拜 年， 賈櫻櫻， 海力茜·陶爾大洪， 古娜娜·對(duì)山別克

(新疆醫(yī)科大學(xué)1第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部， 烏魯木齊 830054； 2第二附屬醫(yī)院藥劑科， 烏魯木齊 830063； 3藥學(xué)院， 烏魯木齊 830011)

恰麻古植物學(xué)名為蕪菁 (RadixseuFoliumBrassicaeRapae),屬于十字花科蕓苔屬蕓苔種，2年生草本植物[1-5]。蕪菁具有很高的藥用價(jià)值，始載于《名醫(yī)別錄》，味苦溫，無(wú)毒。古代中醫(yī)書籍記載，蕪菁助消化，祛風(fēng)，鎮(zhèn)咳，驅(qū)腹胸寒氣，解熱毒，消腫，強(qiáng)身?！毒S吾爾藥志》記：性溫，開(kāi)胸順氣，健胃消食，解毒；用于胸悶、腹胃脹痛、食欲不振、瘡癤腫毒等疾病[6-10]。槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷是恰麻古中所含的黃酮類成分之一，目前尚未見(jiàn)采用HPLC法測(cè)定維新疆阿克蘇、吐魯番、伊犁地區(qū)維藥恰麻古中槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量。從而為恰麻古藥材質(zhì)量控制中的有效成分含量測(cè)定提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1儀器高效液相色譜儀LC-20A，日本島津 超聲波清洗器SK8210HP型，上?？茖?dǎo)公司；分析天平BS124S型(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，天平BL600型(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2藥材維藥恰麻古采自新疆阿克蘇、吐魯番、伊犁地區(qū)，由新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥/天藥教研窒帕麗達(dá)·阿不力孜教授鑒定為十字花科蕪菁(BrassicarapaL)的塊根。將藥材切片、晾干、粉碎、過(guò)篩，放于干燥器中備用。

2 方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取適量槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品，置于100 mL量瓶中，用75%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品溶液的濃度為0.210 mg/mL。精密吸取5 mL 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，作為對(duì)照品溶液備用

2.2供試品溶液的制備精密稱取恰麻古粗粉約1.0 g，置100 mL具塞三角瓶中，加10 mL乙醇，并進(jìn)行超聲提取，15 min/次，共進(jìn)行3次，出去濾液，稱重，加入適量的乙醇溶液填補(bǔ)在超聲過(guò)程中損失的重量，離心，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試溶液，備用。

2.3色譜條件色譜柱：KromasilC18(200 mm×4.6 mm,5 μm)， 流動(dòng)相：乙腈-0.5%冰醋酸水溶液(25∶75,v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm，流速：1.0 mL/min，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：10 μL。分A、B對(duì)照品及供試品溶液，按上述色譜條件，分離較好，峰行對(duì)稱，色譜圖見(jiàn)圖1。按槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的峰面積計(jì)算，柱理論塔板數(shù)>2 500。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 mL,分別置于10 mL容量瓶中，加乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，在“2.1”條件下分別進(jìn)樣10 μL，以峰面積(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行回歸，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)，回歸方程Y=2.254×104X-8.391×103,r=0.999 7。結(jié)果槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在0.010 5～0.210 0 mg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

A: 對(duì)照品 B: 供試品圖1 高效液相色譜圖

圖2 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5精密度試驗(yàn)取槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，以峰面積(A)計(jì)算，結(jié)果槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品RSD為1.4%，說(shuō)明精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗(yàn)分別制備供試品溶液6份，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定含量，結(jié)果槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量的RSD為1.5%，說(shuō)明重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試液，進(jìn)樣通過(guò)6個(gè)時(shí)間段進(jìn)行，分別為0、1、2、4、8、12 h，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)出峰面積(A)，結(jié)果RSD為0.9%，說(shuō)明槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率試驗(yàn)精密稱量恰麻古粗粉約0.5 g,共9份，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，按“2.1”項(xiàng)下方法制備低、中、高濃度的樣品溶液各3份，在“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣并計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為99.1%，RSD為2.4%(表1)。

表1 槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷回收率試驗(yàn)(n=9)

2.9樣品含量精密稱取新疆不同產(chǎn)地的恰麻古，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。每個(gè)樣品重復(fù)操作5次，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，均進(jìn)樣10 μL，測(cè)得新疆阿克蘇、吐魯番、伊犁地區(qū)槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量分別為0.702、0.334、0.524 mg/g.。

3 結(jié)論

3.1色譜條件的選擇通過(guò)對(duì)甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)不同比例進(jìn)行考察，結(jié)果表明采用乙腈-0.5%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相可以達(dá)到良好的分離，而且色譜峰峰形良好，分析時(shí)間短，檢測(cè)波長(zhǎng)選擇槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的最大吸收波長(zhǎng)為257 nm。分離度>1.5，保留時(shí)間為6.5 min，理論塔板數(shù)>3 000。

3.2提取條件的選擇本實(shí)驗(yàn)選用了超聲法提取，通過(guò)與回流提取法比較可知回流提取法耗費(fèi)時(shí)間且干擾物較多，所以采用了超聲法提取，并確定75%乙醇、超聲提取15 min提取率最高。

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量，經(jīng)驗(yàn)證其方法操作簡(jiǎn)單，精密度、重復(fù)性等均達(dá)到了定量分析的要求，準(zhǔn)確精密，可作為恰麻古質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法之一。所得結(jié)果對(duì)以后新疆維吾爾藥材的開(kāi)發(fā)利用具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

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