戴一，曹殿潔，夏蓮鳳 (安徽新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230088)

二子菊花飲由女貞子、枸杞子、菊花 (質(zhì)量比:3∶3∶2)，組方而成，煎水飲服。本方中女貞子、枸杞子補(bǔ)肝腎、明目，菊花養(yǎng)肝明目，用于肝腎陰虛，眼目干澀，視物昏花，或視力減退［1］，該方對(duì)久坐注視、久用電腦、電子輻射等帶來的損害有積極治療保健作用。研究報(bào)道顯示女貞子中含有豐富的紅景天苷［2］?，F(xiàn)代藥理研究表明紅景天苷具有多種藥理作用，如抗疲勞作用［3］、抗衰老［4］、心肌損傷保護(hù)作用［5-6］。由于紅景天苷極性較大，在水中溶解度答，二子菊花飲又以茶形式使用，因此研究二子菊花飲中是否含有紅景天苷對(duì)于揭示二子菊花飲的保健作用具有重要參考價(jià)值，同時(shí)對(duì)于二子菊花飲質(zhì)量的保證、保健價(jià)值的提升、商業(yè)化的開發(fā)具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)采用水煎煮后濃縮干燥，對(duì)所得提取物采用HPLC測(cè)定紅景天苷的含量，為進(jìn)一步研究與開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

女貞子購(gòu)自于亳州藥材市場(chǎng)，枸杞子、菊花為貢菊 (藥圣堂制藥有限公司)。紅景天苷對(duì)照品 (天津一方科技有限公司);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

安捷倫1260高效液相色譜儀，安捷倫1260MWD檢測(cè)器，安捷倫1260二元泵 (美國(guó)安捷倫科技公司);梅特勒-托利多AB135-S電子分析天平 (梅特勒-托利多國(guó)際股份有限公司);FA2004型電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);Eppendorf Research移液器 (德國(guó)Eppendorf股份公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Inertsil ODS-3C18(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇∶水 (17∶83);流速1ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):220nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量:20μl［7］。在此條件下對(duì)照品及供試品溶液圖譜見圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取紅景天苷對(duì)照品4.60mg，置10ml容量瓶中，加甲醇制成每1ml含紅景天苷0.460mg的溶液，搖勻，即得對(duì)照品貯備液，低溫避光貯藏，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取女貞子、枸杞子各18g，菊花12g，加10倍量水，于圓底燒瓶中煎煮1.5h，抽濾，煎煮3次，濾液合并、濃縮至干后真空40℃干燥48h，得干膏，精密稱取二子菊花飲干膏1.0g，加水25ml，超聲溶解，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

圖1 紅景天苷對(duì)照品 (a)及二子菊花飲供試品 (b)HPLC色譜圖

2.4 方法學(xué)考查

HPLC法［7］測(cè)定紅景天苷的含量。

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液3、5、7、10、12μl，按上述色譜條件進(jìn)樣分析。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=644.67X－551.74，r=0.9992。結(jié)果表明，紅景天苷檢測(cè)濃度在1.38～5.52μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液20μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果:紅景天苷峰面積的RSD=0.75%，表明儀器精密度較好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、6h精密吸取20μl進(jìn)樣。結(jié)果:紅景天苷峰面積的RSD=0.83%，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品5份，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果:二子菊花飲的紅景天苷提取率RSD=1.37%，表明方法重復(fù)性較好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品9份，每份1g，分別精密加入一定量紅景天苷對(duì)照品，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 紅景天苷回收率試驗(yàn)

2.5 樣品含量測(cè)定

精密稱取二子菊花飲提取物1.00g，3批，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積并用外標(biāo)法計(jì)算二子菊花飲的紅景天苷提取率分別為0.0832%、0.0855%、0.0829%，平均為0.0839%，相當(dāng)于1g二子菊花飲可提取出紅景天苷0.832mg，可見二子菊花飲中紅景天苷含量較高。

3 結(jié)論

二子菊花飲為一藥茶，具有較高的保健價(jià)值，研究該茶中所含成分，對(duì)于其保健作用物質(zhì)基礎(chǔ)的揭示具有重要參考意義。本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC法測(cè)定二子菊花飲中主要成分紅景天苷的含量。該方法精密度良好、穩(wěn)定、具有較好的重復(fù)性及較高的回收率，用該法測(cè)得二子菊花飲中紅景天苷的含量平均為0.0839%，為二子菊花飲的進(jìn)一步開發(fā)提供了參考。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典 (一部)［S］.2010版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:43.

［2］李曼玲，徐丹，仝會(huì)娟，等.女貞子不同市售品炮制品及不同果實(shí)部位中紅景天苷的含量測(cè)定［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(2):14-16.

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［7］戚志華，王慶偉，王四旺，等.HPLC法測(cè)定不同生長(zhǎng)期女貞子中紅景天苷的含量［J］.中國(guó)藥房，2010，21(11):996-997.