補腎顆粒質(zhì)量控制研究*

★ 熊躍 胡小玲

(南昌市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 江西 南昌 330009)

補腎顆粒是由熟地、山茱萸、山藥等十二味中藥材組成。用于肝腎陰虛，虛陽上擾引起的頭痛、頭暈等癥。但補腎協(xié)定處方為水煎劑，質(zhì)量穩(wěn)定的保存期短，更重要的是未建立質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。考慮到中藥材的來源復(fù)雜，即使同一種藥材，產(chǎn)地及采收季節(jié)不同，其活性成分含量的波動也很大。為彌補補腎協(xié)定處方煎劑的不足，本課題的研究力求通過工藝篩選及研究，制備出劑型穩(wěn)定的補腎顆粒，然后對處方中的主藥建立有效成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法，以確保該制劑在實際運用中的療效穩(wěn)定，提高治愈率。

1 儀器與試藥

Agilent1100高液相色譜儀； kromasil C18色譜柱 (4.6mm×250mm,5μm)；FA2004N電子天平;Sartorius BT25S電子天平；島津UV-2101紫外分光光度計；SK250H超聲波清洗儀；薄層層析板。

熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號：110742-200516); 馬錢苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：111640-200502)；補腎顆粒(自制，批號：20080926、20080928)；硅膠G(青島海洋化工廠)；乙腈為色譜純；甲醇為分析純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 熊果酸為山茱萸的主要化學(xué)成分，故選擇熊果酸作為對照，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(1∶1)為展開劑，對補腎顆粒進(jìn)行薄層色譜鑒別。

供試品溶液的制備：取本品20g，研細(xì)，加入乙醚70mL，回流2h，過濾，濾液揮去乙醚，殘渣加0.5mL丙酮作為供試品溶液。陰性對照品溶液的制備：除山茱萸外，其余各藥按處方量投料制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法《中國藥典2010版一部附錄試驗》[1]、《中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩圖集》[2]。供試品色譜中與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的斑點,該項鑒別專屬性強，分離效果好，陰性樣品無干擾。見圖1。

1.供試品溶液；2.熊果酸對照品溶液；3.陰性樣品溶液

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 采用kromasil C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈-水(14∶86)為流動相，流速為1mL/min；進(jìn)樣量20μL；檢測波長為236nm，柱溫為25℃。理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 溶液的制備 對照品溶液的制備：取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1mL含馬錢苷20μg 的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取裝量差異下的本品，研細(xì)，取約1.2g，精密稱定，加60%甲醇25mL，超聲30min，放冷，補重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照溶液的制備：取缺山茱萸藥材的陰性樣品1.2g，按供試品溶液方法制備，即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性及陰性干擾試驗 精密吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各20μL，注入液相色譜儀，色譜見圖2 。由圖2可知，在與對照品色譜峰保留時間相應(yīng)的位置上，供試品有色譜峰出現(xiàn)，而陰性對照無色譜出現(xiàn)，故本品中其他組分對馬錢苷的含量測定無干擾。在該色譜條件下，馬錢苷分離效果較好，理論板數(shù)按馬錢苷計算不低于3000。

A.陰性對照；B.對照品；C.供試品

2.2.4 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液21.28μL，重復(fù)測定5次，結(jié)果，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.8%，表明本方法精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液21.28μL，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)樣測定。結(jié)果RSD為0.7%，表明馬錢苷供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密稱定馬錢苷對照品適量，加60%甲醇至刻度；精密量取0.3，0.5，1，2，3 mL分別置10mL容量瓶中，加60%甲醇到刻度，搖勻，精密吸取上述溶液各20μL，照2.2.1色譜條件下測定，記錄峰面積，以對照品的濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=34.982X+21.581，r=0.9998。馬錢苷在6.384～ 63.84μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7 重復(fù)性試驗 取同一批樣品(080926)精密稱定5份，按照"2.2.2"項下方法制定供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，計算馬錢苷含量，得馬錢苷平均含量為0.404mg/g粒，RSD=1.1%。表明本方法的重復(fù)性較好。

表1 馬錢子苷加樣回收率試驗

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量(0.404mg/g)的本品約0.2g，共五份，置容量瓶

中,分別精密加入五份12.768μg的對照品0.6mL溶液,照含量測定項下的方法試驗，計算回收率。結(jié)果見表1。

表3 樣品中馬錢苷含量測定結(jié)果(/mg·袋-1，n=7)

2.2.9 樣品含量測定 分別取各批樣品,按2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定,計算馬錢苷的含量,結(jié)果見表3。7批樣品的平均含量為6.05 mg/袋,考慮到實際生產(chǎn)中藥材來源的不同及批量生產(chǎn)等因素的影響,取含量均值的75%為含量下限,規(guī)定本品每袋含山茱萸以馬錢苷計,不得低于4.5mg。

3 討論

在本實驗中研究補腎顆粒中的山茱萸中熊果酸定性鑒定與采用HPLC法測定補腎顆粒中山茱萸藥材馬錢苷的含量在分離良好，該方法具有樣品前處理簡單，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點，可用于補腎顆粒的質(zhì)量控制研究。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2010:602.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩圖集 (第一冊)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.

[3]謝瑞芳,周昕,顧希鈞，等.RP-HPLC法測定復(fù)方自身清顆粒中馬錢苷的含量[J].中國藥房,2009, 20(9):679.