耿滿(mǎn)奎 趙 斌 韓 龍 岳 璽

量壓法和酶法測(cè)定血清二氧化碳的方法學(xué)比較

耿滿(mǎn)奎 趙 斌 韓 龍 岳 璽

目的 對(duì)量壓法和酶法檢測(cè)血清二氧化碳的方法學(xué)進(jìn)行比較, 分析兩種方法測(cè)定血清二氧化碳有無(wú)顯著性差異。方法 依據(jù)美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)制定的有關(guān)文件, 用量壓法與酶法分別測(cè)定血清二氧化碳100例, 運(yùn)用兩種方法檢測(cè)血清二氧化碳的濃度, 計(jì)算相關(guān)系數(shù)r和線性回歸方程, 并驗(yàn)證兩種方法的可比性、精密度和線性關(guān)系。結(jié)果 量壓法和酶法相關(guān)性比較的回歸方程為Y=0.8149X+4.7625, 相關(guān)系數(shù)r=0.9133 , 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001); 量壓法測(cè)定血清中的二氧化碳濃度為(22.68±2.03) mmol/L, 酶法為(23.24±1.81) mmol/L, 說(shuō)明量壓法與酶法測(cè)定血清CO2濃度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.001)；兩種方法的批內(nèi)和批間精密度均<5%。結(jié)論 量壓法與酶法測(cè)定血清中CO2的相關(guān)性、線性和精密度均較好, 測(cè)定結(jié)果具有可比性, 可以為臨床所接受。

二氧化碳；量壓法；酶法

二氧化碳是判斷人體酸堿平衡的重要項(xiàng)目, 也是常用的急診項(xiàng)目。陜西省西安市高陵縣中醫(yī)醫(yī)院測(cè)定二氧化碳有兩種儀器, 分別是江蘇南京勞拉的FAITH-4060型分立式全自動(dòng)生化分析儀和廣東梅州康立的AFT-601D型電解質(zhì)分析儀。生化分析儀主要采用酶法, 用于大批量的標(biāo)本測(cè)定, 而AFT-601D型電解質(zhì)分析儀則采用量壓法, 主要用于急診檢驗(yàn)。由此產(chǎn)生一個(gè)問(wèn)題, 即同一患者標(biāo)本在兩臺(tái)機(jī)器上測(cè)定的結(jié)果有無(wú)顯著差異, 對(duì)臨床的診斷有無(wú)影響, 為給臨床提供客觀準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果, 作者依據(jù)有關(guān)文件對(duì)兩種方法進(jìn)行比對(duì)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 本院隨機(jī)選擇門(mén)診及住院患者共計(jì)100例, 標(biāo)本采集均采用真空負(fù)壓針頭和真空負(fù)壓促凝管, 由專(zhuān)業(yè)醫(yī)護(hù)人員嚴(yán)格按照靜脈采血有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行采集,并經(jīng)3000 r/min離心10 min分離而成。

1.2 儀器：江蘇南京勞拉FAITH-4060型分立式全自動(dòng)生化分析儀。廣東梅州康立AFT-601D型電解質(zhì)分析儀。

1.3 試劑

1.3.1 分立式全自動(dòng)生化分析儀所用試劑由浙江東甌公司提供, 酶法, 試劑批號(hào)：2013070031, 校準(zhǔn)品為上海長(zhǎng)征的臨床化學(xué)校準(zhǔn)血清, 校準(zhǔn)品批號(hào)：822UN。

1.3.2 電解質(zhì)分析儀采用原廠配套的二氧化碳試劑包和標(biāo)準(zhǔn)液, 試劑批號(hào)：1303002, 標(biāo)準(zhǔn)品批號(hào):1302001。

1.3.3 朗道質(zhì)控品批號(hào)：620UE(水平III)。

1.4 測(cè)定方法 每天隨機(jī)選取10份門(mén)診或住院患者新鮮血清, 該標(biāo)本必須符合：無(wú)溶血, 無(wú)黃疸, 非乳糜血。測(cè)試順序第一遍為1~10, 第二遍為10~1, 連續(xù)測(cè)定10 d, 共計(jì)100例。酶法每天用上海長(zhǎng)征的臨床化學(xué)校準(zhǔn)血清定標(biāo)后進(jìn)行測(cè)試,量壓法則用廣東梅州康立的二氧化碳標(biāo)準(zhǔn)液和配套試劑包進(jìn)行定標(biāo)和測(cè)定。兩種方法均使用上海長(zhǎng)征的臨床化學(xué)質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、直線回歸和相關(guān)分析。

2 數(shù)據(jù)處理

2.1 離群點(diǎn)檢查 見(jiàn)表1。以量壓法結(jié)果為X , 酶法結(jié)果為Y , 計(jì)算每份樣本兩種方法測(cè)定結(jié)果的均值(Xi和Yi)樣本重復(fù)測(cè)定值差值的絕對(duì)值(DXi和 DYi)及均數(shù), 兩種方法測(cè)定均值間差值的絕對(duì)值(Yi-Xi)及均數(shù), 超出上述均數(shù)4倍的值作為離群點(diǎn)予以刪除。

表1 量壓法與酶法測(cè)定值差值的均值及控制限

經(jīng)檢查, 無(wú)超出控制限的測(cè)定點(diǎn), 無(wú)離群點(diǎn)產(chǎn)生, 可繼續(xù)進(jìn)行相關(guān)分析。

2.2 線性相關(guān)分析 以量壓法測(cè)定的CO2濃度為X軸, 酶法CO2濃度測(cè)定值為Y軸繪制散點(diǎn)圖(見(jiàn)圖1) , 得線性回歸方程為Y=0.8149X+4.7625, 相關(guān)系數(shù)r=0.9133, 經(jīng)t檢驗(yàn)得：tr=22.20, tr>t0.001(98)。所以 P＜0.001, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 說(shuō)明量壓法與酶法測(cè)定值之間存在顯著相關(guān)關(guān)系。

2.3 線性回歸的方差分析 對(duì)線性回歸方程為Y=0.8149X+ 4.7625進(jìn)行方差分析, 得F=55.98, F>F0.001(1,98),所以P＜0.001, 故量壓法與酶法兩種測(cè)定方法之間存在明顯線性回歸關(guān)系。見(jiàn)表2。

表2 回歸系數(shù)方差分析

2.4 量壓法與酶法測(cè)定血清CO2濃度的比較 見(jiàn)表3。

結(jié)過(guò)配對(duì)t檢驗(yàn), 得統(tǒng)計(jì)量t=-6.8188, t

表3 量壓法與酶法測(cè)定血清CO2濃度結(jié)果對(duì)比 (mmol/L)

2.5 預(yù)期偏差分析 見(jiàn)表4。

根據(jù)量壓法與酶法的線性回歸方程Y=0.8149X+4.7625,在醫(yī)學(xué)決定水平 20 mmol/L 和30 mmol/L 處分別計(jì)算其預(yù)期偏差和相對(duì)偏差, 經(jīng)統(tǒng)計(jì)兩種實(shí)驗(yàn)方法之間的相對(duì)偏差均小于允許誤差, 說(shuō)明兩種方法所得數(shù)據(jù)具有可比性, 其結(jié)果的差異可為臨床所接受。

表4 兩種方法測(cè)定血清CO2濃度的預(yù)期偏差與相對(duì)偏差(mmol/L)

2.6 兩種檢測(cè)方法測(cè)定二氧化碳的精密度比較 見(jiàn)表5

用酶法和量壓法分別測(cè)定同一質(zhì)控血清20次(朗道III),進(jìn)行批內(nèi)精密度試驗(yàn)；使用科室日常檢驗(yàn)工作中收集的高、低兩種濃度混合血清, 分別用兩種方法每天測(cè)定一次, 連續(xù)測(cè)定20 d, 進(jìn)行批間精密度試驗(yàn), 經(jīng)測(cè)定變異系數(shù)均<5%, 精密度良好。

表5 量壓法與酶法測(cè)定二氧化碳結(jié)果精密度比較

3 討論

3.1 隨著醫(yī)院業(yè)務(wù)的發(fā)展, 好多項(xiàng)目都有兩種或兩種以上的方法或儀器來(lái)進(jìn)行測(cè)定, 作者目前對(duì)二氧化碳采用的方法是大批量的標(biāo)本用酶法, 急診標(biāo)本用量壓法。此時(shí), 比對(duì)試驗(yàn)就顯得尤為重要。各檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)有可比性, 才能為臨床提供客觀真實(shí)的檢驗(yàn)結(jié)果, 保證醫(yī)療安全。

3.2 本試驗(yàn)數(shù)據(jù)屬于配對(duì)資料, 因此對(duì)兩種方法測(cè)定結(jié)果做了配對(duì)t檢驗(yàn), 量壓法測(cè)定血清中的二氧化碳濃度為(22.68±2.03) mmol/L, 酶法為(23.24±1.81) mmol/L, 兩種方法測(cè)定血清CO2濃度的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.001)。

3.3 測(cè)定血清二氧化碳影響因素很多, 在各個(gè)環(huán)節(jié)都容易導(dǎo)致誤差的產(chǎn)生, 下面就可能的影響因素進(jìn)行分析。

3.3.1 兩種方法測(cè)定原理不同, 不同方法之間本身就會(huì)存在差異。量壓法原理是利用壓敏傳感器來(lái)完成二氧化碳的測(cè)量, 樣品內(nèi)的二氧化碳濃度與其相應(yīng)電壓成正比； 酶法的原理是堿化標(biāo)本后二氧化碳通過(guò)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶-蘋(píng)果酸脫氫酶 -NADH的偶聯(lián)反應(yīng)體系測(cè)定, 在波長(zhǎng)340 nm 處,吸光度下降的速率與樣品中的二氧化碳含量成正比［1］。

3.3.2 血液標(biāo)本開(kāi)蓋后應(yīng)在 60 min 內(nèi)測(cè)定出結(jié)果。因?yàn)檠褐械亩趸茧x體后易受外界環(huán)境的影響, 如果開(kāi)蓋后長(zhǎng)時(shí)間不做, 容易使二氧化碳逸出從而使測(cè)定值降低［2］。檢驗(yàn)人員接到標(biāo)本并打開(kāi)試管后, 應(yīng)立即檢測(cè), 時(shí)間上一定要有緊迫感。如不能立即測(cè)定, 最好保持試管的密封狀態(tài)。

3.3.3 采用真空負(fù)壓管, 樣本在密閉環(huán)境中保存, 可以防止二氧化碳從血清中逸出。在一定時(shí)間內(nèi), 測(cè)定結(jié)果相當(dāng)穩(wěn)定［3］。

3.3.4 酶法的優(yōu)點(diǎn)是適合大批量標(biāo)本。缺點(diǎn)是檢測(cè)過(guò)程中試劑易與空氣中的CO2發(fā)生化學(xué)反應(yīng), 導(dǎo)致試劑中的還原成分易被氧化, 空白吸光度值下降, 檢測(cè)結(jié)果偏低［4］, 所以不像其他生化項(xiàng)目, 每一批試劑定一次標(biāo), CO2測(cè)定每天都必須定標(biāo), 費(fèi)時(shí)費(fèi)力, 而且在上機(jī)時(shí)必須考慮交叉污染的問(wèn)題。生化項(xiàng)目的排序大致如下：AIT, AST, ALP, GGT, CHE, TP, ALB, TBIL, DBIL, UREA, UA, CRE, CKMB, HBDH, LDH, GLU, TG, CHO, HDJ, LDL, APOA1, APOB, AMY, CO2, P, CA［5］, 二氧化碳的測(cè)試順序排在淀粉酶后面, 可以基本解決交叉污染；量壓法的優(yōu)點(diǎn)是快速準(zhǔn)確, 測(cè)試在特定的通道中進(jìn)行, 不考慮交叉污染的問(wèn)題。雖然量壓法也需要測(cè)定前定標(biāo), 但是每次定標(biāo)僅需要幾分鐘, 比生化儀快速便捷。但如果標(biāo)本量大,先做二氧化碳再做其他生化項(xiàng)目就顯得工作效率低下, 而且二氧化碳?jí)好魝鞲衅鞯姆€(wěn)定性直接影響結(jié)果。因此, 對(duì)電解質(zhì)分析儀的日常維護(hù)相當(dāng)重要。目前的維護(hù)是每天測(cè)試完成后做3次管道沖洗, 并清潔采樣針以防止管道堵塞；每周做1次去蛋白；從半年的運(yùn)行來(lái)看, 效果良好。

3.4 本次試驗(yàn)依據(jù)美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)制定的有關(guān)文件［6］, 對(duì)測(cè)定血清二氧化碳的兩種方法酶法與量壓法進(jìn)行了比較, 兩者相關(guān)性較好, 線性回歸方程為Y=0.8149X+4.7625, 相關(guān)系數(shù)r=0.9133(P＜0.001), 說(shuō)明量壓法與酶法測(cè)定值之間存在顯著相關(guān)關(guān)系；在醫(yī)學(xué)決定水平 20 mmol/L 和30 mmol/L 處預(yù)期相對(duì)偏差分別為5.30%、2.63%；最后對(duì)酶法與量壓法測(cè)定血清中二氧化碳的精密度進(jìn)行了評(píng)價(jià), 兩種方法的批內(nèi)和批間精密度均<5%, 表明兩種方法的穩(wěn)定性較好, 變異較小。

綜上所述, 量壓法與酶法測(cè)定血清中CO2的相關(guān)性、線性和精密度均較好, 測(cè)定結(jié)果具有可比性, 可以為臨床所接受。

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Methodology comparison of pressure measuring method and enzymatic method in detecting carbon dioxide in serum

GENG Man-kui, ZHAO Bin, HAN Long, et al.Gaoling TCM Hospital, Xi’an 710200, China

Objective To compare pressure measuring method and enzymic method in detecting carbon dioxide in serum, analyse if there is significant difference in the two methods for determination of carbon dioxide in serum .Methods According to EP9-A file U.S.National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) formulation , the pressure measuring method and enzymic method were used to detect the concentrations of carbon dioxide in serum in 100 cases, calculated the correlation coefficient (r) and linear regression equations ,and verified comparable precision and linearity of the two methods.Results The regression equations related to pressure measuring method and comparison of enzymic method Y=0.8149X+4.7625, Correlation coefficient r=0.9133, the difference was statistically significant(P<0.001); Measurement result of carbon dioxide concentration in serum with pressure measuring method was (22.68±2.03) mmol/L, the one with enzymic method was (23.24±1.81) mmol/L, described pressure measuring method and enzymic method determination of CO2 concentration difference in serum was not statistically significant (P>0.001); Two methods of intra batch and inter batch precision was less than 5%.Conclusion Pressure measuring method and enzymic method are good in determination of serum CO2 correlation, linearity and precision, and measurement results are comparable, which can be accepted by clinically doctors.

Carbon dioxide; Pressure measuring method; Enzymic method

710200 陜西省西安市高陵縣中醫(yī)醫(yī)院(耿滿(mǎn)奎韓龍 岳璽) ； 陜西省咸陽(yáng)市禮泉縣中醫(yī)醫(yī)院(趙斌)

耿滿(mǎn)奎