鄒同會(huì)，汪永強(qiáng)，鄒軍

(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院瀘州醫(yī)學(xué)院附屬內(nèi)江醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川內(nèi)江 641100)

高爾基體蛋白73與甲胎蛋白對(duì)肝癌診斷價(jià)值的研究

鄒同會(huì)，汪永強(qiáng)，鄒軍

(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院瀘州醫(yī)學(xué)院附屬內(nèi)江醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川內(nèi)江 641100)

目的探討甲胎蛋白(AFP)與高爾基體蛋白73(GP73)對(duì)肝癌早期診斷的價(jià)值。方法采用酶聯(lián)免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)對(duì)肝癌患者80例、肝硬化患者30例血清中AFP、GP73進(jìn)行檢測(cè)，30例健康體檢者作為對(duì)照。結(jié)果①肝癌組、肝硬化組、正常對(duì)照組AFP平均濃度為64.5 μg/L、50.1 μg/L、21.9 μg/L(肝癌組vs對(duì)照組P＜0.01，肝硬化組vs對(duì)照組P＜0.01，肝硬化組vs肝癌組P＜0.01)，肝癌組、肝硬化組、正常對(duì)照組GP73平均濃度為268.4 μg/L、192.3 μg/L、49.8 μg/L(P＜0.01)。②AFP診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.729，P=0.000，GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.892，P=0.000。AFP聯(lián)合GP73對(duì)肝癌診斷的ROC曲線下面積為0.902。結(jié)論GP73診斷肝癌的價(jià)值高于AFP，AFP+GP73聯(lián)合檢測(cè)不能提高診斷效率。

肝細(xì)胞癌；甲胎蛋白；高爾基體蛋白 73；ROC曲線

原發(fā)性肝癌(Primary hepatic cancer，PHC)是我國常見惡性腫瘤之一，其中約95%為肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)，死亡率高，在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于胃癌、食道癌而居第三位。多數(shù)肝癌早期患者缺乏典型的臨床癥狀和體征，因而導(dǎo)致病情的延誤。目前肝癌的早期診斷主要依靠聯(lián)合AFP等多種腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合免疫診斷，然而當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室開展的絕大多數(shù)常用腫瘤標(biāo)志物的敏感度和特異性各異，并不適合于早期篩查和普查。本實(shí)驗(yàn)研究的特異性強(qiáng)的新型肝癌標(biāo)志物將為肝癌的早期診斷提供可靠的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象本研究納入研究的為我院2012年3月至2013年1月收治的肝癌患者(HCC)80例、肝硬化30例，正常對(duì)照組30例，HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2010年NCCN指南，以上各組研究對(duì)象在性別、年齡方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本的采集與保存患者及查體者均清晨空腹采集靜脈采集3 ml，采血管為一次性真空促凝采血管，以3 000 r/min離心10 min，分離血清置入EP管并盡快放入-70℃冰箱待檢。

1.2.2 高爾基體蛋白73(GP73)檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，試劑盒購自熱景生物有限公司，采用雙抗體夾心法定量檢測(cè)血清或血漿中GP73含量，酶標(biāo)板上預(yù)包被抗GP73單抗，可與樣品中GP73反應(yīng)結(jié)合，配合加入HRP標(biāo)記GP73多抗，然后用TMB底物作用顯色，顯色強(qiáng)度與樣品中GP73的濃度呈正比。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度(OD)值，按照GP73校準(zhǔn)品制定濃度曲線，計(jì)算樣品中GP73的含量。

1.2.3 甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中AFP的水平，檢測(cè)嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用PASW17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量資料用方差分析，組間比較用LSD均值統(tǒng)計(jì)，單項(xiàng)診斷價(jià)值采用ROC曲線分析，AFP與GP73聯(lián)合的診斷價(jià)值采用SPSS17.0的Binary Logistic回歸，并產(chǎn)生各個(gè)體預(yù)測(cè)概率的新變量。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組、肝硬化組與正常對(duì)照組AFP濃度肝癌組、肝硬化組、正常對(duì)照組AFP平均濃度為64.5 μg/L、50.1 μg/L、21.9 μg/L，三組總體P=0.000，兩兩比較檢驗(yàn)水準(zhǔn)取a=0.017，肝癌組vs對(duì)照組P＜0.017，肝硬化組vs對(duì)照組P＜0.017，肝硬化組vs肝癌組P＜0.017。

2.2 肝癌組，肝硬化組與正常對(duì)照組GP73濃度GP73在肝癌組、肝硬化組、正常對(duì)照濃度為268.4 μg/L、192.3 μg/L、49.8 μg/L，三組經(jīng)單因素方差分析P=0.000，兩兩比較用LSD法均值統(tǒng)計(jì)表明：肝癌組vs對(duì)照組P=0.000，肝硬化組vs對(duì)照組P=0.000，肝癌組vs肝硬化組P=0.001。

2.3 AFP與GP73在診斷肝癌的價(jià)值經(jīng)ROC曲線分析顯示，AFP診斷肝癌的的ROC曲線下面積為0.729，P=0.000，GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.892，P=0.000，GP73診斷肝癌價(jià)值高于AFP。取GP73為127.02為最佳診斷分界點(diǎn)，正確診斷(Youden指數(shù))最大，為0.80。AFP與GP73聯(lián)合的診斷價(jià)值采用PASW的Binary Logistic回歸，并產(chǎn)生各個(gè)體預(yù)測(cè)概率的新變量，ROC曲線顯示AFP+GP73聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.902，較GP73單一指標(biāo)AUC為0.892比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.01)，見圖1。

圖1 AFP與GP73單項(xiàng)與聯(lián)合對(duì)肝癌的ROC曲線

3 討論

原發(fā)性肝癌是成年人最常見的惡性腫瘤之一，其術(shù)后復(fù)發(fā)率高，轉(zhuǎn)移率高，且預(yù)后差。對(duì)肝癌腫瘤相關(guān)標(biāo)志物研究，合理地進(jìn)行外周血腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，有助于肝癌的早期診斷、早期治療、干預(yù)以及預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)歸，提高肝癌患者的生存率。

除傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物外，目前從基因?qū)用鎸ふ倚碌哪[瘤標(biāo)志物一直是研究的熱點(diǎn)。近年來隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)DNA序列以為的調(diào)控機(jī)制異常在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用相當(dāng)普遍，DNA甲基化是真核細(xì)胞基因組最常見的一種表觀遺傳學(xué)修飾，在細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育等方面起著重要作用，腫瘤相關(guān)基因DNA甲基化研究取得了大量的研究成果，提示DNA甲基化研究對(duì)于腫瘤診斷、治療具有巨大的應(yīng)用潛力，作為腫瘤診斷的分子標(biāo)志物，各種抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)研究的最多，研究方法也未成熟[1]。在基因轉(zhuǎn)錄層面，miRNA和長(zhǎng)鏈非編碼lncRNA對(duì)肝癌診斷的分子標(biāo)志物研究頗多[2-3]，但從經(jīng)濟(jì)與實(shí)用方面來講，直接檢測(cè)外周血蛋白質(zhì)是最簡(jiǎn)便的方法。

甲胎蛋白(AFP)的檢測(cè)在臨床應(yīng)用最廣泛，AFP是目前肝癌診斷和預(yù)后的首選標(biāo)志物，它是胚胎專一性的甲種球蛋白，由胚肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和卵黃囊細(xì)胞合成，在胚胎第12周合成達(dá)高峰隨即下降，Tangkijvanich等[4]發(fā)現(xiàn)，當(dāng)肝癌患者血清AFP濃度＞400 ng/ml時(shí)，其腫瘤體積、肝葉受累、浸潤生長(zhǎng)及門靜脈血栓形成情況均較低血清AFP濃度組更嚴(yán)重，但AFP也受病毒性肝炎的影響，現(xiàn)在更趨向于檢測(cè)特異性AFP的檢測(cè)[5]，可提高診斷的敏感性與特異性。本研究顯示：肝硬化與肝癌患者血清中AFP都比對(duì)照組高，但肝硬化患者AFP水平明顯低于肝癌患者，經(jīng)ROC曲線分析顯示，AFP診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.729，診斷價(jià)值偏低。

GP73是定位于高爾基體的一種跨膜蛋白，該蛋白主要表達(dá)于人類多種組織上皮細(xì)胞，在正常肝臟細(xì)胞中低表達(dá)，文獻(xiàn)報(bào)道GP73蛋白能正確區(qū)分正常肝細(xì)胞、肝硬化與肝癌細(xì)胞，GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.824[6]，另有報(bào)道GP73診斷肝癌的ROC曲線下面積為0.900[7]，與本研究GP73單項(xiàng)診斷肝癌的ROC曲線面積為0.892，但AFP與GP73聯(lián)合的診斷價(jià)值采用SPSS的Binary Logistic回歸，用產(chǎn)生各個(gè)體預(yù)測(cè)概率的新變量做聯(lián)合檢測(cè)時(shí)的ROC曲線下面積為0.902，與GP73單項(xiàng)的0.892相比，并沒有提高多少，因此聯(lián)合檢測(cè)并沒有提高診斷價(jià)值，當(dāng)然還需加大樣本量進(jìn)行確認(rèn)。

綜上所述，GP73診斷對(duì)肝癌具有較高的診斷價(jià)值，聯(lián)合AFP檢測(cè)并沒有提高肝癌的診斷價(jià)值，

[1]Games G,Herman MD,Stephenen B.Gene silencing cancer in association with promoter hypermethylation[J].N Engl J Med,2003, 349:2042-2054.

[2]Wu XJ,Li Y,Liu D,et al.miR-27a as an oncogenic microRNA of hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J].Asian Pac J Cancer Prev,2013,14(2):885-889.

[3]Pan YF,Qin T,Feng L,et al.Expression profile of altered long non-coding RNAs in patients with HBV-associated hepatocellular carcinoma[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2013,33 (1):96-101.

[4]Tangkijvanich P,Anukulkamkusol N,Suwangool P,et al.Clinical characteristics and prognosis of hepatocellular carcinoma:analysis based on serum alpha—fetopmtein levels[J].J Clin Gastmenteml, 2000,31(4):302-308.

[5]Wu W,Yao DF,Yuan YM,et a1.Combined serum hepatomaspecific alpha-fetopmtein and circulating alpha fetopmtein mRNA in diagnosis of hepatocellular carcinoma[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int, 2006,5(4):538-554.

[6]趙運(yùn)勝,張麗娜,李洪成,等.血清GP73聯(lián)合AFP與CA199檢測(cè)在肝癌診斷中的臨床意義[J].中國腫瘤臨床,2013,40(1):29-31.

[7]姚建華.高爾基體蛋白GP73和甲胎蛋白聯(lián)檢在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床意義[J].放射免疫學(xué)雜志,2012,25(6):673-675.

Diagnostic value of Golgi protein 73 and AFP protein in patients with hepatocellular carcinoma.

ZOU Tong-hui, WANG Yong-qiang,ZOU Jun.Department of Laboratory Medicine,the Second Hospital of Neijiang City,the Affiliated Neijiang Hospital of Luzhou Medical University,Neijiang 631001,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo explore the value of alpha-fetoprotein(AFP)and Golgi protein 73(GP73)in the early diagnosis of hepatocellular carcinoma.MethodsAFP and GP73 were detected with enzyme-linked immunosorbent assay(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)in 80 patients with hepatocellular carcinoma and 30 patients with hepatocirrhosis.30 healthy subjects were selected as controls.Results①The mean concentrations of AFP in hepatocellular carcinoma group,hepatocirrhosis group and control group was 64.5,50.1,and 21.9 respectively,among which there were significantly differences(P＜0.01).The concentrations of GP73 in hepatocellular carcinoma group, hepatocirrhosis group and control group was 268.4,192.3 and 49.8 respectively,among which there were significantly differences(P＜0.01).②The areas under ROC curves of AFP and GP73 were 0.729 and 0.892 respectively in diagnosis of hepatocellular carcinoma.The area under ROC curve of AFP combined GP73 was 0.902 for diagnosis of hepatocellular carcinoma.ConclusionCompared with AFP,GP73 is more sensitive and accurate in diagnosis of liver cancer,and it is not necessary to test GP73 combined withAFP.

Hepatocellular carcinoma;Alpha-fetoprotein;Golgi protein 73;ROC curve

R735.7

A

1003—6350（2014）16—2398—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.16.0935

2014-03-09)

吳階平醫(yī)學(xué)基金會(huì)肝病實(shí)驗(yàn)診斷研究基金(編號(hào)：LDWMF-SY—2011C007)

鄒同會(huì)。E-mail：709578724@qq.com