于萍 劉慶華 楊巧麗 徐磊 張沾

[摘要]目的：以C57BL/6小鼠為動物模型，觀察奧斯曼生眉液對毛發(fā)生長及生長周期的影響。方法：采用8%硫化鈉脫毛法誘導(dǎo)小鼠毛發(fā)由休止期進入生長期。脫毛次日，分組涂藥，每日涂抹小鼠脫毛區(qū)，連續(xù)23天，記錄小鼠皮膚顏色變化時間及脫毛區(qū)毛發(fā)生長狀況及對毛囊組織學(xué)特征和毛囊數(shù)目的影響。結(jié)果：①與蒸餾水對照組比較，osm01、02樣品及陽性對照均可明顯縮短C57BL/6小鼠脫毛后皮膚顏色由粉紅變黑的時間（P<0.05），osm01樣品還可明顯縮短皮膚顏色由黑到毛發(fā)長出皮表的時間；②小鼠皮膚結(jié)構(gòu)完整,組織無炎癥；與蒸餾水對照組比較，osm01和陽性對照組真皮淺層毛囊數(shù)明顯增加（P<0.05）。結(jié)論：奧斯曼生眉液可誘導(dǎo)和延長毛發(fā)生長期，推遲毛發(fā)退行期，促進C57BL/6小鼠毛發(fā)生長。

[關(guān)鍵詞]奧斯曼生眉液；C57BL/6小鼠；毛發(fā)生長；毛發(fā)周期

[中圖分類號]R332 [文獻標(biāo)識碼]A [文章編號]1008-6455（2014）06-0461-04

Study on effects of Osmen Plant Eyebrow Growing liquid on hair growth in C57 BL/6 mice

YU Ping1,LIU Qing-hua1.2,YANG Qiao-li2,XU Lei2,ZHANG Zhan1

(1.Xinjiang Osmen Biological Resources co.,ltd,Urumqi 830026,Xinjiang,China；2.Xinjiang Institute of Marteria Medica)

Abstract:ObjectiveTo observe the effects of Osmen Plant Eyebrow Growing liquid on hair growth and hair cycle of C57BL/6 mouse alopecia mode.MethodsAnagen was induced over the back of telogen mice by epilation of 8% Na2S.The experimental mice were using respectively medication for 23 days,meanwhile the daily changes of skin color and the final hair growth characteristic were observed.Furthermore,the effects of its on hair growth were evaluated by measuring morphology and the number of follicle in mice.Resultsosm01,02 samples and the positive control can significantly shorten the C57BL / 6 mice after depilation turned from pink to black time (P<0.05),osm01 sample can be significantly reduced skin darkening of the skin to grow hair time table.Skin structure intact mice,tissue without inflammation,compared with distilled water control group,osm01 superficial dermis and positive control group significantly increased the number of follicles (P<0.05).ConclusionOsmen Plant Eyebrow Growing 1iquid not only can induce and prolong anagen,but also postpone catagen in C57BL/6 mice.Moreover,it can promote hair growth of experimental mice.

Key words:Osmen Plant Eyebrow Growing liquid;C57BL/6 mice;hair growt;gmwing phase of hair cycle

奧斯曼生眉液，由歐洲菘藍葉、何首烏根、訶子、側(cè)柏葉和黑種草籽五味中藥組成，具生眉、養(yǎng)眉功能，產(chǎn)品一經(jīng)上市，便以它鮮明的民族性、天然性和功效性立即引起社會各方面的關(guān)注，受到消費者的青睞，顯示出巨大的市場潛力[1]。但由于產(chǎn)品開發(fā)較早，提取工藝落后，存在雜質(zhì)含量高，產(chǎn)品在高溫高濕環(huán)境下不穩(wěn)定等缺點。為提高產(chǎn)品質(zhì)量，奧斯曼課題組采用國際先進的超濾納濾技術(shù)對生眉液功效成分提取液進行分離純化、濃縮，降低雜質(zhì)，提高有效物含量，解決產(chǎn)品穩(wěn)定性問題，同時提高產(chǎn)品的生眉和養(yǎng)眉效果。本文以藥效學(xué)數(shù)據(jù)作為主要評價指標(biāo)，通過研究考察膜工藝與原工藝生眉液產(chǎn)品對C57BL/6小鼠毛發(fā)生長及生長周期的影響，來評價奧斯曼生眉液的功效性。

1實驗材料

1.1 儀器：CMl900冰凍切片機；顯微鏡；解剖顯微鏡；顯微外科器械等。

1.2 試劑與實驗動物

1.2.1 試劑：osm01 膜工藝制備的生眉液，批號20130405；osm02原工藝制備的生眉液，批號20111201（均由新疆奧斯曼生物資源有限公司提供，）陽性對照，章光101育發(fā)劑（北京章光101科技發(fā)展有限公司，市購，批號20120701）；硫化鈉、石蠟、甲醛、酒精、二甲苯、伊紅染液、蘇木精染液（均市購）。

1.2.2 實驗動物：近交系C57BL/6小鼠，雌性，6～8周齡，體重15～20g，選擇皮膚粉紅、毛發(fā)處于休止期的小鼠，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供。

2實驗方法

2.1 小鼠毛發(fā)生長周期的影響：將小鼠背部用8%的硫化鈉脫毛，去毛面積約4cm2，2min后用濕布擦去，保證局部毛發(fā)完全脫掉[2]。脫毛次日，選取脫毛區(qū)光滑且無損傷小鼠隨機分為蒸餾水對照組、陽性對照組及osm01、02樣品組，每組8只。各組均于脫毛局部直接涂抹給藥，每天涂抹1次，每次涂0.2ml，連續(xù)23天。每天觀察小鼠皮膚顏色變化，分別記錄每只小鼠脫毛區(qū)皮膚顏色從粉紅色到開始變黑的時間，皮膚由黑到毛發(fā)長出皮膚表面的時間，采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，用方差分析對組間數(shù)據(jù)進行分析。

2.2 小鼠皮膚組織學(xué)的觀察：毛發(fā)生長周期皮膚實驗結(jié)束后，處死小鼠切取各小鼠給藥背部相同位置皮膚組織塊，10%甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋切片，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察小鼠皮膚毛囊的組織學(xué)變化，觀察指標(biāo)如下：①一般組織學(xué)檢查：觀察皮膚完整性，有無充血、水腫、炎細胞浸潤等反應(yīng)及程度；②顯微鏡觀察，淺層毛囊計數(shù)，采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，用方差分析對組間數(shù)據(jù)進行分析。

3實驗結(jié)果

3.1 各組藥物對毛發(fā)周期的影響：小鼠脫毛后，皮膚呈現(xiàn)粉紅色，毛發(fā)進入休止期，涂藥4～9天后，陽性對照藥組和osm01、02組小鼠皮膚開始發(fā)黑，8～10 天，蒸餾水對照組開始變黑，統(tǒng)計結(jié)果表明，與蒸餾水對照組比較，osm01、02樣品及陽性對照均可明顯縮短C57BL/6小鼠脫毛后皮膚顏色由粉紅變黑的時間（*P<0.05或**P<0.01），osm01樣品還可明顯縮短皮膚由黑到毛發(fā)長出皮表的時間。結(jié)果見表1和圖1。

3.2 對小鼠皮膚組織學(xué)的影響：檢查結(jié)果表明，小鼠皮膚結(jié)構(gòu)完整，被覆鱗狀上皮完整，角化層無增厚，真皮內(nèi)無血管擴張充血、炎細胞浸潤。各組藥物對毛囊個數(shù)的影響，與蒸餾水對照組比較，osm01和陽性對照組真皮淺層毛囊數(shù)明顯增加（*P<0.05）。統(tǒng)計結(jié)果見表2和見圖2～5。

4討論

4.1實驗結(jié)果分析：本文通過觀察C57BL/6近交系小鼠給藥后毛發(fā)生長周期的變化以及小鼠毛囊計數(shù)結(jié)果，反映出給藥對C57BL/6近交系小鼠毛發(fā)生長周期的影響。實驗結(jié)果表明，奧斯曼生眉液的活性成分通過膜工藝進行分離純化后，能明顯縮短C57BL/6近交系小鼠毛發(fā)生長由休止期進入生長期以及毛發(fā)長出皮表的時間，生毛發(fā)的效果比原有工藝產(chǎn)品顯著提高。對小鼠皮膚組織學(xué)的檢查結(jié)果表明奧斯曼生眉液安全性比較高，對皮膚基本無刺激。然而人與動物存在種屬差異，故奧斯曼生眉液的生眉效果和安全性有待進一步臨床研究加以證實。

4.2 實驗方法的探討： C57BL/6近交系小鼠是目前用來觀察毛發(fā)周期及毛發(fā)再生的較為普遍的動物模型，因其本身皮膚顏色會隨毛發(fā)處于不同的生長周期而改變，能非常直觀地反映出藥物對毛發(fā)生長的影響[3-4]。C57BL/6小鼠在6～8周飼養(yǎng)良好狀態(tài)下，所有毛囊均由生長期進入休止期，而且生理狀態(tài)下不再自發(fā)進入生長期[5]。經(jīng)過人工脫毛或拔毛等刨傷刺激后可誘導(dǎo)其毛發(fā)進入生長期。該小鼠軀干皮膚的黑素細胞只存在于毛囊中，而且僅于生長期時合成黑色素并傳遞給角質(zhì)形成細胞，使皮膚變?yōu)楹谏?，至退行期，黑素的生成減少，皮膚呈灰色，至休止期黑素的生成完全停止，使皮膚變?yōu)榉奂t色。因此可通過C57BL/6小鼠皮膚顏色變化周期、組織學(xué)指標(biāo)觀察，綜合評價藥物的功效和安全性[6]。

章光101是國內(nèi)生發(fā)知名品牌，在生毛發(fā)行業(yè)中市場對其認可度較高[7]。在生毛發(fā)實驗中，通常將其作為陽性對照組，用來觀察實驗組的功效。osm01給藥組、osm02給藥組和陽性對照組與蒸餾水組比較，osm01給藥組和陽性對照組都有顯著性差異，osm02給藥組則無顯著性差異；osm01給藥組和osm02給藥組與陽性對照組比較，則都無顯著性差異。本文通過實驗證明膜工藝產(chǎn)品osm01生眉液能誘導(dǎo)C57BL/6小鼠毛發(fā)生長，縮短從休止期進人生長期的時間，增加毛囊數(shù)目。

4.3 奧斯曼生眉液促進眉毛生長的機制探討：歐洲菘藍葉[8]、訶子和側(cè)柏葉具有殺菌改善毛囊環(huán)境（對皮膚起到?jīng)鲅?、抗菌和止癢的作用）、何首烏根和黑種草籽具有滋養(yǎng)（促進新陳代謝、供給毛發(fā)再生長的營養(yǎng)物質(zhì)）[9]、側(cè)柏葉防脫（給予毛母細胞一定的刺激，促進毛發(fā)健康生長）[10]，奧斯曼生眉液精選這五種植物，通過膜工藝分離純化、濃縮有效成分配制而成。奧斯曼生眉液就是通過這五種植物的上述作用來改善眉部毛囊生理功能和微循環(huán)狀態(tài)，激活毛囊母細胞，促進毛發(fā)生長的。

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[收稿日期]2014-01-15[修回日期]2014-03-04

編輯/張惠娟

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