崔 悅，趙 佳，王 曄，孫丹丹，張 瑩，劉 洋，趙小亮，牛曉紅，張美玉，王丹巧，高天樂，徐曉軍

（1.吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，吉林長春 130021；2.中國中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗中心，北京 100700；3.卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院，斯德哥爾摩瑞典 14186）

三叉神經(jīng)痛（trigeminal neuralgia，TN）是指在三叉神經(jīng)分布區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)的反復(fù)發(fā)作、短暫、劇烈的疼痛［1］。因其不斷增長的發(fā)病率和缺乏有效的治療方法，成為臨床治療的難題。由于TN的病因復(fù)雜，發(fā)病機制尚不明確，臨床前動物實驗與臨床實際情況差距較大，需進一步研究和探索，因此，建立與臨床癥狀、病理、生化機制及藥物反應(yīng)吻合性較好的動物模型至關(guān)重要。近年來，國內(nèi)外常用三叉神經(jīng)末梢、神經(jīng)干、神經(jīng)根、神經(jīng)節(jié)、神經(jīng)核等慢性損傷的方法制造TN動物模型，其中慢性縮窄環(huán)模型［2］因較好地模擬了TN血管壓迫學(xué)說，被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)性研究。

本實驗參考瑞典卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院 Hao等［3］和Dominguez等［4］的方法，采用赤蘚紅 B靜脈注射加激光照射，以模擬三叉神經(jīng)微循環(huán)障礙、神經(jīng)纖維脫髓鞘的病理機制，制作光化學(xué)損傷誘導(dǎo)的TN（photochemically-induced trigeminal neuralgia，PITN）大鼠模型。觀察其神經(jīng)支配顏面部位的機械痛閾變化，檢測其外周神經(jīng)系統(tǒng)三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1mRNA表達(dá)量及中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦紋狀體細(xì)胞外液中Glu濃度（前者為編碼致痛的P物質(zhì)前體的基因［5－7］，后者為興奮性氨基酸、重要的疼痛相關(guān)遞質(zhì)［8］），并觀察臨床常用鎮(zhèn)痛藥物加巴噴丁對其的影響，為PITN大鼠模型的建立及應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供SD大鼠，♂，體質(zhì)量180－250 g，動物許可證編號為SCXK（京）2006－0009。

1.2 藥品、試劑與儀器Glu、乙酸鈉、Erythrosin B（赤蘚紅B）、硼酸、庚烷硫酸鈉購于Sigma公司。鄰苯二甲醛（OPA）購于Aldrich公司。甲醇購于 Fisher Chemicals公司。EDTA、KH2PO4為北京化工廠生產(chǎn)。加巴噴丁膠囊（gabapentin capsules）購于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號為12031291No.107。SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒購于日本TaKaRa公司，RNA提取試劑盒、cDNA合成試劑盒及引物均由北京曠博生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

大鼠腦立體定位儀、顱鉆購于深圳瑞沃德公司。51000-20C Von Frey hairs疼痛測試包購于美國Danmic公司。氬離子激光器系統(tǒng)的主要部分D-35037 SA11118972氬離子激光發(fā)生器為德國Sacher Lasertechnik集團生產(chǎn)。微透析系統(tǒng)由美國Instech公司出品的五通轉(zhuǎn)環(huán)清醒活動裝置、瑞典CMA公司生產(chǎn)的透析膜長度為4 mm的 CMA/12探針及套管、CMA/470低溫樣品自動收集器、CMA/402微量泵組成。高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)由Aglient1200、G1321A化學(xué)工作站、熒光檢測器組成。熒光定量PCR設(shè)備7900HT購于美國ABI公司。

1．3 PITN大鼠模型的建立、實驗分組及行為學(xué)測評大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，用Von Frey hairs對其三叉神經(jīng)支配的面部觸須墊進行每日連續(xù)5次的刺激，直到大鼠對以上刺激反應(yīng)平靜。篩選出連續(xù)3 d痛閾值≥26 g的動物57只，隨機分為假手術(shù)對照組（n＝6）和 TN手術(shù)組（n＝51）。腹腔注射10%水合氯醛（350 mg·kg－1）麻醉，手術(shù)組在動物觸須墊上方眶下孔位置橫向剪開長度約1 cm的切口，鈍性分離局部肌肉，暴露出深部的眶下神經(jīng)（三叉神經(jīng)上頜支的終支），將神經(jīng)束挑出，并于右側(cè)頸靜脈插入導(dǎo)管，注入赤蘚紅B 0.3 m l（32.5 mg·kg－1，溶解于 0.9%的生理鹽水），立即將大鼠置于功率344 mW，波長458－514 nm的氬離子激光器下，使光斑準(zhǔn)確照射暴露的眶下神經(jīng)13 min（由于赤蘚紅B在體內(nèi)的半衰期短，需每5 min經(jīng)靜脈補充注射0.4 m l，直至照射結(jié)束）?？p合顏面部及頸部傷口，常規(guī)注射慶大霉素預(yù)防感染。假手術(shù)對照組大鼠暴露、剝離眶下神經(jīng)后即縫合。術(shù)后d 7開始用質(zhì)量單位由小至大的Von Frey hairs對動物術(shù)側(cè)觸須墊部位進行刺激，評價方法參照1999年Juhana等［9］的標(biāo)準(zhǔn)，將大鼠安置于鼠籠中，待其適應(yīng)周圍環(huán)境后對其進行測評，連續(xù)刺激5次，每次時間間隔≥1 s，將連續(xù)測評5次中出現(xiàn)3次搔抓、躲避、攻擊行為中的一項或一項以上陽性反應(yīng)的最小值視為三叉神經(jīng)支配的顏面區(qū)域機械痛閾值。連續(xù)3 d測得痛閾值≤4 g的動物視為造模成功。術(shù)后d 10，隨機抽取模型動物12只，分為模型組（與假手術(shù)對照組相同，投與等量生理鹽水）和加巴噴丁組（100 mg·kg－1），每組6只，記錄投藥前（0 min）、投藥后30、60 min的機械痛閾值。另取成模大鼠10只，每3 d測量機械痛閾值，觀察至術(shù)后d 60。

1．4 三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1m RNA的檢測3組實驗動物于給藥1 h后，麻醉下，取出患側(cè)三叉神經(jīng)節(jié)并迅速放入液氮保存。

將上述組織復(fù)溫后按照QuantoBio RNA提取試劑盒要求進行Total RNA的提取，測量Total RNA的濃度及260/280，符合標(biāo)準(zhǔn)后用QuantoBio cDNA合成試劑盒進行cDNA的合 成。Tac1上 游 引 物 序 列 為 5′-GGGCATGGTCAGATCTCTCACAA-3′，下 游 引 物 序 列 為 5′-TTATTTTACCGCTCACTGCTCGC-3′，擴增片段長度為191，以 cDNA為模板，β-actin為內(nèi)參，反應(yīng)體系：2×qPCR Mix 10μl，Primer-F（10 nmol·L－1）及 Primer-R（10 nmol·L－1）各 2μl，模板cDNA 10μg，以去離子水補足20μl體系。40循環(huán)反應(yīng)參數(shù)：95℃孵育5 min，95℃孵育15 s，58℃孵育45 s，反應(yīng)結(jié)束后，軟件自動分析熒光信號并將其轉(zhuǎn)換為各目的基因的起始拷貝數(shù)和Ct值，同時檢測內(nèi)參基因β-actin表達(dá)以控制樣本間mRNA質(zhì)量的變異。相對定量方法：根據(jù)擴增曲線設(shè)定循環(huán)閾值（cycle threshold，CT），以 ΔCT（目的基因CT值 －內(nèi)參基因CT值）比較各組間Tac1基因表達(dá)差異。ΔCT值與目的基因起始拷貝數(shù)呈負(fù)相關(guān)。

1．5 紋狀體細(xì)胞外液的取樣及G lu的檢測給藥測評結(jié)束后，大鼠在麻醉下，于右側(cè)紋狀體（A：＋0.2 mm，L：＋3.0 mm，V：－7.5 mm）埋植并固定微透析探針套管，次日在清醒狀態(tài)下插入微透析探針，并安置于清醒自由活動裝置中，進行活體腦內(nèi)微透析采樣。高效液相－柱前OPA衍生－熒光法檢測樣品中 Glu水平［10］。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理計量資料用±s表示，應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，兩樣本比較采用t檢驗；同一時間點多組間的比較采用多元方差分析。

2 結(jié)果

2．1 光化學(xué)誘導(dǎo)的TN模型大鼠的行為學(xué)改變與假手術(shù)對照組比較，模型組大鼠術(shù)后表現(xiàn)為迅速抓咬刺激物、后退、蜷縮身體靠向籠壁、連續(xù)搔抓受刺激部位。于術(shù)后d 7模型組51只大鼠均出現(xiàn)了不同程度的三叉神經(jīng)支配的顏面部機械閾值下降，持續(xù)3 d小于4 g的大鼠為32只，模型成功率為63%。成模大鼠手術(shù)后d 7、8、9連續(xù)3 d測量均值與術(shù)前對照，痛閾值由26降低為（1.60±1.74）g（P＜0.01，n＝32），假手術(shù)對照組由26 g降低為（25.39±1.06）g（n＝6），無明顯差異，見Fig 1。加巴噴丁投藥后30、60 min可以有效緩解疼痛，明顯提高機械痛域值，見Fig 2。另外用于模型穩(wěn)定性觀察的10只動物在術(shù)后d 7－60內(nèi)機械閾值穩(wěn)定在（0.71±1.24）g（n＝10）。未見疼痛恢復(fù)跡象，見 Fig 3。

Fig 1 Changes ofmechanicalwithdraw threshold of PITN rats（sham：n＝6；model：n＝32）

Fig 2 Effect of gabapentin on mechanicalwithdraw threshold of PITN rats（±s，n＝6）

Fig 3 Dynam icmonitoring ofmechanical withdraw threshold of PITN rats（sham：n＝8；model：n＝10）

2．2 TN模型大鼠三叉神經(jīng)節(jié)中Tac1基因mRNA表達(dá)量的變化實時熒光定量PCR技術(shù)檢測三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1 mRNA表達(dá)量結(jié)果顯示：模型組與假手術(shù)對照組相比其表達(dá)量明顯上調(diào)（P＜0.05），加巴噴丁抑制了造模引起的表達(dá)量上調(diào)，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見Tab 1。

2．3 TN模型大鼠紋狀體細(xì)胞外液中G lu水平的變化與假手術(shù)對照組相比，模型組紋狀體細(xì)胞外液中與疼痛密切相關(guān)的興奮性氨基酸Glu的含量明顯升高（P＜0.05），加巴噴丁對升高的Glu濃度顯示了抑制作用，給藥后60 min腦內(nèi)Glu含量迅速降低（P＜0.05），見Tab 1。

Tab 1 Tac1 mRNA expression in trigem inal ganglia and the G lu concentration in the striatum of TN rats（±s，n＝6）

Tab 1 Tac1 mRNA expression in trigem inal ganglia and the G lu concentration in the striatum of TN rats（±s，n＝6）

*P＜0.05 vs sham；＃P＜0.05 vs model

Group Tac1 mRNA（ΔCT） Glu/μmol·L－1 Sham 2.78±0.58 3.02±5.68 Model 1.92±0.34* 56.28±55.99*Gabapentin 2.58±0.2＃ 17.01±22.84＃

3 討論

原發(fā)性TN的發(fā)病機制至今尚不明確，能夠被廣泛接受并形成共識的是三叉神經(jīng)脫髓鞘。髓鞘脫失的神經(jīng)纖維與鄰近無髓鞘神經(jīng)纖維之間發(fā)生“短路”，輕微的觸覺即可因“短路”將神經(jīng)沖動快速傳輸至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，中樞的傳出沖動也可經(jīng)“短路”轉(zhuǎn)變?yōu)閭魅肷窠?jīng)沖動，如此反復(fù)累積疊加可迅速達(dá)到閾值，爆發(fā)TN的痛覺過敏或痛覺超敏［11］。

引起脫髓鞘主要原因是三叉神經(jīng)感覺根在入腦橋區(qū)受到血管的壓迫及神經(jīng)內(nèi)微循環(huán)障礙、髓鞘營養(yǎng)代謝紊亂。有學(xué)者在電鏡下觀察到Schwann細(xì)胞水腫、變性壞死及線粒體空化/壞死/崩解的現(xiàn)象［12］，支持脫髓鞘由神經(jīng)纖維缺血、缺氧引起的觀點。關(guān)于微循環(huán)障礙致神經(jīng)纖維脫髓鞘的病理過程，多數(shù)認(rèn)為首先是慢性缺血，然后是血－神經(jīng)屏障改變，最后導(dǎo)致神經(jīng)脫髓鞘。在這一過程中，神經(jīng)內(nèi)的巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)以及P物質(zhì)（SP）、Glu、降鈣素基因相關(guān)肽、β-內(nèi)啡肽、血管活性腸多肽等神經(jīng)肽類物質(zhì)均有參與，并發(fā)揮著重要作用。

目前，國內(nèi)外常用的TN動物模型有慢性縮窄環(huán)模型［13］、三叉神經(jīng)根埋植模型［14］、牙髓灌注模型［15］、暴露三叉神經(jīng)節(jié)模型、暴露三叉神經(jīng)根模型［16］等；也有人將青霉素等注射至大鼠的蛛網(wǎng)膜下腔［17］，或直接注射于大鼠三叉神經(jīng)脊束核［18］等，觀察動物的行為及丘腦、皮層的電生理指標(biāo)等變化。上述模型主要是在三叉神經(jīng)周圍或中樞施加刺激以模擬TN的部分病理機制和癥狀。但是手術(shù)方法復(fù)雜不易掌握、破壞腦組織過多引起共濟失調(diào)、或大量出血致死；或術(shù)后動物存活率不高、狀態(tài)不佳，影響行為學(xué)的觀察等是其存在的缺點。即使被廣泛應(yīng)用的慢性縮窄環(huán)模型也存在一定問題：神經(jīng)結(jié)扎的松緊程度沒有客觀定量，易隨操作者的力度而變化，導(dǎo)致個體間脫髓鞘病變程度的差異，且結(jié)扎所用鉻線可能帶來神經(jīng)毒性等，均會間接影響實驗的結(jié)果。

本實驗參考瑞典卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院的造模方法，采用定量的赤蘚紅B靜脈注射加一定波長和功率的激光照射方法誘發(fā)TN。上述學(xué)者的前期研究已經(jīng)證實：赤蘚紅B作為一種光敏劑，靜脈注射后迅速分布于全身毛細(xì)血管，因其代謝迅速，半衰期只有5 min，不易引起機體損傷，但在激光照射下則發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，其結(jié)果會導(dǎo)致照射局部血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫、損傷，引起血小板活化、聚集，同纖維蛋白一起形成血栓，局部組織發(fā)生微循環(huán)障礙、缺血性壞死，進而引起神經(jīng)纖維脫髓鞘的病理改變［19］。Kupers等［20］用光化學(xué)損傷誘發(fā)大鼠坐骨神經(jīng)微循環(huán)障礙，觀察到神經(jīng)纖維發(fā)生脫髓鞘改變。三叉神經(jīng)內(nèi)血供豐富，光化學(xué)損傷誘導(dǎo)了局部微循環(huán)障礙、髓鞘營養(yǎng)代謝紊亂、導(dǎo)致TN的基礎(chǔ)病變－神經(jīng)脫髓鞘病變，引起慢性神經(jīng)病理性疼痛癥狀。另有研究顯示，三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)有豐富的SP陽性神經(jīng)元，其中樞突達(dá)三叉神經(jīng)感覺核，脫髓鞘發(fā)生后，突觸前膜去極化，Ca2＋內(nèi)流，囊泡膜與突觸前膜融合釋放SP，經(jīng)突觸后膜NK1受體，介導(dǎo)疼痛信息的傳遞，并由此產(chǎn)生正反饋作用形成鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，結(jié)果使突觸前膜釋放更多的神經(jīng)肽及神經(jīng)遞質(zhì)，進一步增強其興奮性［21－22］。SP引起的異常沖動可快速誘發(fā)腦部中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增強，釋放大量興奮性氨基酸Glu，與突觸后膜上的促離子型受體結(jié)合，增加對Na＋、K＋的通透性，繼而引起細(xì)胞內(nèi)Ca2＋濃度升高、相關(guān)蛋白激酶激活、NO等傷害性信息傳遞介質(zhì)生成和c-fos基因表達(dá)等一系列級聯(lián)反應(yīng)［8］，進一步加快興奮性信息傳遞，產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛。本課題組的前期研究顯示：坐骨神經(jīng)部分損傷［23］和切口痛［24］模型大鼠隨著機械痛敏和冷痛敏的產(chǎn)生，其紋狀體細(xì)胞外液Glu、脊髓和腦脊液中SP含量明顯增加。上述研究均提示，SP、Glu參與了TN等神經(jīng)源性疼痛時痛覺過敏或痛覺超敏的產(chǎn)生和維持。

本實驗系統(tǒng)觀察了光化學(xué)損傷三叉神經(jīng)后，大鼠相應(yīng)部位7～60 d疼痛行為學(xué)的動態(tài)變化：其疼痛敏感程度與臨床TN符合，成模時間僅為1周，成功率可達(dá)63%，模型穩(wěn)定，在觀察的2個月內(nèi)未見恢復(fù)跡象，模型重復(fù)性較好、個體差異小、動物成活率在90%以上，且對臨床有效藥物加巴噴丁反應(yīng)敏感。由于該方法導(dǎo)致的神經(jīng)損傷和疼痛行為學(xué)改變的程度可隨光敏劑用量和激光照射時間調(diào)節(jié)，會更加靈活、方便使用。

該模型在病因、病理機制和發(fā)病過程上較好地模擬了TN微循環(huán)障礙和神經(jīng)纖維脫髓鞘改變，符合TN等神經(jīng)源性疼痛中相關(guān)調(diào)質(zhì)/遞質(zhì)的變化規(guī)律：外周神經(jīng)系統(tǒng)（三叉神經(jīng)節(jié)）內(nèi)編碼SP前體的基因Tac1mRNA表達(dá)量隨疼痛的產(chǎn)生和維持而上調(diào)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)（腦紋狀體細(xì)胞外液）中重要的疼痛相關(guān)遞質(zhì)Glu濃度隨疼痛的產(chǎn)生和維持而升高。臨床有效鎮(zhèn)痛藥物加巴噴丁對該模型發(fā)揮了明顯的鎮(zhèn)痛作用，表明該模型與TN的臨床治療效果有較好的吻合性。盡管本模型也存在一定的缺點與限制：實驗所必需的氬激光發(fā)射器價格較昂貴、占用實驗室空間較大；多次靜脈注射及分離神經(jīng)而較少傷害周圍組織及血管，需要操作精準(zhǔn)、實驗技術(shù)熟練等，但可以說對于TN的基礎(chǔ)研究和藥物篩選是可選擇的較好模型。此外，該方法也為缺血性神經(jīng)纖維脫髓鞘引起的其它外周神經(jīng)性疾病（如缺血性視盤病、血栓閉塞性脈管炎、福爾克曼氏攣縮、脛前綜合征等）動物模型的制作提供了參考。

參考文獻：

［1］王 福，張奎啟，裘 罡.三叉神經(jīng)痛的病因和發(fā)病機制學(xué)研究的進展［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2004，26（4）：307－10.

［1］Wang F，Zhang K Q，Qiu G.Progress about pathogenesis of trigeminal neuralgia［J］.JDalian Med Univ，2004，26（4）：307－10.

［2］Strittmatter M，Grauer M，Isenberg E，et al.Cerebrospinal fluid neuropeptides and monoaminergic transmitters in patients with trigeminal neuralgia［J］.JHeadache，1997，37（4）：211－6.

［3］Hao JX，Stohr T，Selve N，et al.Lacosamide；a new anti-epileptic，alleviates neuropathic pain-like behaviors in ratmodels of spinal cord or trigeminal nerve injury［J］.Eur J Pharmacol，2006，553（1－3）：135－40.

［4］Dominguez C A，Kouya P F，Wu W P，et al.Sex differences in the development of localized and spreadmechanical hypersensitivity in rats after injury to the infraorbital or sciatic nerves to creat a model for neuropathic pain［J］.Gend Med，2009，2：225－34.

［5］吳饒平，熊 偉，高 云.三叉神經(jīng)痛的分子發(fā)病機制的研究進展［J］.中國藥理學(xué)通報，2011，27（11）：1487－90.

［5］Wu R P，Xiong W，Gao Y.Progresson molecular pathogenesis of trigeminal neuralgia［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27（11）：1487－90.

［6］Sun R Q，Tu Y J，Lawand N B，et al.Calcitoningene-related peptide receptoractivation produces PKA-and PKC-dependentmechanical hyperalgesia and central sensitization［J］.J Neurophysiol，2004，92（5）：2859－66.

［7］趙云富，姜曉忠，劉 淵，等.神經(jīng)肽與三叉神經(jīng)痛發(fā)病關(guān)系的臨床研究［J］.實用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2002，18（1）：71－4.

［7］Zhao Y F，Jiang X Z，Liu Y，et al.Clinical investigation of neuropeptides in patientswith trigeminal neuralgia［J］.JPract Stomatol，2002，18（1）：71－4.

［8］黃云巧，楊建明，陳國強.谷氨酸與慢性疼痛［J］.昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，28（2B）：117－21.

［8］Huang Y Q，Yang JM，Chen G Q.Glutamate and chronic Pain［J］.JKunming Med Coll，2007，28（2B）：117－21.

［9］Juhana J，Heikkila，Guilbaud G.Phamacological studies on a rat model of trigeminal neuropathic pain：baclofen，but not carbamazepine，morphine or tricyclic antidepressants，attenuate the allodynia-like behaviour［J］.Pain，1999，79（2－3）：281－90.

［10］王 曄，王丹巧，崔 悅，等.CQM對三叉神經(jīng)痛模型大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其對腦內(nèi)興奮性氨基酸遞質(zhì)的影響［J］.中國中藥雜志，2013，38（20）：3354－9.

［10］Wang Y，Wang D Q，Cui Y，etal.The effectsof CQM on analgesia and exciting amino acid neurotransmitters in the brains of IoN injury ratmodels［J］.China JChin Mater Med，2013，38（20）：3354－9.

［11］Love S，Coakham H B.Trigeminal neuralgia：pathology and pathogenesis［J］.Brain，2001，124（12）：2349－55.

［12］Brien JP，Mackinnon SE，MacLean A R，etal.Amodel of chronic nerve compression in the rat［J］.Ann Plastysurg，1987，19（5）：430－5.

［13］Strittmatter M，Grauer M，Isenberg E，et al.Cerebrospinal fluid neuropeptides and monoaminergic transmitters in patients with trigeminal neuralgia［J］.JHeadache，1997，37（4）：211－6.

［14］Imamura Y，Kawamoto H，Nakanishi O.Characterization of heathyperalgesia in an experimental trigeminal neuropathy in rats［J］.Exp Brain Res，1996，116（1）：97－103.

［15］Burchiel K J.Abnormal impulse generation in focally demyelinated trigeminal roots［J］.Neurosurg，1980，53（5）：674－83.

［16］Foong FW，Satoh M，Takagi H.A newly devised reliablemethod for evaluating analgesic potencies of drugs on trigeminal pain［J］.Pharmacological Methods，1982，7（4）：271－8.

［17］Sakas D E，Whittaker K，Abbasi K H，etal.Experimentalmicroneuro-surgery of the trigeminal nerve：surgical technique for ganglionectomy and rhizotomy in the cat［J］.Neurosci Methods，1996，65（2）：137－41.

［18］王惠嵐，羅道樞，陳 江.大鼠三叉神經(jīng)痛模型的建立［J］.福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，40（5）：520－2.

［18］Wang H L，Luo D S，Chen J.Establishment of trigeminal neuralgia ratmodel［J］.JFujian Med Univ，2006，40（5）：520－2.

［19］Yu W，Kauppila T，Hultenby K.Photochemically-induced ischemic injury of the rat sciatic nerve：a light-and electronmicroscopic study［J］.JPeripher Nerv Syst，2000，5（4）：209－17.

［20］Kupers R，Yu W，Persson JK，et al.Photochemically-induced ischemia of the rat sciat ic nerve produces a dose-dependent and highly reproducible mechanical，heat and cold allodynia，and si gns of spontaneous pain［J］.Pain，1998，76（1－2）：45－59.

［21］Castellani M L，Galzio R J，F(xiàn)elaco P，et al.VEGF，substance P and strees，new aspects：a revisited study［J］.J Biol Regul Homeost Agents，2010，24（3）：229－37.

［22］Seino H，Seo K，Maeda T，Someya G.Behavioural and histological observation of sensory impairment caused by tight ligation of the trigeminal nerve inmice［J］.JNeurosciMethods，2009，181（1）：67－72.

［23］李 鵬，張美玉，王丹巧，等.青藤堿對SSNI模型大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及腦內(nèi)興奮性氨基酸遞質(zhì)的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2012，28（10）：1364－9.

［23］Li P，Zhang M Y，Wang D Q，et al.Effects of sinomenine on analgesia and exciting amino acid neurotransmitters in brain of SSNI ratmodel［J］.Chin Pharmacol Bull，2012，28（10）：1364－9.

［24］趙小亮，劉 洋，王 曄，等.青藤堿對切口痛模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其中樞神經(jīng)系統(tǒng)中P物質(zhì)含量的影響［J］.標(biāo)記免疫分析與臨床，2013，20（6）：422－6.

［24］Zhao X L，Liu Y，Wang Y，et al.Effects of sinomenine on analgesia and contentsof substance P in central nervous system of incisional pain ratmodel［J］.Label Immun Clin Med，2013，20（6）：422－6.