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      復(fù)脈湯對(duì)急性心肌梗死大鼠腦鈉肽調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究*

      2014-08-29 06:28:10沈煒毅龔一萍
      關(guān)鍵詞:復(fù)脈甘草心肌細(xì)胞

      ★ 沈煒毅 龔一萍*

      (浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053)

      急性心肌梗死(acute myocardial infarction AMI)是指心肌急性缺血缺氧壞死,是冠心病的嚴(yán)重類型,容易引起心力衰竭。腦鈉肽(Brain Natriuretic Peptide BNP)主要由心肌細(xì)胞合成分泌,是在心室容積增加和壓力超負(fù)荷分泌的一種心臟神經(jīng)類激素?,F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)急性心肌梗死,會(huì)引起B(yǎng)NP的濃度升高,而且其可反映心肌的受損程度[1]。本研究采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立急性心肌梗死模型,通過對(duì)大鼠血清BNP濃度的測(cè)定,探討復(fù)脈湯在急性缺血時(shí)期,對(duì)損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。

      1 材料

      1.1 動(dòng)物 SD大鼠(雄性)58只,合格證號(hào)(2008001638685),體重290~300g,由上海西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。飼養(yǎng)條件:飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,清潔飼養(yǎng)室保持恒溫(20℃),相對(duì)濕度40℃~60℃。

      1.2 藥物 復(fù)脈湯(主要由黃芪、生曬參、麥冬、五味子、丹參、川芎等組成,單味中藥均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)門診部提供),將各藥加水煎煮2次(第1次1.5h,第2次0.5h),制備成生藥濃度為3.75g/mL。炙甘草湯(炙甘草、生姜、桂枝、黨參、生地黃、阿膠、麥冬、麻子仁、大棗。單味中藥由浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)門診部提供),炙甘草湯濃縮至2g/mL,放入4℃冰箱,酒石酸美托洛爾組(50mg/片,批號(hào):H32025390)由阿斯利康制藥有限公司提供。

      1.3 試劑與儀器 主要試劑:3%烏巴比妥鈉(美國(guó)Sigma,Sigma-P3761),大鼠腦鈉肽(BNP)ELISA檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)廠家:杭州誠(chéng)維生物科技有限公司批號(hào):E2014042104)。主要儀器:小動(dòng)物呼吸機(jī)(上海奧爾科特生物科技有限公司ALc-V9),小動(dòng)物多道生理記錄儀(法國(guó)ekma),離心儀器(型號(hào):AllegraX-15R),日立7020全自動(dòng)生化分析儀(編號(hào):0500790S),冷凍高速離心機(jī)(Thermo),多功能酶標(biāo)儀(Thermo),生化培養(yǎng)箱。

      2 方法

      2.1 分組和給藥 58只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為7組,復(fù)脈湯高、中、低組,炙甘草湯組、酒石酸美托洛爾組、假手術(shù)組各8只,模型組10只;假手術(shù)組及模型組:給予等體積生理鹽水,復(fù)脈湯高劑量組(37.5g/kg)、復(fù)脈湯中劑量組(18.75g/kg)、復(fù)脈湯低劑量組(9.375g/kg)、炙甘草湯組(20g/kg)、酒石酸美托洛爾(10mg/kg),每天給予一次灌胃,共計(jì)2周。

      2.2 模型制備 方法參考文獻(xiàn)[2]稍做改動(dòng)具體步驟為:以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,仰臥固定,頸部與胸部皮膚去毛,常規(guī)消毒、鋪巾。逐層分離皮膚、肌肉,暴露氣管,開胸前氣管插管,連接動(dòng)物呼吸機(jī)行人工呼吸。四肢皮下連接心電圖電極,記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。在胸骨左側(cè)3、4肋骨處切開皮膚,逐層鈍性分離皮下組織、肌肉,用開瞼器撐開胸腔,剝離心包膜暴露心臟,在左心耳與肺動(dòng)脈圓錐間,左心耳下方約2mm,用0/6號(hào)縫合針,進(jìn)針深度控制在0.1cm左右,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支。結(jié)扎后迅速清除胸腔內(nèi)多余血液,觀察心電圖變化,以心電圖ST段抬高,及結(jié)扎線以下心肌顏色蒼白說明造模成功。假手術(shù)組只穿線(不結(jié)扎),其余步驟相同。

      2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組大鼠腹主動(dòng)脈取血 使用離心機(jī)3000轉(zhuǎn)離心20分鐘,分離血清,采用ELISA法檢測(cè)血清中腦鈉肽的濃度。往預(yù)先包被腦鈉肽(BNP)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腦鈉肽(BNP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)議在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

      3 結(jié)果

      3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活情況 左前降支結(jié)扎成功率為100%。在手術(shù)中模型組死亡2只,炙甘草湯組死亡1只,余均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

      3.2 心電圖改變 見圖1。手術(shù)前,大鼠P波、QRS波、T波正常可辨;左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎即刻T波振幅明顯抬高,隨后T波、ST段與R波融合形成單向曲線,J點(diǎn)(QRS波群與ST段交界處的一個(gè)突發(fā)性轉(zhuǎn)折點(diǎn))抬高大于0.1mv以上,J值的位移值可視為心肌缺血模型成功的一個(gè)重要指標(biāo),J點(diǎn)上升0.1mv即視為心肌缺血[3,4]。當(dāng)心肌持續(xù)缺血后,心肌細(xì)胞便出現(xiàn)不可逆的壞死,在心電圖上表現(xiàn)為病理性Q波。

      正常心電圖

      心肌缺血心電圖

      心肌損傷心電圖

      心肌梗死心電圖

      3.3 對(duì)急性心肌梗死大鼠血清中BNP濃度的影響 血清BNP濃度在假手術(shù)組顯著低于模型組(P<0.01);復(fù)脈湯各劑量組、炙甘草湯組、美托洛爾組能降低急性心肌梗死大鼠血清BNP濃度,與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),復(fù)脈湯高劑量組血清BNP濃度與炙甘草湯組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)脈湯各劑量組與美托洛爾組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

      表1 復(fù)脈湯對(duì)急性心肌梗死大鼠血清BNP濃度的影響

      注:與假手術(shù)組比較**P<0.01;與模型組比較△△P<0.01;與炙甘草湯組比較#P<0.05。

      4 討論

      在臨床上,BNP是評(píng)價(jià)AMI患者心功能狀態(tài)的一個(gè)敏感指標(biāo),AMI患者早期測(cè)定BNP水平有助于判斷患者心功能情況及梗死范圍[5]。OMLAND等[6]研究也發(fā)現(xiàn)BNP可預(yù)測(cè)梗死區(qū)大小,梗死區(qū)越大,BNP濃度越高。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支后,左心室肌前壁及部分側(cè)壁發(fā)生了缺血、損傷、壞死。因心肌細(xì)胞缺血缺氧,使心肌細(xì)胞自身的收縮舒張功能減退,及心肌細(xì)胞間的膠原纖維斷裂,導(dǎo)致心肌舒張不協(xié)調(diào),部分心肌的張力和回彈力功能受限。心室壁張力和壓力負(fù)荷過重,刺激壞死區(qū)周圍及壞死內(nèi)存活的受損心肌細(xì)胞大量合成和分泌BNP,導(dǎo)致血循環(huán)中BNP濃度顯著增大。而隨著相應(yīng)的治療,受損心肌細(xì)胞功能有所恢復(fù),其釋放的BNP濃度降低,表現(xiàn)為病情好轉(zhuǎn)。

      急性心肌梗死模型屬于中醫(yī)胸痹,氣虛血瘀證的范疇。手術(shù)易損傷心氣,心氣虛乏,無力推動(dòng)血行,血脈瘀滯,故而出現(xiàn)氣虛血瘀的狀態(tài),重用黃芪,以助心氣,并與生曬參相須為用,增強(qiáng)補(bǔ)益心氣的功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)藥理研究發(fā)現(xiàn)黃芪有保護(hù)心肌作用,能促使損傷的心肌細(xì)胞恢復(fù)活力,從而改善心功能。人參中有效成分人參皂苷有顯著改變?nèi)毙孕募∪毖淖饔?,增加冠脈血流量[7]。復(fù)脈湯以黃芪與丹參、生曬參與川芎組成藥對(duì),共奏益氣活血化瘀的功效?,F(xiàn)代藥理研究[8]證明丹參注射液對(duì)犬心肌梗死模型能促進(jìn)犬冠狀動(dòng)脈側(cè)枝循環(huán)的開放和形成,對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用。川芎嗪對(duì)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈造成犬實(shí)驗(yàn)性心梗有縮小梗塞范圍、減輕病變程度、減少心肌壞死的作用。復(fù)脈湯高、中、低劑量組BNP的濃度分別是547.46±36.86、554.22±43.13、576.60±46.34,與模型組700.01±11.82比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明復(fù)脈湯可能增加了缺血區(qū)域的血流循環(huán),減緩心肌細(xì)胞的損傷,減少心肌細(xì)胞BNP分泌。但是其具體作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。美托洛爾是β受體阻滯劑,能夠減慢心率,減輕心肌氧耗量而減少心肌細(xì)胞的損傷。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),復(fù)脈湯各劑量組的BNP濃度與美托洛爾組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明它們對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用效果相當(dāng)。復(fù)脈湯高劑量組BNP的濃度為547.46±36.86,而炙甘草湯組的濃度是587.91±42.97,復(fù)脈湯高劑量組BNP的濃度低于炙甘草湯組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因?yàn)榧毙孕募」H嬖谥闹}瘀阻,而炙甘草湯以益氣養(yǎng)陰為治療法則,可能缺少了活血化瘀藥,故其防治心肌缺血的效果不如復(fù)脈湯。綜上,復(fù)脈湯通過益氣活血,能減少急性心肌梗死大鼠血清BNP的濃度,對(duì)急性心肌缺血有一定的保護(hù)作用,其效果與美托洛爾相當(dāng),優(yōu)于炙甘草湯。

      [1]劉媛媛,張曉華,郭晉,等.急性心肌梗死患者血漿腦鈉肽測(cè)定的臨床意義[J].實(shí)用全科醫(yī)學(xué),2008,6(6):565-566.

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