任培華 張志敏 譚瑋璐 秦道建 郭琪瑜 黃恩杰

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510120；2.廣州醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 510182）

全真一氣湯多糖對慢性心功能不全大鼠TNF-α和IL-6的影響*

任培華1△張志敏1譚瑋璐1秦道建2郭琪瑜2黃恩杰2

（1.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510120；2.廣州醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 510182）

目的 觀察全真一氣湯多糖對慢性心功能不全模型大鼠心功能、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-6（IL-6）的影響。方法 應(yīng)用尾靜脈注射阿霉素的方法建立慢性心力衰竭大鼠模型，隨機分為模型組，卡托普利組，多糖低、中、高劑量組，并設(shè)立空白對照組，每組10只。造模后第2周開始給藥?？ㄍ衅绽M給予卡托普利2.25mg/kg；多糖低、中、高劑量組分別給予全真一氣湯多糖（0.3，0.9，2.7g/kg），每日1次。空白對照組和模型組給予等體積的蒸餾水，共4周。觀察全真一氣湯多糖對心衰模型大鼠心功能，TNF-α，IL-6的影響。結(jié)果 模型組的LVEDV最高，多糖低、中、高劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；模型組LVEF值最低，多糖低、中、高劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；模型組的TNF-α，IL-6的水平最高，與多糖各劑量組比較其差別均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論 全真一氣湯多糖可以改善心衰模型大鼠心功能，降低心衰模型大鼠血清的TNF-α，IL-6水平。

全真一氣湯多糖 慢性心功能不全 心功能 腫瘤壞死因子-α 白介素-6

慢性心力衰竭（CHF）是由于多種原因引起的心室充盈或射血能力受損的一種臨床綜合征，是多種心臟疾病的終末階段。有研究結(jié)果顯示［1］，我國心衰患病率為0.9％，其中男性為0.7％，女性為1.0％。慢性心力衰竭嚴重影響患者的生活質(zhì)量，病死率高，預(yù)后不良。本課題組采用全真一氣湯治療慢性心力衰竭取得了滿意的療效。有研究表明復(fù)雜的細胞因子網(wǎng)絡(luò)參與了心力衰竭的發(fā)展，其能夠通過分別的機制促進心室重構(gòu)，引起收縮功能障礙。本研究通過觀察全真一氣湯多糖對慢性心力衰竭模型大鼠心功能、TNF-α和IL-6的影響，探討本方的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 實驗動物選用SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（250±50）g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗中心提供。動物許可證號：SYXK（粵）2013-0085。

1.2 試劑 全真一氣湯多糖由清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗中心提供（每克多糖浸膏相當(dāng)于生藥3.5g）。阿霉素（多柔比星注射液）由深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號1307E1），卡托普利片由中美上海施貴寶制藥有限公司生產(chǎn)（批號：1304031H）。TNF-α（批號E-30633）和IL-6（批號E-30644）的檢測試劑盒由北京誠林生物科技有限公司提供。

1.3 主要儀器 IE33彩色多普勒超聲診斷儀（美國飛利浦公司）；多功能酶標儀，美國Becton Dick-inson公司；臺式高速離心機（TGL-16G），電子天平（BS210S），-30℃冰箱，KQ3200E型超聲波清洗器，LG15-W高速離心機，721分光光度計。

1.4 分組與造模 實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3d，將SD大鼠按6∶1的比例隨機分為造模組和空白對照組。造模組給予尾靜脈注射阿霉素（2mg/kg），每周1次，共6周復(fù)制心衰模型，空白對照組每周給予尾靜脈注射同體積的0.9％氯化鈉注射液，共6周。造模成功后，將造模組大鼠隨機分為模型組、多糖低劑量組、多糖中劑量組、多糖高劑量組和卡托普利組。每組10只，共60只。

1.5 給藥方法 造模后2周開始給藥，多糖低劑量組給予全真一氣湯多糖0.3g/kg，多糖中劑量組給予全真一氣湯多糖0.9g/kg，多糖高劑量組給予全真一氣湯多糖2.7g/kg，卡托普利組給予卡托普利2.25mg/kg。以上藥物配成溶液，按照0.5mL/100g BM劑量每日給大鼠灌服1次，共4周?？瞻讓φ战M和模型組給予等量的蒸餾水灌胃。

1.6 心臟彩超檢測 實驗結(jié)束后用腹腔注射水合氯醛麻醉，脫毛劑給大鼠胸部脫毛，備皮后仰臥位于診查床上，采用美國飛利浦公司IE33彩色多普勒超聲診斷儀，以探頭頻率1～5MHz，行經(jīng)胸超聲心動圖檢查。M型超聲于胸骨旁長軸切面測量左室射血分數(shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（LVFS）和左室舒張末容積（LVEDV），以上數(shù)據(jù)均測量3個心動周期取平均值。

1.7 TNF-α和IL-6的檢測 實驗結(jié)束后，用腹主動脈取血，常規(guī)離心，取血清，-30℃冰箱保存，所有取材完畢后一起檢，TNF-α和IL-6的檢測試劑盒均由北京誠林生物科技有限公司，采用酶免法，嚴格按照說明書操作。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。實驗數(shù)據(jù)以（±s）表示，統(tǒng)計方法應(yīng)用單因素方差分析。多組間計量資料均數(shù)比較時先進行方差齊性的Levene檢驗，方差齊時，采用One-Way ANOVA的LSD法；方差不齊時，采用One-Way ANOVA的Tamhane’T2法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組模型大鼠LVEDV，LVEF，LVFS的比較（±s）

表1 各組模型大鼠LVEDV，LVEF，LVFS的比較（±s）

與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與卡托普利組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組 別 n LVFS（％）空白對照組 10 48.70±2.40**模型組 8 32.00±3.20卡托普利組 9 34.44±1.94 LVEDV（mL） LVEF（％）0.38±0.045** 86.20±2.89**0.60±0.043 62.25±3.37 0.53±0.045** 69.11±3.17**多糖低劑量組 10 34.30±2.98 0.52±0.036** 66.40±3.89*多糖中劑量組 9 0.49±0.043**△ 74.11±3.52**△△ 40.66±2.96**△△多糖高劑量組 9 0.43±0.030**△△78.22±3.23**△△ 44.55±2.74**△△

2.2 全真一氣湯多糖對模型大鼠TNF-α的影響 見表2。各組間TNF-α比較，模型組的TNF-α值最高，空白對照組的TNF-α值最低，多糖低、中、高劑量組的TNF-α值明顯降低，與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），多糖高劑量組與卡托普利組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組模型大鼠TNF-α和IL-6的比較（ng/mL，±s）

表2 各組模型大鼠TNF-α和IL-6的比較（ng/mL，±s）

組 別 n空白對照組 10模型組 8卡托普利組 9 TNF-α IL-6 157.40±6.44** 82.25±5.24**215.05±16.32 106.75±6.69 183.90±13.48** 95.80±5.17*多糖低劑量組 10 175.63±9.34** 86.92±2.35**△△多糖中劑量組 9 179.86±13.82** 92.23±5.39**多糖高劑量組 9 171.23±7.62**△ 89.65±3.67**△

2.3 全真一氣湯多糖對模型大鼠IL-6的影響 見表

2 結(jié)果

2.1 全真一氣湯多糖對模型大鼠心功能的影響 見表1。實驗后模型組的LVEDV最高，空白對照組的最低，多糖低、中、高劑量組的LVEDV明顯降低，與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），多糖中、高劑量組與卡托普利組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。各組間LVEF比較，空白對照組最高，模型組最低，多糖低、中、高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；多糖中、高劑量組與卡托普利組差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。各組間LVFS比較，空白對照組最高，模型組最低，多糖中、高劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；多糖中、高劑量組與卡托普利組比較，亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。2。各組間IL-6比較，空白對照組的IL-6值最低，模型組的IL-6值最高，多糖低、中、高劑量組的IL-6值明顯降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），多糖低、高劑量組與卡托普利組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。

3 討論

慢性心力衰竭是由于多種原因引起的心室充盈或射血能力受損的一種臨床綜合征，是多種心臟疾病的終末階段。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為慢性心力衰竭時存在神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)的過度激活，并以心室重構(gòu)為主要特征［1］。目前治療以提高心衰患者的生活質(zhì)量，改善遠期預(yù)后，降低死亡率為主要目標，而探索有效的中西醫(yī)結(jié)合治療措施是達到這個目標的重要途徑。本課題組采用全真一氣湯治療慢性心力衰竭療效滿意。全真一氣湯為清代名醫(yī)馮兆張創(chuàng)立，方由熟地黃、麥冬、白術(shù)、人參、熟附子、牛膝、五味子組成，其中熟地黃滋陰補腎，麥冬補肺潤燥，白術(shù)補脾利水，三者配伍，自有金水相生之妙，共達肺、脾、腎三臟同補之功；人參大補元氣；附子可引火歸元；牛膝補腎納氣；五味子收斂五臟之正氣。諸藥配伍，補中有瀉，有大補真元、溫腎健脾、補氣利水之效之功。張志敏將68例頑固心衰患者隨機分為治療組與對照組，兩組均予西醫(yī)常規(guī)治療，治療組加服全真一氣湯。結(jié)果治療組總有效率明顯高于對照組，表明全真一氣湯有治療心衰的作用［2］。本研究表明，全真一氣湯多糖能夠降低心衰模型大鼠的左室舒張末容積，提高左室射血分數(shù)，能夠改善模型大鼠的心功能。

研究證實炎癥因子的長期慢性激活可引起心肌損傷，促進心室重構(gòu)，導(dǎo)致心功能的惡化，是CHF患者疾病嚴重程度、預(yù)后和死亡的獨立預(yù)測因子。血清TNF-α濃度升高程度與CHF的嚴重程度呈正相關(guān)，是心衰患者死亡的獨立預(yù)測因子。TNF-α可使心肌收縮力下降，誘導(dǎo)心肌細胞凋亡，導(dǎo)致心肌纖維化，促進心室重構(gòu)的進展。TNF-α具有增加化腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）在外周組織的活性，獨立誘導(dǎo)血管緊張素Ⅱ1型受體的上調(diào)，增強血管緊張素Ⅱ促纖維化的作用［3］。TNF-α還可增強基質(zhì)金屬蛋白酶活性，促進細胞外基質(zhì)積聚而誘導(dǎo)心肌重構(gòu)，導(dǎo)致心功能減退［4］。IL-6是一種多功能的細胞因子，可作用于許多組織細胞，發(fā)揮著不同的生物學(xué)作用，比如免疫調(diào)節(jié)、防御作用、刺激造血和應(yīng)激反應(yīng)等等。許多研究結(jié)果證實患者心衰時血漿中IL-6水平顯著增高，且隨心衰的加重而升高。張偉英等用ELISA法檢測71例CHF患者和50例健康人（對照組）血清中白細胞介素-6（IL-6）的水平，并用彩色多普勒超聲心動圖測定心功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)慢性心衰患者血漿IL-6水平明顯高于對照組，并與左室射血分數(shù)、左室舒張末期內(nèi)徑、左室收縮末期內(nèi)徑、心胸比值顯著相關(guān)［5］。Chrysohoou等檢測101例CHF患者，發(fā)現(xiàn)IL-6水平與左心房功能受損和更嚴重的左心室舒張和收縮功能不全相關(guān)，IL-6水平尤其與左心房功能和左心室的收縮功能不全呈負相關(guān)［6］。

本研究表明，全真一氣湯多糖能夠降低心衰模型大鼠的血清TNF-α、IL-6水平，全真一氣湯多糖改善心衰的作用可能是通過調(diào)節(jié)相關(guān)炎癥因子的活性而實現(xiàn)的。

［1］Greenberg B.J Treatment of heart failure：state of the art and prospectives［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2001，38：S59.

［2］張志敏.全真一氣湯配合西藥治療頑固性心力衰竭療效觀察［J］.中國中醫(yī)急癥，2005，14（8）：714-415.

［3］于欣，楊震，韓學(xué)波.慢性心力衰竭中細胞因子的變化及其臨床意義［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6（19）：1636-1640.

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［5］張偉英，巢毅，黃琦磊.心功能不全患者血漿TNF-α、IL-6、IL-10水平與心功能狀態(tài)的關(guān)系［J］.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，41（6）：565-567.

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Effects of Polysaccharide of Quanzhenyiqi Decoction on TNF-α and IL-6 of Rat Model with Chronic Heart Failure

REN Peihua，ZHANG Zhimin，TAN Weilu，et al.
The First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，510120，China

Objective：To observe the effects of polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction on cardiac function，TNF-α，and IL-6 of rat model with chronic heart failure.Method：Heart failure rat model was established by intravenous injection of adriamycin from tail.The experimental rats were divided into model group，Captopril group，polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction low-dose，medium dose，high-dose groups，and blank control group，with 10 rats in each group.Two weeks after modeling，intragastric administration was begun.Captopril group was administrated by captopril 2.25mg/kg while polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction low-dose，middle dose，and high-dose group were administrated by polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction 0.3g/kg，0.9g/kg，and 2.7g/kg respectively once a day.Blank control group and experimental groups were given the same volume of distilled water for 4 weeks.The effects of polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction on cardiac function，tumor necrosis factor-α（TNF-α）and interleukin-6（IL-6）of rat model were observed.Result：The LVEDV of model group was the highest.There were statistical significances between polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction low-dose，middle dose，high-dose groups and the model group（P＜0.05）.The LVEF of model group was the lowest.There were statistical significances between polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction low-dose，middle dose，high-dose groups and the model group（P＜0.05 or P＜0.01）.TNF-αand IL-6 in the model group was the highest compared with the other 3 different dose groups.The differences among them were statistically significant（P＜0.01）.Conclusion：Polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction can improve cardiac function and reduce serum TNF-αand IL-6 levels of rat model with heart failure.

Polysaccharide of Quanzhenyiqi decoction；Chronic heart failure；Cardiac function；TNF-α；IL-6

R285.5

A

1004-745X（2014）10-1796-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.10.009

2014-06-23）

廣東省自然科學(xué)基金項目（S2011040003766）

△通信作者