李林軒 唐美瓊 韋坤華等
摘要:分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基,采用正交試驗(yàn)研究植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響,進(jìn)而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖,增殖倍數(shù)為6.5;MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株,誘導(dǎo)系數(shù)為11.5,球莖移栽發(fā)芽成活率達(dá)到90%。
關(guān)鍵詞:青天葵;根狀莖;球莖;誘導(dǎo);增殖
中圖分類號(hào): Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0066-03
收稿日期:2013-10-17
基金項(xiàng)目:廣西自然科學(xué)基金(編號(hào):2011GXNSFA018189)。
作者簡介:李林軒(1986—),男,廣西全州人,助理研究員,從事中藥資源保護(hù)與開發(fā)利用研究。E-mail:starry1125@sina.com。
通信作者:白隆華,研究員,從事中藥資源保護(hù)與利用研究。E-mail:whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii (Hance)Schitr]的葉或帶球莖的葉,別名獨(dú)葉蓮、獨(dú)腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平,味苦,甘、涼,有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效,主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材,也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材,經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高,主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地,屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危,已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),青天葵組培球莖不僅能正常生長,而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7],本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件,以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)模化生產(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。
1材料與方法
1.1材料
供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株,經(jīng)廣西藥用植物園鑒定,選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min,清洗干凈,用自來水沖洗10 min,置于0.1%氯化汞溶液(加1~2點(diǎn)的吐溫)浸泡消毒10 min,再用無菌水浸洗5次,然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8],培養(yǎng)條件為pH 值5.8,平均照度2 000 lx,光照時(shí)間12 h/d,溫度(25±3) ℃,30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖,作為試驗(yàn)材料(圖1)。
1.2方法
1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段,接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA(表1)的MS基本培養(yǎng)基中,觀察其對(duì)青天葵根狀莖繁殖的影響。
3結(jié)論與討論
6-BA是最重要的細(xì)胞分裂素,能促進(jìn)細(xì)胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長等;NAA是植物生長調(diào)節(jié)劑,具有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大、誘導(dǎo)形成不定根等作用;IAA是植物生長素,能促進(jìn)細(xì)胞分裂與細(xì)胞生長,誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進(jìn)植物生長,因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對(duì)青天葵生長具有較大影響。本研究表明,青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA,在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多,增殖數(shù)為6.5倍,且根狀莖粗細(xì)適中。
青天葵為蘭科植物,和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對(duì)青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn),在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個(gè)月,根莖上長出綠色的芽,并伸展成為葉柄和葉片,并在葉柄下端長出白色的根[8],這與本研究結(jié)果相似,都是使用細(xì)胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進(jìn)行培養(yǎng),青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠(yuǎn)低于新球莖誘導(dǎo)率,植株移栽成活率也低于球莖,且試管苗沒有球莖便于攜帶和運(yùn)送,不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明,球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5,且球莖質(zhì)量好,球莖發(fā)芽成活率達(dá)到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同,但都是使用高濃度生長激素進(jìn)行球莖誘導(dǎo)。
參考文獻(xiàn):
[1]國家中醫(yī)藥管理局. 中華本草:第8冊(cè)[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:740-741.
[2]汪松,解炎.中國物種紅色名錄[M]. 北京:高等教育出版社,2004:455.
[3]吳慶華,凌征柱,陸永梅. 中藥青天葵組培球莖栽培的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2001,12(10):958-958.
[4]姜靈敏,徐有明,張冬梅,等. 紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(4):914-916.
[5]余桂紅,張旭,孫曉波,等. 大麥蘇啤4號(hào)幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,29(5):953-956.
[6]張寧寧,夏明霞,張瓊,等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(4):42-44.
[7]潘艷艷,那少眾,王福維,等. 全緣橐吾組培再生體系的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(1):56-59.
[8]杜勤,陳文利,王振華,等. 青天葵組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J]. 中國中藥雜志,2005,30(11):812-814.
[9]周維燕. 植物細(xì)胞工程原理與技術(shù)[M]. 北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2001.
[10]曹孜義,劉國民. 實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M]. 蘭州:甘肅科學(xué)技術(shù)出版社,2002:145.
[11]凌征柱,梁學(xué)金,潘素芬,等. 青天葵誘導(dǎo)多球莖及叢生苗的研究[J]. 種子,1998(5):35-36.
摘要:分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基,采用正交試驗(yàn)研究植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響,進(jìn)而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖,增殖倍數(shù)為6.5;MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株,誘導(dǎo)系數(shù)為11.5,球莖移栽發(fā)芽成活率達(dá)到90%。
關(guān)鍵詞:青天葵;根狀莖;球莖;誘導(dǎo);增殖
中圖分類號(hào): Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0066-03
收稿日期:2013-10-17
基金項(xiàng)目:廣西自然科學(xué)基金(編號(hào):2011GXNSFA018189)。
作者簡介:李林軒(1986—),男,廣西全州人,助理研究員,從事中藥資源保護(hù)與開發(fā)利用研究。E-mail:starry1125@sina.com。
通信作者:白隆華,研究員,從事中藥資源保護(hù)與利用研究。E-mail:whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii (Hance)Schitr]的葉或帶球莖的葉,別名獨(dú)葉蓮、獨(dú)腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平,味苦,甘、涼,有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效,主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材,也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材,經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高,主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地,屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危,已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),青天葵組培球莖不僅能正常生長,而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7],本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件,以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)?;a(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。
1材料與方法
1.1材料
供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株,經(jīng)廣西藥用植物園鑒定,選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min,清洗干凈,用自來水沖洗10 min,置于0.1%氯化汞溶液(加1~2點(diǎn)的吐溫)浸泡消毒10 min,再用無菌水浸洗5次,然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8],培養(yǎng)條件為pH 值5.8,平均照度2 000 lx,光照時(shí)間12 h/d,溫度(25±3) ℃,30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖,作為試驗(yàn)材料(圖1)。
1.2方法
1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段,接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA(表1)的MS基本培養(yǎng)基中,觀察其對(duì)青天葵根狀莖繁殖的影響。
3結(jié)論與討論
6-BA是最重要的細(xì)胞分裂素,能促進(jìn)細(xì)胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長等;NAA是植物生長調(diào)節(jié)劑,具有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大、誘導(dǎo)形成不定根等作用;IAA是植物生長素,能促進(jìn)細(xì)胞分裂與細(xì)胞生長,誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進(jìn)植物生長,因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對(duì)青天葵生長具有較大影響。本研究表明,青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA,在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多,增殖數(shù)為6.5倍,且根狀莖粗細(xì)適中。
青天葵為蘭科植物,和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對(duì)青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn),在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個(gè)月,根莖上長出綠色的芽,并伸展成為葉柄和葉片,并在葉柄下端長出白色的根[8],這與本研究結(jié)果相似,都是使用細(xì)胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進(jìn)行培養(yǎng),青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠(yuǎn)低于新球莖誘導(dǎo)率,植株移栽成活率也低于球莖,且試管苗沒有球莖便于攜帶和運(yùn)送,不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明,球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5,且球莖質(zhì)量好,球莖發(fā)芽成活率達(dá)到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同,但都是使用高濃度生長激素進(jìn)行球莖誘導(dǎo)。
參考文獻(xiàn):
[1]國家中醫(yī)藥管理局. 中華本草:第8冊(cè)[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:740-741.
[2]汪松,解炎.中國物種紅色名錄[M]. 北京:高等教育出版社,2004:455.
[3]吳慶華,凌征柱,陸永梅. 中藥青天葵組培球莖栽培的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2001,12(10):958-958.
[4]姜靈敏,徐有明,張冬梅,等. 紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(4):914-916.
[5]余桂紅,張旭,孫曉波,等. 大麥蘇啤4號(hào)幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,29(5):953-956.
[6]張寧寧,夏明霞,張瓊,等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(4):42-44.
[7]潘艷艷,那少眾,王福維,等. 全緣橐吾組培再生體系的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(1):56-59.
[8]杜勤,陳文利,王振華,等. 青天葵組織培養(yǎng)及植株再生的研究[J]. 中國中藥雜志,2005,30(11):812-814.
[9]周維燕. 植物細(xì)胞工程原理與技術(shù)[M]. 北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2001.
[10]曹孜義,劉國民. 實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M]. 蘭州:甘肅科學(xué)技術(shù)出版社,2002:145.
[11]凌征柱,梁學(xué)金,潘素芬,等. 青天葵誘導(dǎo)多球莖及叢生苗的研究[J]. 種子,1998(5):35-36.
摘要:分別以MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基,采用正交試驗(yàn)研究植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導(dǎo)的影響,進(jìn)而優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)。結(jié)果表明:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖,增殖倍數(shù)為6.5;MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導(dǎo)新球莖獲得再生植株,誘導(dǎo)系數(shù)為11.5,球莖移栽發(fā)芽成活率達(dá)到90%。
關(guān)鍵詞:青天葵;根狀莖;球莖;誘導(dǎo);增殖
中圖分類號(hào): Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0066-03
收稿日期:2013-10-17
基金項(xiàng)目:廣西自然科學(xué)基金(編號(hào):2011GXNSFA018189)。
作者簡介:李林軒(1986—),男,廣西全州人,助理研究員,從事中藥資源保護(hù)與開發(fā)利用研究。E-mail:starry1125@sina.com。
通信作者:白隆華,研究員,從事中藥資源保護(hù)與利用研究。E-mail:whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii (Hance)Schitr]的葉或帶球莖的葉,別名獨(dú)葉蓮、獨(dú)腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平,味苦,甘、涼,有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結(jié)散疬等功效,主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產(chǎn)藥材,也是我國出口創(chuàng)匯主要藥材,經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高,主產(chǎn)于廣西、廣東、四川、云南等地,屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危,已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),青天葵組培球莖不僅能正常生長,而且在相同條件下栽培組培球莖優(yōu)于野生球莖[3]。為了解決青天葵產(chǎn)業(yè)發(fā)展中種源短缺的問題[4-7],本研究利用現(xiàn)代生物技術(shù)優(yōu)化青天葵組織培養(yǎng)條件,以期為青天葵組織培養(yǎng)規(guī)?;a(chǎn)育苗提供技術(shù)支撐。
1材料與方法
1.1材料
供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內(nèi)引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株,經(jīng)廣西藥用植物園鑒定,選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min,清洗干凈,用自來水沖洗10 min,置于0.1%氯化汞溶液(加1~2點(diǎn)的吐溫)浸泡消毒10 min,再用無菌水浸洗5次,然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上[8],培養(yǎng)條件為pH 值5.8,平均照度2 000 lx,光照時(shí)間12 h/d,溫度(25±3) ℃,30 d后將其誘導(dǎo)出芽形成根狀莖,作為試驗(yàn)材料(圖1)。
1.2方法
1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段,接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA(表1)的MS基本培養(yǎng)基中,觀察其對(duì)青天葵根狀莖繁殖的影響。
3結(jié)論與討論
6-BA是最重要的細(xì)胞分裂素,能促進(jìn)細(xì)胞分裂、非分化組織分化、側(cè)芽生長等;NAA是植物生長調(diào)節(jié)劑,具有促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大、誘導(dǎo)形成不定根等作用;IAA是植物生長素,能促進(jìn)細(xì)胞分裂與細(xì)胞生長,誘導(dǎo)形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進(jìn)植物生長,因此在MS培養(yǎng)基中配合使用6-BA、NAA、IAA對(duì)青天葵生長具有較大影響。本研究表明,青天葵根狀莖增殖的最適培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA,在該培養(yǎng)基上形成根狀莖的數(shù)量最多,增殖數(shù)為6.5倍,且根狀莖粗細(xì)適中。
青天葵為蘭科植物,和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業(yè)化上尤為重要[10]。杜勤等對(duì)青天葵組織培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn),在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)1個(gè)月,根莖上長出綠色的芽,并伸展成為葉柄和葉片,并在葉柄下端長出白色的根[8],這與本研究結(jié)果相似,都是使用細(xì)胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進(jìn)行培養(yǎng),青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導(dǎo)率遠(yuǎn)低于新球莖誘導(dǎo)率,植株移栽成活率也低于球莖,且試管苗沒有球莖便于攜帶和運(yùn)送,不利于青天葵大規(guī)模生產(chǎn)與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明,球莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,在該培養(yǎng)基中青天葵球莖誘導(dǎo)系數(shù)為11.5,且球莖質(zhì)量好,球莖發(fā)芽成活率達(dá)到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導(dǎo)培養(yǎng)基[11]稍有不同,但都是使用高濃度生長激素進(jìn)行球莖誘導(dǎo)。
參考文獻(xiàn):
[1]國家中醫(yī)藥管理局. 中華本草:第8冊(cè)[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:740-741.
[2]汪松,解炎.中國物種紅色名錄[M]. 北京:高等教育出版社,2004:455.
[3]吳慶華,凌征柱,陸永梅. 中藥青天葵組培球莖栽培的研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2001,12(10):958-958.
[4]姜靈敏,徐有明,張冬梅,等. 紅刺玫愈傷組織誘導(dǎo)再生體系的建立[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(4):914-916.
[5]余桂紅,張旭,孫曉波,等. 大麥蘇啤4號(hào)幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,29(5):953-956.
[6]張寧寧,夏明霞,張瓊,等. 卡特蘭組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(4):42-44.
[7]潘艷艷,那少眾,王福維,等. 全緣橐吾組培再生體系的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(1):56-59.
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