王紅梅，李南方，洪 靜，羅文利，嚴(yán)治濤，王新玲，朱 沂，沈 巖

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院博士后流動(dòng)站，北京 100005 新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院 2博士后工作站 3高血壓科，烏魯木齊 830001

4中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100005

新疆哈薩克族人弗林蛋白Furin基因變異與高總膽固醇血癥、高低密度脂蛋白膽固醇血癥的相關(guān)性

王紅梅1，2，李南方3，洪 靜3，羅文利3，嚴(yán)治濤3，王新玲3，朱 沂3，沈 巖4

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院博士后流動(dòng)站，北京 100005 新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院2博士后工作站3高血壓科，烏魯木齊 830001

4中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100005

目的研究新疆哈薩克族人高總膽固醇血癥、高低密度脂蛋白膽固醇血癥與弗林蛋白 (Furin)基因變異的相關(guān)性。方法本研究是以橫斷面流行病學(xué)調(diào)查為基礎(chǔ)的病例-對(duì)照研究，878例研究對(duì)象均來(lái)自新疆哈薩克族自然人群。測(cè)定48例隨機(jī)選擇的哈薩克族高膽固醇血癥患者 (女性24例、男性24例)弗林蛋白基因啟動(dòng)子、外顯子區(qū)序列，篩查代表性變異。采用TaqMan PCR分析弗林蛋白基因變異在878例哈薩克族自然人群 (男性370例、女性508例)中的分型，分析其與哈薩克族人血總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平的相關(guān)性。結(jié)果在48例高膽固醇血癥患者中，共篩查出弗林蛋白基因的12個(gè)變異，包括4個(gè)代表性變異 (rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178)。4個(gè)代表性變異均在大樣本哈薩克族人中基因型分型成功 (成功率≥99%)。在哈薩克族自然人群中，rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多態(tài)性的基因型、等位基因、單體型頻率分別在高膽固醇血癥組、對(duì)照組間及高低密度脂蛋白膽固醇血癥組、對(duì)照組間的分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0．05);每個(gè)多態(tài)性的不同基因型攜帶者之間的血總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇平均水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0．05)。結(jié)論新疆哈薩克族人高總膽固醇血癥、高低密度脂蛋白膽固醇血癥與弗林蛋白基因變異不相關(guān)，該變異可能不是哈薩克族人高膽固醇血癥、高低密度脂蛋白膽固醇血癥的易感因素。

弗林蛋白基因;高膽固醇血癥;高低密度脂蛋白膽固醇血癥;哈薩克族;基因變異

Acta Acad Med Sin，2014，36(2)：168-175

自1990年起，心血管疾病就持續(xù)居于我國(guó)居民死亡原因的首位，是重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。1998年WHO全球健康報(bào)告顯示：如果不加以控制，到2030年我國(guó)冠心病患病率將比2000年增加3．7倍。而控制心血管疾病的危險(xiǎn)因素是預(yù)防心血管疾病的主要措施。血脂異常是心血管病主要的、可控制的危險(xiǎn)因素之一。研究表明血脂異常 ［總膽固醇 (total cholesterol，TC)及低密度脂蛋白膽固醇 (low density lipoprotein cholesterol，LDL-c)增加，高密度脂蛋白膽固醇下降］可顯著增加冠心病發(fā)病危險(xiǎn)［1-3］。雖然飲食攝入脂肪增多、代謝異常等因素是血脂異常的主要發(fā)病原因;但研究表明遺傳因素在血脂異常的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用［4-5］。

弗林蛋白 (Furin)是真核生物中廣泛存在一種內(nèi)切蛋白酶，能將許多重要的多肽和蛋白前體剪切加工成具有生物活性的形式［6］。肝臟中高表達(dá)的前蛋白轉(zhuǎn)化酶PCSK9通過(guò)與LDL受體結(jié)合，介導(dǎo)LDL靶向降解，是保持內(nèi)環(huán)境中TC穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵機(jī)制;弗林蛋白是影響肝臟調(diào)節(jié)PCSK9活性和表達(dá)的重要因子［7］。因此，推測(cè)弗林蛋白可能參與了高TC血癥、高LDL-c血癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。

新疆哈薩克族高發(fā)血脂異常［8-10］。由于受文化、信仰、風(fēng)俗、飲食多種因素影響，該民族極少與異族通婚，遺傳背景高度同源;同時(shí)該民族至今仍保留有相對(duì)完整的隔離人類遺傳體系，是研究多基因復(fù)雜疾病的理想人群。前期研究表明：該民族人群高LDL-c血癥與β2-腎上腺素能受體基因變異相關(guān)，但是血管緊張素Ⅱ-1型受體基因的單核苷酸多態(tài)性 (single nucleotide polymorphism，SNPs)與該人群血脂紊亂不相關(guān)［11-13］。本研究通過(guò)測(cè)定弗林蛋白外顯子區(qū)、啟動(dòng)子區(qū)及其周圍序列，篩查新疆哈薩克族人群特異性的弗林蛋白代表性SNPs，并在哈薩克族自然人群中進(jìn)行分型，分析其與哈薩克族高TC血癥、高LDL-c血癥表型的關(guān)系，從遺傳學(xué)角度探討血脂異常的易感機(jī)制，以期為血脂異常的防治提供參考依據(jù)。

對(duì)象和方法

對(duì)象采用多級(jí)隨機(jī)抽樣的方法，對(duì)阜康地區(qū)有本地正式戶口、30～60歲、3代內(nèi)無(wú)異族通婚史的長(zhǎng)住哈薩克族居民進(jìn)行流行病學(xué)現(xiàn)況調(diào)查。調(diào)查前事先登記人口，保證應(yīng)答率，保證入選個(gè)體均為無(wú)關(guān)個(gè)體。在剔除了近1個(gè)月服用調(diào)脂藥物或可能影響血脂的其他藥物者后，最終有878例 (男性370例、女性508例)入選。研究對(duì)象知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查并同意實(shí)施。

方法本研究為以自然人群橫斷面流行病學(xué)調(diào)查為基礎(chǔ)的病例-對(duì)照研究。采用問(wèn)卷調(diào)查方法，由經(jīng)過(guò)統(tǒng)一培訓(xùn)的、精通哈薩克薩克語(yǔ)的專職人員填寫表格、詢問(wèn)病史、體格檢查。所有研究對(duì)象均由培訓(xùn)合格的專業(yè)人員按照標(biāo)準(zhǔn)方法收集一般資料，包括性別、年齡、身高、體重、收縮壓、舒張壓等。

血TC和LDL-c測(cè)定抽取每位受試者空腹靜脈血5 ml，離心，分離血清和血細(xì)胞。在采血后1個(gè)月內(nèi)血清用于血脂檢測(cè)，血細(xì)胞-80℃保存?zhèn)溆?。血脂測(cè)定由新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科派專人完成。依據(jù)《中國(guó)成人血脂異常防治指南》［14］的推薦標(biāo)準(zhǔn)診斷高TC血癥和高LDL-c血癥，即TC≥6．22 mmol/L為高TC血癥，LDL-c≥4．14 mmol/L為高LDL-c血癥。878例研究對(duì)象中高TC血癥190例 (對(duì)照組688例)，高LDL-c血癥249例 (對(duì)照組629例)。

弗林蛋白基因測(cè)序、變異位點(diǎn)篩查和SNPs分析采用PAXgene Blood DNA試劑盒 (QIAGEN，Hilden，德國(guó))，按照試劑盒提供的操作步驟提取研究對(duì)象血細(xì)胞的基因組DNA。在總體樣本中隨機(jī)選擇48例30～60歲高TC血癥患者，采用3100XL基因分析儀 (Applied Biosystems，加利福尼亞，美國(guó))對(duì)弗林蛋白編碼區(qū)和啟動(dòng)子區(qū)測(cè)序。采用Sequencher 4．7基因序列分析軟件 (Gene Codes公司，密歇根州，美國(guó))將測(cè)定序列與弗林蛋白基因標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)，確定變異位點(diǎn)及變異性質(zhì)。采用專業(yè)遺傳學(xué)分析軟件SNPAlyze Ver．7．0．1 pro(Dynacom，千葉，日本)分析該人群特異性的SNPs位點(diǎn)及變異位點(diǎn)間的連鎖不平衡 (linkage disequilibrium，LD)關(guān)系。

Taqman PCR選擇代表SNPs位點(diǎn)進(jìn)行基因分型?；蛐丸b定采用ABI 7900HT PCR儀 (Applied Biosystems)。PCR的反應(yīng)體系：總體積25 μl，包括人TaqMan基因多態(tài)性分型預(yù)混液 (Applied Biosystems)12．5 μl、單核苷酸多態(tài)性分型探針/引物預(yù)混液(Applied Biosystems)1．25 μl、DNA 模板 (20 ng/μl)2 μl、去離子水 9．25 μl。反應(yīng)條件：預(yù)變性 (95 ℃、10 min、1個(gè)循環(huán))，變性 (92℃、15 s) +退火 (60℃、1 min)+延伸(72℃、1 min)43個(gè)循環(huán)，總延伸 (72℃、7 min、1個(gè)循環(huán))。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS 16．0(SPSS Inc．，伊利諾斯州，美國(guó))統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示。組間臨床表型計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn) (兩組間)或單因素方差分析 (3組間)或者協(xié)方差分析 (校正影響因素)，分類資料采用卡方檢驗(yàn)。由基因型頻率計(jì)算等位基因頻率，Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)、兩組間等位基因頻率和基因型頻率比較、單體型分析采用專業(yè)的遺傳學(xué)分析軟件 SNPAlyze Ver．7．0．1 pro。P ＜0．05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

臨床資料與對(duì)照組比較，高TC組的平均年齡、收縮壓、舒張壓、TC、LDL-c增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＜0．05)，兩組間吸煙者、性別比例的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＜0．05)。高LDL-c組的平均年齡、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、TC、LDL-c均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＜0．05)，兩組間性別及吸煙、飲酒者比例的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均 ＜0．05)(表1)。

弗林蛋白基因測(cè)序結(jié)果在48例高TC血癥患者的弗林蛋白基因外顯子及其周圍部分內(nèi)含子、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游1 000 bp測(cè)序范圍內(nèi)共檢出12個(gè)變異位點(diǎn)，其中7個(gè)變異 ［-7315C＞A(rs4932178)、1970C＞G(rs2071410)、2003T＞C(rs1573643)、4369G＞T(rs6225)、4573G ＞T(rs6224)、5604G ＞C(rs6226)、6262C＞T(rs6227)］與NCBI公共數(shù)據(jù)庫(kù)報(bào)道的變異一致;其余5個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的變異位點(diǎn) (表2)。在篩查出的12個(gè)變異位點(diǎn)中，-7315C＞A(rs4932178)、1970C＞G(rs2071410)、2003T＞C(rs1573643)、4573G＞T(rs6224)、5604G＞C(rs6226)、6262C＞T(rs6227)為高頻率SNPs，其余為低頻率SNPs或稀有突變，未篩查出錯(cuò)義突變。

在12個(gè)SNPs位點(diǎn)間，-7315C＞A(rs4932178)與4573G＞T(rs6224)存在LD;1970C＞G(rs2071410)與2003T＞C(rs1573643)存在LD，其余變異位點(diǎn)間無(wú)LD關(guān)系。因?yàn)榈皖l率SNPs均在非編碼區(qū)，而另外3個(gè)稀有突變雖然在外顯子區(qū)，但是為同義突變，結(jié)合LD分析結(jié)果，最終選擇rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178等4個(gè)代表性SNPs在大樣本新疆阜康牧區(qū)哈薩克族人群中進(jìn)一步研究。

4個(gè)代表性SNPs位點(diǎn)的基因分型在878例哈薩克族自然人群中，對(duì)弗林蛋白基因rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多態(tài)性成功進(jìn)行了基因分型，基因分型的讀取率均≥99%，重復(fù)檢測(cè)一致率為100%。病例組、對(duì)照組的基因型、等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

表1 病例組及對(duì)照組臨床資料比較Table 1 Comparisons of clinical data of subjects in case and control groups

表2 48例哈薩克族高膽固醇血癥者弗林蛋白基因啟動(dòng)子、外顯子序列的變異Table 2 Sequence variations in the promoter region and exons in Furin gene identified in 48 Kazakh individuals with hypercholesterolemia

弗林蛋白基因4個(gè)代表性SNPs位點(diǎn)與哈薩克族人高TC、高LDL-c的關(guān)系在878例哈薩克族自然人群中，rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多態(tài)性的基因型 (包括累加模型、顯性模型和隱性模型)、等位基因在高TC組及對(duì)照組、高LDL-c組及對(duì)照組間的分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0．05)(表3)。4個(gè)代表性SNPs位點(diǎn)中的每個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型攜帶者之間的TC水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0．05);rs6227、rs2071410、rs4932178 中的每個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型攜帶者之間的LDL-c水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0．05)，雖然rs6226多態(tài)性的不同基因型攜帶者之間的LDL-c水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P=0．012)，但是采用協(xié)方差分析方法校正年齡、體重指數(shù)、血壓、性別、飲酒等影響因素后，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＞0．05)(表 4)。由 rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178組成的常見單體型 (H1～H5)頻率在高TC組及對(duì)照組、高LDL-c組及對(duì)照組間的分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0．05)(表5)。

表3 基因型、等位基因在病例組及對(duì)照組間分布頻率比較［n(%)］Table 3 Comparison of the genotype and allele distributions in the case and control groups［n(%)］

表4 不同基因型哈薩克族人群血清總膽固醇、低密度脂蛋白水平比較 (±s，mmol/L)Table 4 Comparisons of total cholesterol and low-density lipoprotein cholesterin levels between Kazakh general population with different genotypes(x－±s，mmol/L)

表4 不同基因型哈薩克族人群血清總膽固醇、低密度脂蛋白水平比較 (±s，mmol/L)Table 4 Comparisons of total cholesterol and low-density lipoprotein cholesterin levels between Kazakh general population with different genotypes(x－±s，mmol/L)

基因型Genotype 總膽固醇Total cholesterol P 低密度脂蛋白膽固醇Low-density lipoprotein cholesterin P rs6226 C/C(n=295) 4．92 ±1．041 0．140 2．93 ±0．790 0．012 C/G(n=435) 5．06 ±1．045 3．10 ±0．852 G/G(n=136) 4．93 ±0．956 2．95 ±0．956 rs6227 C/C(n=643) 4．99 ±1．017 0．790 3．01 ±1．017 0．840 C/T(n=212) 4．98 ±1．066 3．04 ±0．831 T/T(n=19) 5．13 ±1．149 2．95 ±0．901 rs2071410 C/C(n=637) 4．98 ±1．007 0．602 3．01 ±0．819 0．930 C/G(n=214) 5．01 ±1．088 3．03 ±0．822 G/G(n=18) 5．22 ±1．142 2．99 ±0．913 rs4932178 C/C(n=570) 4．98 ±1．000 0．638 3．01 ±0．814 0．702 C/T(n=260) 5．04 ±1．083 3．04 ±0．836 T/T(n=38)4．93 ±1．0852．92 ±0．842

表5 病例組與對(duì)照組弗林蛋白基因單體型頻率比較 (%)Table 5 Comparison of hyplotype frequencies of Furin polymorphisms between the case and control groups(%)

討 論

本研究是新疆哈薩克族人肥胖、高血壓等相關(guān)代謝性疾病遺傳機(jī)制系列研究之一。由于NCBI和Hap-Map數(shù)據(jù)庫(kù)中未提供新疆哈薩克族人的基因組變異信息，加之基因變異因種族、地域等的不同可表現(xiàn)為不同形式，所以本研究采取直接測(cè)序法尋找哈薩克族人弗林蛋白基因的常見SNPs、稀有突變及低頻率SNPs，然后根據(jù)連鎖不平衡關(guān)系選取該民族特異性的代表性SNPs，并進(jìn)一步經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查和基因分析獲得新疆哈薩克族人群弗林蛋白基因分型及與高血脂的關(guān)系。

弗林蛋白是真核生物細(xì)胞中一種重要的內(nèi)切蛋白酶，可以識(shí)別剪切多種蛋白質(zhì)，如生長(zhǎng)因子、血清蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶、受體、病毒囊膜蛋白和細(xì)菌外毒素等［15-16］。在肝臟中高度表達(dá)的前蛋白轉(zhuǎn)化酶PCSK9是一種與弗林蛋白高度同源的蛋白酶，PCSK9通過(guò)與LDL受體結(jié)合，靶向介導(dǎo)LDL受體降解，進(jìn)而保持TC在內(nèi)環(huán)境中穩(wěn)態(tài)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，當(dāng)小鼠表達(dá)弗林蛋白降低時(shí)，其肝臟內(nèi)的PCSK9活性顯著增加，PCSK9的mRNA水平增加35%，LDL受體減少了26%，因此弗林蛋白是影響肝臟調(diào)節(jié)PCSK9活性和表達(dá)的重要因子［7］。故筆者推測(cè)弗林蛋白可能參與了高TC血癥、高LDL-c血癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，弗林蛋白的編碼基因是高TC血癥、高LDL-c血癥的候選基因，因此有必要進(jìn)一步研究該基因變異與哈薩克族人群高TC血癥、高LDL-c血癥的相關(guān)性。

本研究在48例哈薩克族高TC血癥患者弗林蛋白基因外顯子及其周圍部分內(nèi)含子、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游1 000 bp范圍內(nèi)共檢出12個(gè)變異位點(diǎn)，其中NCBI和HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)未報(bào)道的變異位點(diǎn)5個(gè)，未篩查出錯(cuò)義突變，弗林蛋白基因的高度保守性說(shuō)明弗林蛋白在維持機(jī)體正常功能方面具有重要作用。

本研究顯示弗林蛋白基因的4個(gè)代表性變異位點(diǎn)(rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178) 的基因型、等位基因在高TC血癥組與對(duì)照組間、高LDL-c血癥組與對(duì)照組間的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證實(shí)弗林蛋白基因變異可能與新疆哈薩克族人高TC血癥、高LDL-c血癥不相關(guān)。其可能原因有：(1)血脂紊亂是由遺傳因素、易感因素與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，因此有必要進(jìn)一步聯(lián)合研究遺傳、環(huán)境因素及其交互作用在其發(fā)病中的作用;此外，作為一種多基因疾病，某一單個(gè)基因的變異可能在其發(fā)病中的作用甚微，故尚需要進(jìn)行多基因及基因-基因交互作用研究。(2)關(guān)聯(lián)研究常受到假陰性、假陽(yáng)性的影響。關(guān)聯(lián)研究出現(xiàn)假陰性結(jié)果的主要原因是混雜因素干擾。在諸多混雜因素中，一個(gè)極其重要但又常被忽視的因素即是群體的遺傳分層現(xiàn)象，這常由遺傳背景不一致的亞人群混合所致。群體分層對(duì)遺傳關(guān)聯(lián)分析的直接影響可能導(dǎo)致結(jié)果偏倚，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。因此，在進(jìn)行病例對(duì)照的關(guān)聯(lián)研究時(shí)，應(yīng)盡可能排除群體分層干擾，如加大樣本量、盡可能的選擇一個(gè)遺傳上相對(duì)均質(zhì)的群體等。本研究病例、對(duì)照組樣本均來(lái)自同一地區(qū)、同一時(shí)間、同一個(gè)遺傳上相對(duì)均質(zhì)的相對(duì)隔離群體，而且該人群 rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178的基因型、等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡，因此本研究的結(jié)論是相對(duì)可信的。但本研究樣本量相對(duì)較小，尚需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量及在其他民族人群中驗(yàn)證研究結(jié)論。

綜上，該弗林蛋白基因變異可能與哈薩克族人群高TC血癥、高LDL-c血癥不相關(guān)。

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Relationship between Genetic Variation of Furin Gene and Hypercholesterolemia and Hyper-low-density Lipoprotein Cholesterolemia in Kazakh General Population

WANG Hong-mei1，2，LI Nan-fang3，HONG Jing3，LUO Wen-li3，YAN Zhi-tao3，WANG Xin-ling3，ZHU Yi3，SHEN Yan4

1Postdoctoral Research Station，Institute of Basic Medicine Sciences，CAMS and PUMC，Beijing 100005，China
2Postdoctoral Research Station，3Hypertension Center，the People’s Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi 830001，China
4State Key Laboratory of Medical Molecular Biology，Institute of Basic Medical Sciences，CAMS and PUMC，Beijing 100005，China

Li Nan-fang Tel：0991-8564818，E-mail：lnanfang@yahoo．com．cn

ObjectiveTo investigate the relationship between the genetic variation of Furin gene and the hypercholesterolemia and hyper-low-density lipoprotein cholesterolemia in Kazakh general population．MethodsBased on a cross-sectional epidemiological study in a Kazakh general population，a case-control study including 878 subjects was conducted．All the sequence variant-located promoters and exon regions of Furin gene were identified by the direct sequencing of PCR products in 48 randomly selected hypercholesterolemic individuals(24 males and 24 females)．After having genotyped the representative polymorphisms in 878 subjects by TaqMan PCR，we investigated the relationship between genetic variation of Furin and hypercholesterolemia/hyper-lowdensity lipoprotein cholesterolemia in these subjects．ResultsTwelve genetic variations in Furin gene were identified by sequencing 48 hypercholesterolemic individuals and 4 common single nucleotide polymorphisms(rs6226，rs6227，rs2071410，and rs4932178)were selected as the representatives for genotyping in these subjects．The rs6226，rs6227，rs2071410，and rs4932178 polymorphisms were successfully genotyped．The distribution of the genotypes，alleles，and haplotypes of rs6226，rs6227，rs2071410，and rs4932178 polymorphisms did not differ significantly between the hypercholesterolemia group and the control groups or between the hyper-low-density lipoprotein cholesterolemia group and the control groups(all P＞0．05) ．The cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol levels did not differ significantly among individuals with different genotypes(all P ＞0．05) ．Conclusion The genetic variation of Furin may not be associated with hypercholesterolemia or hyper-low-density lipoprotein cholesterolemia in Kazakh general population．

Furin;hypercholesterolemia;hyper-low-density lipoprotein cholesterolemia;Kazakh;genetic variation

李南方 電話：0991-8564818，電子郵件：lnanfang@yahoo．com．cn

R544．1;R394．5

A

1000-503X(2014)02-0168-08

10．3881/j．issn．1000-503X．2014．02．010

國(guó)家自然科學(xué)基金 (81060030)Supported by the National Natural Sciences Foundation of China(81060030)

2013-09-10)

·論 著·