高 白，解 娜，薛逢貴，譚 穎，李 雪

（1.海南醫(yī)學(xué)院檢驗醫(yī)學(xué)系，海南 ?？?571199；2.海南醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，海南 海口 570102）

CD56、CD54在甲狀腺病變中的表達(dá)及意義

高 白1，解 娜2，薛逢貴2，譚 穎1，李 雪1

（1.海南醫(yī)學(xué)院檢驗醫(yī)學(xué)系，海南 ?？?571199；2.海南醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，海南 海口 570102）

目的檢測CD56、CD54在甲狀腺病變組織中的表達(dá)情況，探討CD56、CD54的表達(dá)在甲狀腺病變鑒別診斷中的作用。方法分別收集海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科73例甲狀腺乳頭狀癌、64例良性病變組織蠟塊。將137例石蠟標(biāo)本制做組織芯片。應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測CD56、CD54蛋白在甲狀腺病變組織中的表達(dá)情況。結(jié)果CD56在甲狀腺乳頭狀癌組織中大多表達(dá)缺失，表達(dá)率為14%，在良性甲狀腺病變組織中表達(dá)率高(92.2%)，兩者間表達(dá)率差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。CD54在甲狀腺乳頭狀癌及橋本氏甲狀腺炎組織中表達(dá)增高(69.9%vs 75.0%)，呈彌漫陽性表達(dá)，這兩組間表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；在其他良性甲狀腺組織包括結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和濾泡性腺瘤中，CD54表達(dá)較低(3.8%)，主要呈散在弱陽性表達(dá)，與甲狀腺乳頭狀癌組織相比，其表達(dá)差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論CD56在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)缺失，在甲狀腺良性病變組織中表達(dá)增高；CD54在甲狀腺乳頭狀癌及橋本氏甲狀腺炎中高表達(dá)，聯(lián)合檢測CD56、CD54對甲狀腺病變的鑒別診斷具有重要作用。

甲狀腺乳頭狀癌；CD56；CD54；組織芯片

甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的組織學(xué)類型，與乳頭狀良性增生、濾泡腺瘤鑒別有時較為困難，部分橋本氏甲狀腺炎常合并有甲狀腺乳頭狀癌，因而探索開發(fā)能應(yīng)用于甲狀腺癌鑒別診斷的標(biāo)記物至關(guān)重要。

CD56又稱為神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)，多數(shù)研究認(rèn)為CD56在PTC中表達(dá)缺失，具有一定的鑒別診斷意義[1-4]，然而也有報道認(rèn)為CD56在甲狀腺乳頭狀癌中也存在較高的表達(dá)率，其鑒別診斷意義不明確[5-6]。CD54即細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)，與CD56同屬于粘附分子免疫球蛋白超家族成員，近來有學(xué)者發(fā)現(xiàn)其在甲狀腺乳頭狀癌組織中高表達(dá)[7]，其結(jié)果尚需進(jìn)一步證實。據(jù)此，我們擴(kuò)大病例量，聯(lián)合檢測CD56、CD54，觀察其在甲狀腺病變中的表達(dá)情況，以明確CD56、CD54抗體在甲狀腺病變中的鑒別診斷作用。

1 材料與方法

1.1 材料 分別收集海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科檔存蠟塊137例，包括73例甲狀腺乳頭狀癌、28例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(含17例甲狀腺乳頭狀良性增生)、24例腺瘤、12例橋本氏甲狀腺炎組織蠟塊。甲狀腺乳頭狀癌組織材料中女性56例，男性17例，患者年齡21～74歲，≥45歲者34例，＜45歲者39例，平均32歲。其他病變中女性51例，男性13例，患者年齡13～86歲，≥45歲者39例，＜45歲者26例，平均37歲。所有病例均經(jīng)病理確診，顯微鏡下選擇有代表性的區(qū)域進(jìn)行標(biāo)記、取材、制作芯片。

1.2 試劑與方法 小鼠CD56、CD54單克隆抗體，PV-9000通用型二步法免疫組化檢測試劑盒，3，3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液，均為北京中山生物有限公司產(chǎn)品。常規(guī)免疫組化兩步法染色，每次染色均設(shè)有陽性對照、空白對照。陽性對照以已知陽性的甲狀腺病變標(biāo)本為陽性對照，空白對照用PBS代替一抗作為空白對照。

根據(jù)實驗研究的目的和需要，受體蠟塊設(shè)計為18×12點陣。光鏡下選擇HE標(biāo)本中適宜的樣本位置，對照相應(yīng)的供體蠟塊，每個標(biāo)本取兩點。把各組樣本的點陣按順序排放，設(shè)陣列孔的左上方第一排第一個孔為空白標(biāo)記，以免混淆方向。137個蠟塊制作成兩個組織芯片。免疫組化及組織芯片制作具體操作步驟見應(yīng)用文獻(xiàn)[8]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 所有統(tǒng)計均由SPSS18.0統(tǒng)計軟件完成。所有免疫組化陽性判定以記數(shù)資料進(jìn)行四表格χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD56在甲狀腺病變中的表達(dá)情況 CD56在甲狀腺乳頭狀癌及濾泡腺癌組織中大部分表達(dá)陰性，僅個別病例弱陽性表達(dá)(14%，10/73)。在其他良性甲狀腺組織中表達(dá)率高，彌漫強陽性(92.2%，59/64)。 CD56在甲狀腺腺癌與甲狀腺其他良性病變中的表達(dá)率比較差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見表1和圖1。

2.2 CD54在甲狀腺病變中的表達(dá)情況 CD54在絕大部分甲狀腺乳頭狀癌中強陽性表達(dá)(69.9%，51/73)，在橋本氏甲狀腺炎中也存在較高的陽性表達(dá)(75.0%，9/12)，而在其他甲狀腺良性病變中表達(dá)率相對較低，如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中未見明確表達(dá)(0，0/28)，僅在個別腺瘤組織中有少許散在弱陽性的表達(dá)(8.3%，2/24)。CD54在甲狀腺乳頭狀癌與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、濾泡性腺瘤中的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(69.9%vs 3.8%，P＜0.01)。CD54在甲狀腺乳頭狀癌與橋本氏甲狀腺炎中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(69.9% vs 75.0%，P＞0.05)，見表1和圖1。

2.3 CD56、CD54蛋白在同一甲狀腺病變組織中的表達(dá)情況 甲狀腺乳頭狀癌病變中CD56、CD54的表達(dá)模式主要為CD56-/CD54+(49/73，67.1%)，而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、濾泡性腺瘤及橋本氏甲狀腺炎中不存在這種表達(dá)模式，這種組合性表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌與良性病變中差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，見圖1。

表1 CD56、CD54在各種甲狀腺組織中的表達(dá)情況（例）

圖1 CD56、CD54在甲狀腺病變中的表達(dá)（SP法）

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是頭頸部常見的一個惡性腫瘤，典型的形態(tài)學(xué)易于診斷，但在部分甲狀腺病變中可以見到假乳頭或乳頭狀增生、帶有毛玻璃樣核改變的腺瘤樣增生結(jié)節(jié)，形態(tài)學(xué)上與甲狀腺乳頭狀癌常難以區(qū)別；而良、惡性甲狀腺疾病的誤診將造成患者治療、精神上的巨大損失，因而尋找甲狀腺良、惡性病變的鑒別標(biāo)記物具有重要的意義。

CD56又稱為神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)，屬于免疫球蛋白超家族，正常表達(dá)于神經(jīng)元、星形細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等[2]。在多種腫瘤，如神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、NK/T細(xì)胞淋巴瘤、骨髓瘤等腫瘤中表達(dá)。有研究顯示，CD56在甲狀腺良性增生病變中表達(dá)增高，但在甲狀腺乳頭狀癌中存在失表達(dá)的現(xiàn)象，可能與甲狀腺癌轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后差相關(guān)。進(jìn)一步的研究表明CD56的失表達(dá)可作為甲狀腺乳頭狀癌的鑒別診斷要點[3-4]，但也有學(xué)者持相反的意見[5-6]。

CD54即細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)，也是免疫球蛋白超家族中的一個成員，它可與整合素家族成員結(jié)合，參與炎癥、變態(tài)反應(yīng)等促進(jìn)炎癥的發(fā)生與發(fā)展。甲狀腺病變中，橋本氏甲狀腺炎(HT)被認(rèn)為是一種自身免疫性疾病，多數(shù)報道認(rèn)為HT的濾泡細(xì)胞上有CD54的較高水平表達(dá)[9-10]；近來也有學(xué)者指出CD54在浸潤性PTC中存在一定的高表達(dá)率[7]，能否作為獨立的預(yù)后因素及診斷依據(jù)尚需更多的數(shù)據(jù)支持。

為確認(rèn)CD56、CD54在甲狀腺病變診斷中的作用，我們收集了137例甲狀腺病變組織，含73例甲狀腺乳頭狀癌組織，以保證樣本數(shù)量的統(tǒng)計學(xué)意義。采用組織芯片技術(shù)預(yù)防組織標(biāo)本處理的不一致性，多批次重復(fù)實驗結(jié)果。

與常規(guī)組織切片相比，組織芯片(Tissue chip)具有以下特點：①同時對多個樣品進(jìn)行分析，不僅提高工作效率，還節(jié)省大量的材料和試劑；②在同一張芯片上同時對不同的材料進(jìn)行檢測，避免因檢驗時間的先后及其他人為因素而造成的誤差，極大地改善了實驗條件的同質(zhì)性，從而提高檢測結(jié)果的可比性；③設(shè)計的靈活性大，既可將不同組織的標(biāo)本列陣于同一塊芯片上，也可將同種組織不同病理階段的標(biāo)本列陣在同一塊芯片上。

我們的實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CD56在73例PTC的僅小部分病例存在陽性表達(dá)，且陽性表達(dá)部位位于癌組織與正常組織交界處。癌旁良性甲狀腺組織、HT、FA等良性病變CD56多呈彌漫陽性表達(dá)，且表達(dá)率高，結(jié)果與文獻(xiàn)報道基本一致。CD54在大多數(shù)甲狀腺乳頭狀癌中呈現(xiàn)彌漫強陽性表達(dá)，橋本氏甲狀腺炎中也有較高的表達(dá)率，但在PTC與HT間CD54的表達(dá)率無顯著差異，而在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、腺瘤中幾乎無陽性表達(dá)。

形態(tài)學(xué)不典型病變中采用單個抗體的表達(dá)來鑒別診斷存在較大的風(fēng)險，而采用抗體套餐的方法可降低此種風(fēng)險。本研究發(fā)現(xiàn)中，在甲狀腺PTC中CD56表達(dá)缺失、CD54表達(dá)增高的病例有49例(49/73，67.1%)，良性病變不存在這中組合表達(dá)模式(P＜0.01)。

總之，CD56在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達(dá)缺失，CD54在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)增高，聯(lián)合應(yīng)用CD56、CD54對甲狀腺良惡性病變診斷的鑒別具有重要作用。

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Expressions of CD56and CD54in thyroid diseases tissues.

GAO Bai1,XIE Na2,XUE Feng-gui2,TAN Ying1,LI Xue1.

1.Department of Laboratory Medicine,Hainan Medical University,Haikou 571159,Hainan,CHINA;2.Department of Pathology,Hainan Medical University,the Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou 570102,Hainan,CHINA

ObjectiveTo detect the expression levels of CD56and CD54in different thyroid lesions,and discuss the application of CD56and CD54in the differential diagnosis of thyroid lesions.MethodsParaffin samples including 73 cases of papillary thyroid carcinoma(PTC)and 64 cases of thyroid benign hyperplasia tissues from pathology department of Hainan medical college affiliated hospital were collected to be made as tissue chips.And then immunohistochemical techniques were applied to detect the expression levels of CD56and CD54in thyroid lesions.ResultsThe expression level of CD56in benign tissue was higher than that in PTC(92.2%vs 14%,P＜0.01).Compared with the groups of nodular goiter and follicular adenoma,the CD56positive expression rate in PTC was higher with a significant difference(69.9%vs 3.8%,P＜0.01).However,there was no difference in the positive expression rate of CD56between PTC and Hashimoto's thyroiditis(69.9%and 75.0%,P＞0.05).ConclusionWith lower expression of CD56in PTC rather than in benign tumor and higher expression of CD54in PTC and Hashimoto's thyroiditis,the combined detection of CD56and CD54might contribute to differential diagnosis of the thyroid diseases.

Papillary thyroid carcinoma;CD56;CD54;Tissue Chip

R581

A

1003—6350（2014）24—3720—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.24.1449

2014-06-03)

海南省自然科學(xué)基金(編號：811206)；海南醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新性實驗項目(編號：201105)

解 娜。E-mail：68001358@qq.com