江杰，黃新顏，王利紅，李麗，孫文錦

HBV感染者病毒基因型分布特點及其與干擾素療效的關系

江杰，黃新顏，王利紅，李麗，孫文錦

目的研究HBV感染者病毒基因型分布特點及其與干擾素療效之間的關系。方法選取急性乙型肝炎（Acute hepatitis B ）8例，慢性乙型肝炎（CHB）120例，乙型肝炎肝硬化60例，肝細胞癌患者32例。提取血清HBV DNA，PCR擴增S區(qū)序列，對產(chǎn)物直接測序并上傳至斯坦福大學HBV數(shù)據(jù)庫，進行基因型分析；選取78例CHB患者（B基因型38例，C基因型40例），經(jīng)干擾素-α治療48周，分析干擾素治療不同基因型病毒感染者的療效。結(jié)果HBV A、B、C、D基因型感染者分別為7.7%、35.9%、51.4%和5.0%，肝硬化和肝細胞癌患者B和C基因型感染者分別為95%和93.7%，顯著高于A和D基因型感染的5%和6.3%（x2=11.364，P＜0.01）；在干擾素治療48周后，B基因型感染者HBV DNA轉(zhuǎn)陰率為60.5%，顯著高于C基因型感染者的32.5%（x2=6.014，P＜0.05）；B基因型感染者HBeAg/HBeAb血清轉(zhuǎn)換率為65.8%，顯著高于C基因型感染者的27.5%（x2=10.564，P＜0.01）；B基因型感染者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶復常率為97.6%，顯著高于C基因型感染者的67.5%（x2=5.387，P＜0.05）。結(jié)論HBV基因型以B和C基因型為主，C基因型感染預示著不良的疾病預后和較差的干擾素治療療效。

慢性乙型肝炎；HBV 基因型；干擾素-α；療效

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是導致人類急性和慢性肝臟疾病的重要病原體。全球約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝癌（Primary liver cancer，PLC）[1]。CHB可向肝硬化發(fā)展，抗病毒治療已成為治療CHB的共識[2]。目前，根據(jù)HBV全基因核苷酸序列異源性＞8%或者S基因區(qū)核苷酸序列異源性＞4%，將不同病毒株分為8個基因型[3]。近兩年又發(fā)現(xiàn)了新的I基因型[4]。大量研究表明，HBV 基因型、基因亞型分布具有明顯的地域性，不同的基因型和基因亞型具有其獨特的流行病學特點和分子生物學特征，與乙型肝炎病毒復制、致病性、宿主免疫應答及臨床表現(xiàn)、治療與預后等都有一定的相關性[5]。本研究利用PCR產(chǎn)物直接測序法對CHB患者HBV基因型分布及其與干擾素治療效果的關系進行了分析，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象選擇2008年1月至2012年10月在我科門診和住院的HBV感染者220例，男140例，女80例；平均年齡（52.1±15.8）歲。根據(jù)2010年中華醫(yī)學會修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》標準[6，7]，其中診斷為急性乙型肝炎（A-cute hepatitis B）8例，男5例，女3例；平均年齡（31.6±11.4）歲。診斷為CHB 120例，男76例，女44例；平均年齡（47.4± 13.6）歲。診斷為肝硬化60例，男39例，女21例；平均年齡（55.2±17.8）歲。診斷為肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）32例，男20例，女12例；平均年齡（56.7±18.4）歲。

1.2 治療方法本研究對78例CHB患者給予重組人干擾素α-1b（運德素，北京三元基因工程有限公司）治療，50 μg皮下注射，隔日1次，療程48周。

1.3 臨床檢測采用ELISA法檢測HBeAg/抗-HBe（英可創(chuàng)新廈門科技有限公司）；采用PCR法檢測HBV DNA（上?？迫A生物工程股份有限公司，檢測靈敏度為100IU/ml）。

1.4 血清HBV DNA分型檢測Taq酶（大連寶生物生物技術有限公司）；提取血清病毒DNA（德國Qiagen公司），PCR引物（上海生工生物技術公司合成）。按照文獻報道設計[8]——外側(cè)引物：5’-CCTCCTGCTGGTGGCTCCAGTTC-3’（nt22-77）；5’-GGCGGCAAACCCCAAAAGACCC-3’（nt1004-1025）。內(nèi)側(cè)引物:5’-CTAGGACCCCTGCTCGTGTTACA-3’（nt181-203）；5’-ATTACATATCCCATGAAGTTAAG-3’（nt870-892）。擴增條件:94℃5 min，94℃30 s，55℃30 s，72℃60 s，共35個循環(huán)，72℃5 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，由北京博邁德生物技術有限公司進行測序。測序結(jié)果經(jīng)BioEdit軟件進行序列長度編輯及格式轉(zhuǎn)換后，上傳至斯坦福大學HBV數(shù)據(jù)庫（http://hivdb.stanford.edu/HBV/HBVseq），進行序列比對和基因型分析。

1.5 統(tǒng)計學分析計數(shù)資料采用卡方檢驗，使用SPSS 17.0軟件包，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV基因型的分布情況在220例HBV感染者中，檢測出A型、B型、C型和D型分別為17例（7.7%）、79例（35.9%）、113例（51.4%）和11例（5%），即B、C基因型共192例（87.3%），顯著高于A、D基因型28例（12.7%）（x2=16.365，P＜0.01）；HBV基因型在不同疾病狀態(tài)的感染者中分布有顯著性差異（x2=7.414，P＜0.05或P＜0.01），其中B、C基因型在肝硬化和HCC中分別為57例（95%）及30例（93.7%），顯著高于A、D基因型的3例（5%）及2例（6.3%）（x2=11.364，P＜0.01，表1）。

表1 不同HBV感染者HBV基因型(%）的分布

2.2 不同HBV基因型感染的CHB患者對干擾素治療的療效比較在78例接受干擾素治療的CHB患者中，B基因型感染者38例，C基因型感染者40例。在干擾素治療48周后，B基因型感染者HBV DNA轉(zhuǎn)陰率為60.5%，顯著高于C基因型感染者的32.5%（x2=6.014，P＜0.05）；B基因型感染者HBeAg/HBeAb血清轉(zhuǎn)換率為65.8%，顯著高于C基因型感染者的27.5%（x2=10.564，P＜0.01）；B基因型感染者ALT復常率為97.6%，顯著高于C基因型感染者的67.5%（x2=5.387，P＜0.05），說明干擾素治療后，B基因型感染者療效顯著好于C基因型感染者。

3 討論

HBV存在多種不同的基因型，而這些基因型與病毒變異和慢性肝病患者的病情嚴重程度有著十分緊密的關系[9]。HBV基因型的分布有高度的地區(qū)分布[10]。國內(nèi)學者報道流行于我國的HBV 基因型主要為B 型和C 型，占總感染人群的95%以上，北方地區(qū)以C 基因型為主，南方地區(qū)以B 基因型較為常見[11]。C基因型與較重的病變有關，發(fā)生肝炎肝硬化、肝細胞癌較為多見[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，我國常見的A、B、C、D四個HBV基因型在本地區(qū)均有感染，B和C基因型占總感染人群的絕大部分，C基因型在急性肝炎、慢性肝炎、肝炎肝硬化和肝細胞癌患者中的比例分別為37.5%、47.5%，、53.3%和65.6%，與國內(nèi)的報道基本一致。

核苷類似物和α-干擾素等抗病毒藥物已廣泛應用于慢性乙型肝炎的治療，并有一定的療效[13]。IFN-α是目前國內(nèi)外公認的治療病毒性肝炎的首選藥物之一[14,15]，因此本研究選取78例CHB患者，經(jīng)IFN-α抗病毒治療48周，評價B和C基因型感染者對干擾素療效的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，B基因型感染者無論是HBV DNA轉(zhuǎn)陰率、HBeAg/抗-HBe血清轉(zhuǎn)換，還是血清ALT復常率，均顯著優(yōu)于C基因型感染者。

通過本研究發(fā)現(xiàn)，HBV感染仍以B和C基因型為主，而C基因型與不良的預后和較差的治療療效有關。因此，對于該類患者必須嚴密隨訪，合理地制定個體化治療方案，以延緩和減少肝硬化及肝癌的發(fā)生。

致謝本文承蒙首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院柳雅立博士審閱和寫作指導，特此致謝。

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（收稿：2013-12-27）（校對：陳宗炳）

Hepatitis B virus genotypes and its correlation to interferon-α therapy in patients with hepatitis B

Jiang Jie，Huang Xinyan，Wang Lihong，et al.Department of Infectious Diseases，Central hospital，Ezhou 436099，Hubei Province

Hepatitis B；Hepatitis B viral genotypes；Interferon-α；Therapy

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.03.021

436099 湖北省鄂州市中心醫(yī)院感染病科

江杰，男，43歲，醫(yī)學學士，副主任醫(yī)師。從事病毒性肝炎的臨床診治工作。E-mail:ezzxyy@vip.163.com

黃新顏，E-mail:67284839@qq.com