李淑蘭（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司哈爾濱150069）

1 流行病學(xué)

本病的病原為動(dòng)脈炎病毒屬中的馬動(dòng)脈炎病毒。本病僅馬屬動(dòng)物有易感性，發(fā)病呈散發(fā)，一般不致死亡。但妊娠母馬或幼駒人工接種病毒后可引起約50%死亡，妊娠母馬有50%～60%流產(chǎn)。康復(fù)馬血清內(nèi)有中和抗體和補(bǔ)體結(jié)合抗體，并有免疫性，對(duì)再傳染或人工接種有抵抗力，一般可維持1年以上。病馬的眼分泌液、鼻液、唾液、精液、血液、流產(chǎn)胎兒的胎液和各種組織內(nèi)均含有病毒，病毒由糞便、尿、鼻液、眼淚排出，通過飼料、飲水、環(huán)境傳染于易感馬，或通過氣霧，被易感馬吸入后引起傳染，配種也能傳染。

2 臨床癥狀

本病潛伏期為2～10天，多呈急性經(jīng)過，病馬最初表現(xiàn)為發(fā)熱及流出漿液性鼻液，隨后眼瞼水腫，大量流淚，鼻黏膜充血，結(jié)膜炎以及白細(xì)胞減少。病馬常出現(xiàn)出全身衰竭，呼吸困難、厭食、萎頓、腹痛、腹瀉、減重和脫水，還可能出現(xiàn)角膜炎、羞明、黃疸和四肢、腹下、乳房及陰囊部的浮腫。妊娠母馬常流產(chǎn)，流產(chǎn)率可達(dá)90%以上，流產(chǎn)發(fā)生在感染后的10～33天。流產(chǎn)通常出現(xiàn)在臨床發(fā)病期或恢復(fù)早期，胎兒常在發(fā)生流產(chǎn)之前就已死亡。人工感染可導(dǎo)致死亡，幼駒表現(xiàn)比較嚴(yán)重，自然發(fā)病者死亡率較低。

3 剖檢變化

病馬主要表現(xiàn)為出血和水腫。病馬眼結(jié)膜、眼瞼、瞬膜、鼻腔黏膜、咽喉部、喉囊、鄰近薦臀部的肢體與會(huì)陰區(qū)皮下組織充血、水腫與點(diǎn)狀出血。水腫和出血還見于網(wǎng)膜、腸系膜、腹壁脂肪、肺胸膜與小葉間質(zhì)、腹腔內(nèi)淋巴結(jié)闊韌帶、腎上腺皮質(zhì)以及腦?；孛そY(jié)腸動(dòng)脈和前腸系膜動(dòng)脈的經(jīng)絡(luò)以及子宮闊韌帶，胸膜下、肺小葉中膈等處也有類似的病變存在。腸管，尤其是盲腸和結(jié)腸的病變呈分段性，每段長(zhǎng)約1～2米，界線明顯。腸壁水腫增厚，經(jīng)常出現(xiàn)出血性和浮膜性腸炎，胃和小腸也有出血、水腫的變化。幼駒常發(fā)生脾出血性梗死和腎上腺內(nèi)的小血腫。公馬常有睪丸硬化的病變。病馬的漿膜腔內(nèi)常有大量富含蛋白質(zhì)和纖維素的液體，胸腹腔積水量可達(dá)10升之多。結(jié)締組織內(nèi)也充滿水腫液。流產(chǎn)胎兒水腫，呼吸道黏膜和脾被膜上有出血點(diǎn)。不論是流產(chǎn)胎兒或已在子宮內(nèi)死亡的胎兒都沒有特征性動(dòng)脈炎病變。

4 病原學(xué)診斷

采取急性病例的全血或沉淀白細(xì)胞層，也可采取流產(chǎn)胎兒的脾臟，不能及時(shí)處置的病料可置于含有抗生素和1%牛白蛋白的Hank′s氏緩沖鹽溶液中，在零下20℃可保存數(shù)星期。尸體剖檢時(shí)可取肺、脾和淋巴結(jié)制成組織懸液，還可采集種公馬的精液作為病毒的分離材料。初代分離培養(yǎng)最好用馬腎、睪丸和皮膚細(xì)胞。如有病毒，一般在接種后3～5天出現(xiàn)細(xì)胞病變。另外，此病毒在覆蓋培養(yǎng)物中能產(chǎn)生空斑。

從精液中分離馬動(dòng)脈炎病毒適用于檢測(cè)馬精液的帶毒情況。將精液放入15毫升離心管中，充分震蕩，必要時(shí)可放入滅菌玻璃球。于4～10℃下，1 500轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，保留上清液。再將精液上清液做1∶10、1∶30、1∶100稀釋。準(zhǔn)備25平方厘米細(xì)胞培養(yǎng)瓶，一種為培養(yǎng)24～48小時(shí)的PK-15細(xì)胞，另一種為馬卵巢細(xì)胞，并分別將培養(yǎng)瓶標(biāo)記，同時(shí)留未接種的細(xì)胞作為對(duì)照。棄掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，分別加1毫升1:10精液稀釋液于PK-15和馬卵巢細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，再分別加1毫升1∶30、1∶100的稀釋精液于PK-15和馬卵巢細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。加蓋后放37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)1小時(shí)，倒掉精液，加7毫升培養(yǎng)液于每個(gè)培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶放37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

結(jié)果檢查，接種細(xì)胞和對(duì)照組培養(yǎng)7天，用胰酶將所有細(xì)胞消化下來做病毒熒光抗體檢查。倒掉培養(yǎng)液，用磷酸鹽緩沖液沖洗細(xì)胞。每瓶加0.6毫升胰酶，等細(xì)胞從瓶壁脫落后，再加6毫升培養(yǎng)液。吸取0.5～1.0毫升細(xì)胞液，滴2滴于玻片上，在37℃二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)4小時(shí)，將玻片用丙酮固定，并用EAV熒光抗體診斷液染色。將剩余的細(xì)胞連同培養(yǎng)瓶在零下70℃冷凍。準(zhǔn)備培養(yǎng)24～48小時(shí)的PK-15細(xì)胞和馬卵巢細(xì)胞。倒掉前一個(gè)細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液，將冷凍的細(xì)胞瓶解凍。每瓶加1毫升解凍液于相應(yīng)的培養(yǎng)瓶中，每天檢查細(xì)胞病變，再加6毫升相應(yīng)營(yíng)養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)，每天檢查細(xì)胞病變，5～7天后用胰酶消化后作熒光抗體檢查。經(jīng)過2次熒光抗體檢查均為陰性的，則無馬動(dòng)脈炎病毒。

病毒鑒定主要應(yīng)用中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和蝕斑減數(shù)試驗(yàn)等，其中以蝕斑減數(shù)試驗(yàn)為最敏感。