哈爾濱三樂生物工程有限公司，黑龍江 哈爾濱 150000

HPLC法測定遼源七厘散中大黃酸、大黃素、大黃酚的含量

張德志

哈爾濱三樂生物工程有限公司，黑龍江 哈爾濱 150000

目的為進(jìn)一步控制遼源七厘散質(zhì)量，建立該藥中大黃酸、大黃素、大黃酚的含量測定方法。方法以Luan-C18 (150mm×4.6mm，5μm)為色譜柱，柱溫：35℃；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80:20)洗脫；檢測波長：254nm；進(jìn)樣量10μl。結(jié)果該方法檢測大黃酸、大黃素、大黃酚線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均在98.5%以上，遼源七厘散中含量大黃酸、大黃素、大黃酚的平均含量分別為1.258、1.319 、4.297 mg/g。結(jié)論該方法專屬性好，準(zhǔn)確度高，可用于評價遼源七厘散的質(zhì)量。

遼源七厘散；大黃酸；大黃素；大黃酚；HPLC

遼源七厘散收載于部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第六冊[1]，由血竭、紅花、大黃、兒茶、降香等10余種中藥配制而成。具有舒筋活血、散瘀止痛之功效，用于跌打損傷、瘀血內(nèi)停、扭腰岔氣、紅腫作痛的治療。大黃含有蒽醌類有效成分，本文采用水解的方法，采用HPLC法同時測定大黃酸、大黃素、大黃酚的含量，方法穩(wěn)定可靠，可作為該制劑的的質(zhì)量控制方法應(yīng)用生產(chǎn)的質(zhì)量控制，提高藥品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀(LC-20AT泵，SPDM20A檢測器，SIL-20A自動進(jìn)樣器，LC-Solu-tion色譜工作站)。

1.2 試藥 大黃酸對照品(批號110757-201206，中國藥品生物制品檢定所)；大黃素對照品(批號110756-201210，中國藥品生物制品檢定所)；大黃酚對照品(批號110796-201015，中國藥品生物制品檢定所)；遼源七厘散(批號：20120506、20120610、20120803，哈爾濱三樂生物工程有限公司制藥廠)；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 將大黃酸、大黃素、大黃酚對照品精密稱取適量，配制成分別含大黃酸、大黃素、大黃酚32μg/ml混合對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 將遼源七厘散稱取0.8 g放入錐形瓶中，加甲醇25ml加熱回流2h，冷卻后用甲醇補(bǔ)足到回流前質(zhì)量。離心過濾后精密量取濾液10ml放入燒瓶中，加熱待溶劑發(fā)干后加80ml/L鹽酸溶液10ml，經(jīng)2min超聲后加三氯甲烷10ml回流1h，冷卻后置入分液漏斗中，取三氯甲烷層，剩余酸液層再用10ml三氯甲烷振搖提取合并三氯甲烷液，將三氯甲烷回收后的殘?jiān)眉状既芙庥?0ml量瓶定容，過濾后的溶液待測。

2.3 陰性樣品溶液的制備 按照遼源七厘散制備工藝，將去除大黃的其余中藥粉碎，然后按照“2.2項(xiàng)”的方法制備陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件 色譜柱：Luan-C18 (150mm×4.6 mm，5μm)；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80:20); 測波長：254 nm；進(jìn)樣量：10μl；柱溫35℃，理論塔板數(shù)以大黃酸峰計(jì)算不低于3000。檢測三種標(biāo)準(zhǔn)品，色譜峰分離良好。

陰性對照組

混合對照品組(1大黃酸，2大黃素，3大黃酚)

供試樣品組(1大黃酸，2大黃素，3大黃酚)

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取2.1項(xiàng)下對照品溶液按上述色譜條件分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、20μl，記錄色譜圖。以對照品質(zhì)量X為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行大黃酸、大黃素、大黃酚回歸計(jì)算，

y=2.66×103X-2.09×103(r=0.9999，n=6)；y=2.68×103X-2.13×103(r=0.9999，n=6) ；y=3.16×103X-1.79×103(r=0.9999，n=6)。結(jié)果表明，大黃酸、大黃素、大黃酚質(zhì)量分別在72.32～1389.7、65.34～1256.1、69.88～1501.6 ng內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 將對照品溶液按上述方法重復(fù)檢測6次，計(jì)算大黃酸、大黃素、大黃酚色譜峰面積的RSD分別為0.29%，0.30%，0.21%。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 將混合對照品溶液配置后的0、1、2、4、6、12 h后按上述條件測定，大黃酸、大黃素、大黃酚色譜峰面積的RSD分別為0.71%，0.68%，0.79%，表明試驗(yàn)所配置對照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 將三種對照品加入不含大黃的陰性樣品中，進(jìn)行回收率測定分析，計(jì)算大黃酸、大黃素、大黃酚平均回收率分別為98.5%，99.4%，98.7%。

2.9 含量測定 按上述條件及提取方法對樣品溶液進(jìn)行測定，計(jì)算其含量，結(jié)果見表1。

表1 遼源七厘散含量測定結(jié)果(mg/g)

3 討論

遼源七厘散為治療跌打損傷的中成藥，文獻(xiàn)報(bào)道了該藥中紅花、大黃、血竭、冰片、兒茶、骨碎補(bǔ)等藥味的薄層鑒別，并對紅花黃色素A的含量進(jìn)行了HPLC法測定[2-3]。為了進(jìn)一步控制和提高遼源七厘散的質(zhì)量，本文對提取條件進(jìn)行了摸索，證實(shí)甲醇回流-加酸水解-萃取的方法較甲醇、酸水解和超聲提取等方法處理樣品，提取充分、對大黃有效成分的干擾小。波長掃描發(fā)現(xiàn)，三種檢測物質(zhì)在254nm時均能檢測并且干擾較少；甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動相較單純甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液分流三種檢測物質(zhì)較好雜峰較少[4-6]。應(yīng)用上述條件測定遼源七厘散中含量大黃酸、大黃素、大黃酚含量，其含量平均分別為1.258、1.319、4.297 mg/g。可用于遼源七厘散的生產(chǎn)質(zhì)量控制。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第六冊)[S]．1993：51．

[2] 趙曉霞，張清波，李慧勇，等．遼源七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2009，10(3)：196-199．

[3] 王立剛，王成凱．遼源七厘散的薄層色譜鑒別[J]．中國健康月刊·B版，2010，11:213-215．

[4] 吳襲．高效液相色譜法測定通經(jīng)甘露丸中大黃酸、大黃素及大黃酚含量[J]．藥物鑒定，2010，19(13)：32-33．

[5] 何素琴，歐陽吉德，肖琳．HPLC法測定膽石通膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量[J]．西北藥學(xué)雜志，2011，26(3)：180-182．

[6] 祝忠民，盧曉榮．HPLC法同時測定三黃片中4種成分的含量[J]．西北藥學(xué)雜志，2008，23(5)：300-301．

R284.1

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1007-8517(2014)14-0006-02

2014.05.27)