許真玉

（國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評中心,北京 100038）

依達拉奉注射液雜質譜分析

許真玉

（國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評中心,北京 100038）

雜質控制是注射劑質量控制的重要指標之一，而雜質譜分析是建立合理可行的雜質檢測方法的基礎。本文結合依達拉奉制備方法、穩(wěn)定性特征、依達拉奉注射液處方分析、原研廠產品介紹文件、國外藥典等對依達拉奉注射液的雜質譜分析進行討論，供相關研究者參考。

依達拉奉注射液；雜質譜；分析

依達拉奉注射液是田邊三菱制藥株式會社開發(fā)的腦保護劑，具有自由基清除作用及過氧化反應抑制作用，2001年4月在日本上市，規(guī)格為20 m L∶30 mg，商品名為“RADICUT”，適應證為改善急性腦梗死所致的神經癥狀、日常生活活動能力和功能障礙，用法用量為每次30 mg，加入適量生理鹽水中稀釋后靜脈滴注，30分鐘內滴完，每日2次，14日為一個療程，盡可能在發(fā)病后24小時內開始給藥。

原研廠依達拉奉注射液尚未進口我國，目前已有多家國產依達拉奉注射液上市，也有多家申報單位在進行依達拉奉注射液的仿制申請。作為注射液，有關物質檢查是非常重要的一項質量控制指標，而雜質譜分析是有關物質檢查方法學研究和檢測方法建立的基礎。本文結合相關文獻和日常審評工作經驗，對依達拉奉注射液的雜質譜分析進行討論。

1 藥物制劑雜質來源

通常情況下，作為藥物制劑，其雜質來源主要包括兩方面。

第一是藥物制劑各組成成分引入的雜質，包括原料藥、輔料等引入的雜質?？紤]到原料藥是組成制劑的活性成分，而輔料通常為穩(wěn)定性相對較好的惰性物質，所以需要重點關注原料藥可能引入的雜質，可以結合原料藥雜質譜分析進行這方面雜質情況的分析。

對于原料藥引入的雜質，在進行制劑質量控制時，可以有兩種控制方式。一種是在原料藥質量標準中進行嚴格控制，通過嚴格保證原料藥的質量來保證制劑的質量，當然，這種控制方式的前提條件是這些雜質在制劑生產、貯藏過程中不發(fā)生變化。另一種方式是一并在制劑質量標準中進行控制，這種方式更適用于原料藥雜質控制不夠完善的情況。

第二是藥物制劑在生產和貯藏過程中產生的雜質，包括各種降解雜質、原輔料相互作用產生的雜質等。這類雜質是制劑雜質研究和控制的重點，可以結合原料藥的結構特點和降解途徑、原輔料相容性研究情況、制劑處方工藝情況、制劑包裝和貯藏情況、強制破壞試驗情況、對比研究情況、相關文獻資料等，研究分析在制劑生產和貯藏過程中可能生產的雜質。通常這類雜質需要在制劑的質量標準中進行有效的控制。

2 依達拉奉注射液雜質譜分析

如上所述，依達拉奉注射液雜質的主要來源，包括原料藥依達拉奉引入的雜質以及在依達拉奉注射液生產和貯藏過程中產生的雜質，下面將分別從這兩個方面開展討論。

2.1 原料藥依達拉奉引入的雜質

對于原料藥依達拉奉引入的雜質，可以結合原料藥依達拉奉的雜質譜進行分析。通常原料藥本身的雜質譜包括工藝雜質和降解雜質兩方面，考慮到依達拉奉原料藥在固體狀態(tài)下穩(wěn)定性較好，不容易產生降解雜質[1]，本文將重點對其工藝雜質進行討論。

2.1.1 依達拉奉的制備方法依達拉奉的制備方法比較成熟，有很多相關的文獻報道[2-3]，最常見的制備方法是等摩爾的乙酰乙酸乙酯和苯肼反應制得依達拉奉，反應方程式如下：

圖1 依達拉奉反應方程式

2.1.2 依達拉奉原料藥工藝雜質分析根據上述依達拉奉制備方法，在依達拉奉原料藥中可能存在的工藝雜質包括未反應完全的起始原料乙酰乙酸乙酯和苯肼以及起始原料中含有的雜質、反應副產物二聚體等。其中，對于起始原料中含有的雜質，可以通過進一步追溯所使用的起始原料乙酰乙酸乙酯和苯肼的制備方法而進行分析。乙酰乙酸乙酯可以采用雙乙烯酮與乙醇酯化法，或者乙酸乙酯與乙醇鈉Claisen縮合法制得粗品，通過減壓蒸餾得到成品[4]。苯肼通常以苯胺為起始原料，經重氮化、還原、酸析成鹽、中和等反應制得[5]。

2.1.3 依達拉奉原料藥引入雜質的控制對于上述分析中提到的雜質，二聚體雜質在依達拉奉注射液的生產和貯藏過程中也會產生，需要在依達拉奉注射液中進行研究和控制。苯肼屬于潛在遺傳毒性雜質，為更好地保證依達拉奉注射液質量，建議一并在依達拉奉注射液中進行研究和控制，根據歐洲藥品管理局（EMA）指導原則[6]，每日攝入量應低于1.5 μg，依達拉奉注射液的日劑量為60 mg，據此計算，建議將其控制在25 ppm以內。未反應完全的起始原料乙酰乙酸乙酯以及起始原料中含有的雜質，建議在原料藥依達拉奉的質量標準中進行控制。

2.2 依達拉奉注射液降解雜質的分析

2.2.1 原料藥依達拉奉理化性質的分析文獻報道，依達拉奉在固體狀態(tài)下穩(wěn)定性較好，田邊三菱制藥株式會社的依達拉奉注射液產品介紹（interview form，IF）文件顯示，依達拉奉無引濕性，在50℃高溫條件下放置3個月、在40℃/75%相對濕度的高濕條件下放置6個月、在1 000 lx的光照條件下放置4周、在室溫下長期放置36個月，除顏色稍有變化外，性狀、熔點、純度、干燥失重、含量等基本無變化[1]。

但依達拉奉在水溶液狀態(tài)下穩(wěn)定性較差，易被氧化、對高熱不穩(wěn)定、在堿性條件下穩(wěn)定性差、在酸性條件下穩(wěn)定性較好[7-8]。

2.2.2 依達拉奉注射液處方分析田邊三菱制藥株式會社的依達拉奉注射液處方組成包括依達拉奉、亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸、氯化鈉、氫氧化鈉、磷酸、注射用水，同時進行充氮處理[1]。在日本上市的大部分依達拉奉注射液仿制產品，其處方組成與原研產品基本一致。也有部分仿制產品的處方與原研產品不同，如處方組成為依達拉奉、亞硫酸氫鈉、枸櫞酸、氯化鈉、氫氧化鈉、磷酸、注射用水，同時進行充氮處理[9]。

已上市的產品中，處方中大多添加了抗氧劑等穩(wěn)定劑，如亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸等，以保證依達拉奉注射液中主成分的穩(wěn)定性。

2.2.3 原研廠IF文件中的雜質分析在田邊三菱制藥株式會社的依達拉奉注射液IF文件[1]中，較詳細地討論了產品中可能含有的雜質，如表1所示。

表1 田邊三菱制藥株式會社依達拉奉注射液IF文件中的雜質

根據表1雜質結構信息可知，化合物a為依達拉奉二聚體雜質，降解物P1和降解物P3為依達拉奉與輔料發(fā)生相互作用而產生的雜質，降解物P2為苯肼。

同時，原研廠IF文件中提供的穩(wěn)定性研究結果顯示，依達拉奉注射液采用無色玻璃安瓿包裝，在不同條件下放置時，雜質有變化的趨勢。如25℃長期放置穩(wěn)定性試驗中，降解物P1由0時的0.04%～0.06%變?yōu)?.21%～0.25%（12個月）、0.25%～0.28%（36個月），但其他雜質變化不明顯，大多由0.01%～0.04%變?yōu)?.06%～0.08% （36個月），均能夠維持在0.1%以下；在40℃/75%相對濕度條件下進行的6個月加速穩(wěn)定性試驗中，可以檢測到化合物a、降解物P1、降解物P2分別為0.23%、0.27%、0.05%；在影響因素試驗中，在50℃放置3個月可以檢測到降解物P1、降解物P2分別為0.43%、0.09%，在2 000 lx/25℃放置4周，未觀察到變化。

以上信息顯示，化合物a和降解物P1是依達拉奉注射液中含有的主要雜質，降解物P2為苯肼，屬于潛在遺傳毒性雜質，也需要進行研究和控制。

2.2.4 依達拉奉注射液日本藥典標準的分析在依達拉奉注射液日本藥典標準[10]中，采用兩套高效液相色譜法（HPLC）系統(tǒng)進行有關物質檢查。

系統(tǒng)一采用C18柱（5 μm，4.6 mm×15 cm），流動相為水-甲醇-醋酸（100∶100∶1），紫外檢測器240 nm檢測，柱溫約40℃，調整流速使主成分依達拉奉保留時間為4 m in左右，色譜圖記錄時間為主成分峰保留時間的7倍，采用主成分自身對照法，檢出的雜質不得大于0.2%。

系統(tǒng)二采用C18柱（5 μm，4.6 mm×15 cm），流動相為稀醋酸（1→100）-甲醇（3∶1，氨水溶液調整pH值為5.5），紫外檢測器240 nm檢測，柱溫約40℃，調整流速使主成分依達拉奉保留時間為11 m in左右，色譜圖記錄時間為主成分峰保留時間的2.5倍，采用主成分自身對照法，相對保留時間0.3的雜質不得大于0.4%，相對保留時間0.4的雜質不得大于0.1%，其他雜質不得過大于0.2%。

在依達拉奉注射液日本藥典標準中，對兩個特定雜質進行了單獨控制，由于僅提供了相對保留時間，目前還不能確定這兩個特定雜質的種類。

2.2.5 依達拉奉注射液降解雜質的控制綜合以上各方面信息，由于依達拉奉在水溶液狀態(tài)下穩(wěn)定性較差，需要在處方中添加抗氧劑等穩(wěn)定劑。在依達拉奉注射液的生產和貯藏過程中，可能產生二聚體等降解雜質，同時依達拉奉可能與輔料亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸等發(fā)生相互作用而產生雜質。另外作為潛在遺傳毒性雜質的苯肼，也需要進行嚴格控制。

對于特定雜質的研究和控制，通常建議采用外標法進行，雜質對照品可以外購，也可以自行制備。對于外購的雜質對照品，需要關注該對照品的用途、質量控制情況，在有效期內使用。對于自行制備的雜質對照品，需要建立制備方法，并對制得的對照品進行結構確證研究、純度標定研究，并建立質控標準和有效期。

3 討論

以上結合依達拉奉制備方法、依達拉奉穩(wěn)定性特征、依達拉奉注射液處方、原研廠IF文件、國外藥典等對依達拉奉注射液的雜質譜分析進行了討論。雜質控制是注射劑質量控制的重要指標之一，而雜質譜分析是建立合理可行的雜質檢測方法的基礎。作為注射劑生產者，需要高度關注雜質譜分析工作，不斷提升產品質量控制水平。

[1]PMDA.ラジカット注30 mg.[EB/OL].http://www.info.pmda.go. jp/go/pack/1190401A1023_3_04.

[2]劉燕華，萬渙，許軍，等.正交設計法選擇依達拉奉的合成條件[J].中國藥業(yè)，2006，15（21）：43-44.

[3]張學超.依達拉奉、拉米呋啶、醫(yī)藥中間體的合成開發(fā)研究[D].山西：山西大學，2011.

[4]吳祿勇，林小明，黃國華.乙酰乙酸乙酯合成實驗的方法改進[J].廣東化工，2012，39（11）：4-5.

[5]胡云根，徐正安.苯肼的合成工藝研究[J].江西化工，2006（4）：187.

[6]EMA.Guideline on the Limit of Genotoxic Impurities.[EB/OL]. http：//www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500002903.pdf.

[7]付桂英，溫明鈴，賈立華，等.處方因素對依達拉奉注射劑穩(wěn)定性的影響[J].中國新藥雜志，2005，14（6）：726-728.

[8]林冠雄，廖榮壽.依達拉奉注射液制劑處方及工藝的研究[J].海峽藥學，2005，17（5）：17-20.

[9]PMDA.エダラボン點滴靜注液30 mg「ケミファ」.[EB/OL]. http：//www.info.pmda.go.jp/go/pack/1190401A1171_1_02.

[10]Supplement I，JP XVI.Edaravone Injection[S].2011：2401-2402.

Analysis on Impurity Profile of Edaravone Injection

Xu Zhenyu（Center forDrug Evaluation of the State Food and Drug Administration，Beijing 100038，China）

Impurity control isone of the important itemsof quality control of injections，and impurity profile analysis is thebasis for theestablishmentof a reasonable and feasiblemethod for detection of impurities.In thisarticle，impurity profile analysis of edaravone injection was discussed based on the preparation technique，stability characteristics，and formulation analysisof edaravone injection，and referring to the research documentof the productand foreign pharmacopoeia，etc.

Edaravone Injection；Impurity Profile；Analysis

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.08.007

2014-04-21）

許真玉，女，博士。研究方向：藥物技術審評。E-mail：xuzhy@cde.org.cn