯新的研究方向，為進一步提高含量提供新的思路，有可能成為未來研究的熱點和重要方向.

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Q946

A

1673-260X（2014）02-0025-03

安徽省高等學校省級自然科學研究項目（KJ2013B103）,安徽新華學院質(zhì)量工程項目（2011sysxx02）