張盼盼， 李建勇， 阿地力江·伊明， 劉鳳霞， 陳 曉， 朱顏劉瑩， 買(mǎi)買(mǎi)提祖農(nóng)·買(mǎi)蘇爾， 阿萊·巴合提汗， 阿卜杜熱伊木江·如則， 迪麗達(dá)爾·庫(kù)德熱提

(新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院1人體解剖學(xué)教研室， 2病理學(xué)教研室， 3病理生理學(xué)教研室， 4微生物學(xué)教研室， 烏魯木齊 830011)

維吾爾醫(yī)學(xué)(維醫(yī))體液論認(rèn)為，人體由膽液質(zhì)、血液質(zhì)、黏液質(zhì)和黑膽質(zhì)4種體液質(zhì)組成。人體體液質(zhì)的平衡是機(jī)體保持正常生理功能的基礎(chǔ)。4種體液中，黏液質(zhì)體液屬性濕寒，常易因生活、飲食與起居環(huán)境及食品污染、工作壓力、缺乏運(yùn)動(dòng)等因素導(dǎo)致體內(nèi)黏液質(zhì)體液偏甚，體液平衡遭到破壞，并產(chǎn)生異常黏液質(zhì)，致體內(nèi)熱能下降，代謝水平偏低，蓄積體內(nèi)，進(jìn)而導(dǎo)致病理性改變，引發(fā)異常黏液質(zhì)型相關(guān)疾病。

本課題組前期研究工作中，以維醫(yī)理論為指導(dǎo)，采用濕寒環(huán)境和濕寒飼料復(fù)合干預(yù)的方法建立異常黏液質(zhì)證候大鼠模型，發(fā)現(xiàn)異常黏液質(zhì)證大鼠可發(fā)生顯著的勃起功能減退與性行為能力減弱，并發(fā)現(xiàn)其性腺軸相關(guān)激素紊亂。為探討其組織病理學(xué)依據(jù)，本研究就維醫(yī)異常黏液質(zhì)證候大鼠模型性腺軸形態(tài)學(xué)的改變進(jìn)行初步的研究。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有正常性功能的雄性(SD)大鼠90只(由交配實(shí)驗(yàn)證實(shí))，雌性大鼠20只，體質(zhì)量(200±20)g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2主要儀器與試劑BIC-400 型人工氣候箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng))，BS-1105 型電子天平(北京賽多科斯天平有限公司)，DHG-9245A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。阿樸嗎啡(Apomorphine,APO，美國(guó)Sigma公司)，黃體酮(浙江仙琚治藥股份有限公司, 批號(hào)：120804)，雌二醇(寧波市三生藥業(yè)有限公司,批號(hào)：B130613)，伊木薩克片(新疆和田維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20130501)。

1.3動(dòng)物分組和模型的建立

1.3.1 分組 90只雄性SD大鼠，經(jīng)交配實(shí)驗(yàn)證實(shí)具有正常性功能后，從中隨機(jī)抽取10只為正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)正常組)，余80只為造模組。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w，大鼠自由飲食水，12/12 h晝夜交替飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為(22±2)℃、濕度為(55±5)%，并對(duì)大鼠生物學(xué)表征進(jìn)行觀(guān)察和記錄，1 w后進(jìn)入造模階段。

1.3.2 濕寒飼料的制備 按每千克大鼠常規(guī)飼料中加入芫荽實(shí)和菠菜實(shí)各150 g。飼料由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心制備，芫荽實(shí)和菠菜實(shí)均購(gòu)自新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院草藥房。

1.3.3 異常黏液質(zhì)證候模型的建立與分組 正常組采用常規(guī)方法飼養(yǎng)，溫度為18～22℃,濕度為55%～65%，每日給500 g普通飼料、1 000 mL水、200 g墊料。造模組放置于人工氣候箱中飼養(yǎng)，溫度為(8±2)℃，濕度為(85±5)%，于10∶00～20∶00/22∶00～10∶00分2批交替放入。造模組每組每日給濕寒飼料500 g，水與墊料同上。造模組與正常組均隨機(jī)飲食水，12/12 h人工照明，固定每日20∶00～22∶00給予飼料、水，更換墊料，并動(dòng)態(tài)觀(guān)測(cè)生物學(xué)表征的變化。20 w后，通過(guò)APO勃起實(shí)驗(yàn)和交配實(shí)驗(yàn)篩選出陽(yáng)痿病證模型(用于其它實(shí)驗(yàn))，將未成陽(yáng)痿的證候模型再隨機(jī)分為證候模型組、自然反證組，反證時(shí)間為2 w。

1.3.4 自然反證方法 分組完畢后，將自然反證組于常規(guī)條件下飼養(yǎng)2 w，常規(guī)飲食，并行生物學(xué)表征觀(guān)測(cè)、APO勃起實(shí)驗(yàn)和性行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)與正常組和模型組的比較，確定模型自然恢復(fù)的情況。

1.3.5 取材 反證2 w后，將所有大鼠用1%戊巴比妥鈉腹腔注射(40 mg/kg)麻醉，取下丘腦、垂體和睪丸，將體積<1 mm3的組織，用4%戊二醛和1%鋨酸雙固定，剩余部分于4%多聚甲醛固定。

1.4觀(guān)察指標(biāo)將甲醛固定的下丘腦、垂體和睪丸組織進(jìn)行石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀(guān)察；將戊二醛和鋨酸雙固定的組織丙酮梯度脫水，Epon8.2環(huán)氧樹(shù)脂包埋切片，鉛鈾染色，JEOL JEM120透射電鏡下觀(guān)察。

2 結(jié)果

2.1下丘腦觀(guān)察結(jié)果(1)光鏡下可見(jiàn)正常組神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，胞核清晰，胞漿豐富，間質(zhì)無(wú)水腫表現(xiàn)(圖1-1)。證候模型組血管擴(kuò)張，基質(zhì)輕度疏松，呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可見(jiàn)空泡樣病變，提示輕度水腫(圖1-2)。自然反證組基質(zhì)水腫減輕，大部分細(xì)胞核深染均一(圖1-3)。(2)電鏡下可見(jiàn)正常神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)密度均一，細(xì)胞器均正常，核圓形或橢圓形，異染色質(zhì)較多，呈團(tuán)塊位于核膜下(圖2-1)；神經(jīng)元細(xì)胞基質(zhì)密度尚可，細(xì)胞內(nèi)有較多游離核糖體，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較發(fā)達(dá)，少數(shù)線(xiàn)粒體有空泡變(圖2-4)。證候模型組神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)密度下降較為明顯，核周隙增寬，線(xiàn)粒體水腫呈空泡樣病變，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張(圖2-2)；神經(jīng)元核膜界線(xiàn)不清，核基質(zhì)密度降低，異染色質(zhì)增多，線(xiàn)粒體空泡變明顯，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)少量溶酶體(圖2-5)。自然反證組細(xì)胞器分布較均勻，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)密度有所升高，核周隙依舊增寬，仍可見(jiàn)線(xiàn)粒體水腫呈空泡變，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張(圖2-3)；神經(jīng)元核膜界線(xiàn)清晰，核基質(zhì)密度有所回升，異染色質(zhì)輕微升高，線(xiàn)粒體空泡變減輕(圖2-6)。

2.2垂體觀(guān)察結(jié)果(1)光鏡下正常組腺垂體嗜酸性細(xì)胞呈圓形或橢圓形，嫌色細(xì)胞較小，圓形或多邊形，胞質(zhì)染色淺；神經(jīng)垂體見(jiàn)無(wú)髓神經(jīng)纖維，有豐富的竇狀毛細(xì)血管(圖1-4)。證候模型組腺垂體基質(zhì)輕度疏松，神經(jīng)部基質(zhì)疏松較明顯，細(xì)胞水腫(圖1-5)。自然反證組基質(zhì)疏松較輕，細(xì)胞輕度水腫(圖1-6)。(2)電鏡下觀(guān)察可見(jiàn)正常組細(xì)胞排列致密，胞核圓形，細(xì)胞內(nèi)有較多分泌顆粒，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較為發(fā)達(dá)，少數(shù)線(xiàn)粒體水腫(圖2-7)。證候模型組細(xì)胞排列緊密，胞核圓形，核仁明顯，胞質(zhì)中有較多分泌顆粒，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，線(xiàn)粒體腫脹普遍空泡變(圖2-8)。自然反證組細(xì)胞排列緊密，核形規(guī)則呈圓形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張減少，少部分線(xiàn)粒體空泡變(圖2-9)。

1：正常組下丘腦(×400) 2：證候模型組下丘腦(×400) 3：自然反證組下丘腦(×400)

4：正常組垂體(×400) 5：證候模型組垂體(×400) 6：自然反證組垂體(×400)

圖1 性腺軸HE染色結(jié)果

2.3睪丸觀(guān)察結(jié)果(1)光鏡下，正常組生精小管豐富且管壁薄、管徑大，基膜明顯、完整，生精上皮排列整齊，為5～8層，可見(jiàn)各級(jí)生精細(xì)胞及支持細(xì)胞，生精小管之間可見(jiàn)疏松的間質(zhì)組織，富含血管及淋巴管，間質(zhì)細(xì)胞成群分布，體積大，圓形或多邊形，細(xì)胞核不規(guī)則，染色質(zhì)較淡，胞質(zhì)豐富(圖1-7)。 證候模型組生精小管萎縮變形或扭曲呈不規(guī)則形，管壁上生精細(xì)胞數(shù)量與精子數(shù)量明顯減少，間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少，核周?chē)€可見(jiàn)空泡(圖1-8)。自然反證組改變較證候模型組有輕度減輕(圖1-9)。(2)電鏡下觀(guān)察，正常組精原細(xì)胞、支持細(xì)胞緊靠基膜且排列致密，各類(lèi)生精細(xì)胞層數(shù)較多，精母細(xì)胞核圓，線(xiàn)粒體豐富，精曲小管管腔內(nèi)可見(jiàn)較多精子，支持細(xì)胞核仁明顯，胞質(zhì)基質(zhì)密度均一(圖2-10)。證候模型組支持細(xì)胞核形不規(guī)則，細(xì)胞基質(zhì)密度變深，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張呈囊泡狀，精原細(xì)胞及精母細(xì)胞有壞死，生精細(xì)胞層數(shù)較少，少見(jiàn)精子細(xì)胞，管腔內(nèi)可見(jiàn)精子(圖2-11)。自然反證組生精細(xì)胞與支持細(xì)胞間隙較寬，生精細(xì)胞增多，管腔內(nèi)可見(jiàn)大量精子鞭毛(圖2-12)。

1：正常組下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(×10000) 2：證候模型組下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(×10000) 3：自然反證組下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(×10000) 4：正常組下丘腦神經(jīng)元

5：證候模型組下丘腦神經(jīng)元

9：自然反證組組垂體

3 討論

維醫(yī)學(xué)作為祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的重要組成部分，在生殖健康領(lǐng)域，尤其是對(duì)陽(yáng)痿、早泄及少、弱精癥等男科疾病有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，尤以療效著稱(chēng)。維醫(yī)學(xué)體液論認(rèn)為，在正常生理狀態(tài)下，4種體液質(zhì)處于一種動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，人體的各種臟器、組織和細(xì)胞才發(fā)揮正常生理功能，并使機(jī)體保持內(nèi)穩(wěn)態(tài)。當(dāng)機(jī)體遇到體內(nèi)外幾種或多種不良因素(如飲食、環(huán)境、精神因素等)的影響或長(zhǎng)時(shí)間處于不良環(huán)境時(shí)，體液在質(zhì)和量上發(fā)生變化，超越人體自行調(diào)節(jié)功能，導(dǎo)致體液平衡紊亂，產(chǎn)生異常膽液質(zhì)、異常血液質(zhì)、異常黏液質(zhì)和異常黑膽質(zhì)異常體液，并導(dǎo)致相關(guān)的疾病[1]?？梢?jiàn)，體液失衡、數(shù)量或質(zhì)量發(fā)生異常變化是疾病發(fā)生的根本,是其內(nèi)部原因,而自然界的異常作用則是疾病的外因。

在維醫(yī)疾病譜中，有很多疾病與異常黏液質(zhì)密切相關(guān)，尤其是生殖系統(tǒng)陽(yáng)痿、早泄、少弱精癥和不孕不育等疾病。為此，本課題組前期工作中，依據(jù)維醫(yī)體液論，以“證候表征模型”為造模理念，在實(shí)驗(yàn)層面上，以維吾爾醫(yī)學(xué)理論為指導(dǎo)，選擇具有濕寒屬性的不同原料[2-3]，按一定比例與基礎(chǔ)大鼠飼料進(jìn)行配置而制備了不同的濕寒性飼料，在濕寒性環(huán)境中飼養(yǎng)，成功建立了異常黏液質(zhì)證大鼠模型，模型的生物學(xué)表征表現(xiàn)為：飲食量、飲水量與便量顯著增加，大便質(zhì)軟、不成形、時(shí)有淌薄，尿色發(fā)清，毛發(fā)無(wú)光，且喜扎堆，不好動(dòng)，反應(yīng)敏感性減弱，舌苔白膩，舌質(zhì)暗紅，舌體胖大，表明其生物學(xué)表征的改變符合維吾爾醫(yī)學(xué)異常黏液質(zhì)證候的一般特征，并發(fā)現(xiàn)該證候大鼠， 陰莖勃起功能與性行為能力較正常組顯著減退，同時(shí)生精功能與精子運(yùn)動(dòng)能力顯著降低。隨后的研究從中成功篩選出陰莖勃起功能障礙病證動(dòng)物模型，陽(yáng)痿成模率達(dá)56.7%[4-5]。提示在一定的條件下，成功建立少弱精癥模型的可能性。阿地力江·伊明等[6]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，其外周血清睪酮(T)水平顯著降低，而促黃體生成素(LH)、催乳素(PRL)和雌二醇(E2)水平顯著升高，提示該病證的發(fā)生發(fā)展可能與性腺軸功能改變有著密切的聯(lián)系。

本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，對(duì)下丘腦、垂體和睪丸進(jìn)行了進(jìn)一步的形態(tài)學(xué)研究，以尋找其組織病理學(xué)依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)維醫(yī)異常黏液質(zhì)證候大鼠模型性腺軸的形態(tài)學(xué)產(chǎn)生明顯變化，下丘腦可見(jiàn)血管擴(kuò)張，基質(zhì)疏松，呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并可見(jiàn)空泡樣病變。而電鏡可見(jiàn)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)密度明顯下降、線(xiàn)粒體水腫呈空泡樣病變、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、神經(jīng)元細(xì)胞則核膜界線(xiàn)不清、核基質(zhì)密度降低及線(xiàn)粒體出現(xiàn)空泡樣變等超微結(jié)構(gòu)的改變。垂體在神經(jīng)部和腺垂體均可見(jiàn)到基質(zhì)疏松和細(xì)胞水腫，電鏡觀(guān)察可見(jiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、線(xiàn)粒體普遍空泡樣變。其中尤其以睪丸變化最為顯著，精曲小管發(fā)生明顯萎縮變形，生精細(xì)胞明顯減少，精子數(shù)量與層數(shù)及間質(zhì)細(xì)胞也明顯減少。超微結(jié)構(gòu)顯示，支持細(xì)胞核形不規(guī)則、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張呈囊泡狀以及精原細(xì)胞與精母細(xì)胞有壞死等改變。上述結(jié)果表明，以往研究工作中性腺軸相關(guān)激素的改變并非只是單純的功能性改變，其可能伴隨著性腺軸組織病理學(xué)改變，同時(shí)提示該證的發(fā)生發(fā)展可能和能量代謝相關(guān)。

綜上所述，在維醫(yī)異常黏液質(zhì)證的發(fā)生發(fā)展中，性腺軸在形態(tài)學(xué)上發(fā)生的組織病理學(xué)改變可能是性腺軸相關(guān)激素紊亂的組織病理學(xué)基礎(chǔ),但其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

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