楊 霞 葉金云* 張易祥 吳成龍 劉 沛，2 王 偉，3

(1.湖州師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開發(fā)技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖州 313000;2.大連海洋大學(xué)，大連 116023;3.溫州醫(yī)科大學(xué)，溫州 325000)

隨著世界人口的增長(zhǎng)和人民生活水平的提高，人們對(duì)水產(chǎn)品的需求量不斷增加。近十幾年來(lái)，水產(chǎn)養(yǎng)殖正逐漸成為提高全球水產(chǎn)品供給量的主要方式，而水產(chǎn)養(yǎng)殖集約化和規(guī)模化的生產(chǎn)又依賴于水產(chǎn)飼料工業(yè)的發(fā)展［1］。由于魚粉營(yíng)養(yǎng)全面、適口性好，一直是水產(chǎn)飼料中不可或缺的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)源。近年來(lái)，隨著魚粉價(jià)格的不斷上揚(yáng)，采用植物蛋白質(zhì)源替代魚粉逐漸受到研究者和養(yǎng)殖者的重視。棉籽粕是一種資源豐富、蛋白質(zhì)含量高、價(jià)格相對(duì)便宜、可以用于水產(chǎn)飼料的優(yōu)質(zhì)植物蛋白質(zhì)源。但是，由于棉籽粕中含有對(duì)動(dòng)物有害的游離棉酚而在使用中受到限制。Yildirim等［2］研究發(fā)現(xiàn)，飼料中游離棉酚達(dá)到300 mg/kg時(shí)，斑點(diǎn)叉尾 幼魚生長(zhǎng)受到抑制，紅細(xì)胞、血紅素和血紅蛋白濃度變低。Lim［3］對(duì)凡納濱對(duì)蝦的研究發(fā)現(xiàn)，用26.5%浸提棉籽粕等氮替代40%的復(fù)合海洋蛋白質(zhì)源，對(duì)蝦的生長(zhǎng)、飼料利用和成活率均無(wú)顯著變化，但替代比例再增加會(huì)導(dǎo)致其生長(zhǎng)性能降低。Cheng等［4］對(duì)虹鱒幼魚的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)棉籽粕在飼料中添加量超過(guò)15%時(shí)，魚體增重率和飼料轉(zhuǎn)化效率顯著降低。以上研究表明，當(dāng)飼料中少量添加棉籽粕時(shí)，不會(huì)抑制水生動(dòng)物的生長(zhǎng);而添加量較高時(shí)，則會(huì)顯著降低飼料的適口性，改變飼料的氨基酸組成，從而抑制水生動(dòng)物生長(zhǎng)。由此可見，用棉籽粕部分替代其他蛋白質(zhì)源是可行的。如果對(duì)棉籽粕進(jìn)行微生物脫毒處理，利用微生物在發(fā)酵過(guò)程中對(duì)游離棉酚的轉(zhuǎn)化降解作用，則可改善棉籽粕的蛋白質(zhì)含量以及適口性，從而進(jìn)一步提高棉籽粕在飼料中的利用率。

中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)，俗稱河蟹、大閘蟹，是我國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖珍品，由于其營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，倍受國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)青睞。關(guān)于其配合飼料中植物蛋白質(zhì)源替代魚粉的研究已有一些報(bào)道［5-10］，而有關(guān)發(fā)酵棉籽粕(FCSM)在中華絨螯蟹配合飼料中的應(yīng)用還未見報(bào)道。本試驗(yàn)擬通過(guò)在配合飼料中添加普通棉籽粕(CSM)和發(fā)酵棉籽粕來(lái)部分或全部替代魚粉飼喂中華絨螯蟹幼蟹，旨在研究不同替代水平對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能、體成分及肝胰腺消化酶活性的影響，并探討普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕作為魚粉替代蛋白質(zhì)源時(shí)在飼料中的適宜添加量，以期充分利用植物蛋白質(zhì)源，為中華絨螯蟹飼料配方中合理添加棉籽粕提供相關(guān)的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)采用自主篩選的棉酚降解菌種(HQ-1)［11］對(duì)普通棉籽粕進(jìn)行固體發(fā)酵，30℃下發(fā)酵72 h后收集發(fā)酵棉籽粕，60℃烘干，用萬(wàn)能粉碎機(jī)將其粉碎，過(guò)60目篩，-20℃冰箱中保存?zhèn)溆?。發(fā)酵好的棉籽粕顏色略深于普通棉籽粕，無(wú)異味，無(wú)霉變結(jié)塊。普通棉籽粕與發(fā)酵棉籽粕的化學(xué)成分見表1。

表1 普通棉籽粕與發(fā)酵棉籽粕的化學(xué)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Chemical composition of CSM and FCSM(air-dry basis) %

1.2 試驗(yàn)飼料

以秘魯紅魚粉、豆粕、發(fā)酵棉籽粕或普通棉籽粕為蛋白質(zhì)源，魚油、豆油、卵磷脂為脂肪源配制成11組等氮(粗蛋白質(zhì)，38.39%)等能(總能，19.18 MJ/kg)的試驗(yàn)飼料。普通棉籽粕添加量設(shè)為 0、8.0%、16.0%、24.0%、32.0% 、40.0%(分別記為 CSM0、CSM8、CSM16、CSM24、CSM32、CSM40組);發(fā)酵棉籽粕添加量設(shè)為8.0%、16.0%、24.0%、32.0%、47.5%(分別記為 FCSM8、FCSM16、FCSM24、FCSM32、FCSM47.5組)。以CSM0組為對(duì)照組，試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2，試驗(yàn)飼料氨基酸組成見表3。

試驗(yàn)飼料制作時(shí)，將所有原料粉碎并通過(guò)60目篩，采用逐級(jí)擴(kuò)大法將維生素和礦物質(zhì)預(yù)混料等微量成分按比例充分混勻，然后加入魚油、卵磷脂和水?dāng)嚢杌靹?，通過(guò)飼料機(jī)(型號(hào)SLX-80，上海亞勵(lì)科技貿(mào)易有限公司)擠壓制成直徑為1.5 mm的長(zhǎng)條，55℃烘干，自然冷卻后破碎成粒徑為1～2 mm的破碎料，置于4℃冰箱內(nèi)密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用中華絨螯蟹幼蟹購(gòu)自上海市崇明島長(zhǎng)江口中華絨螯蟹養(yǎng)殖基地，采用經(jīng)過(guò)沉淀、過(guò)濾后的天然池塘水進(jìn)行養(yǎng)殖。幼蟹于水泥池中暫養(yǎng)1周后，挑取體重均一、附肢完整、身體健壯的個(gè)體作為試驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分成11個(gè)組，每組3個(gè)重復(fù)，以重復(fù)為單位放入300 L的水箱中，每箱20只。

?

?

水箱中放置足夠數(shù)量的網(wǎng)片和聚氯乙烯(PVC)管作為隱蔽物，箱內(nèi)水深約30 cm。試驗(yàn)幼蟹的初始體重為(0.56±0.04)g，每組投喂1種試驗(yàn)飼料。養(yǎng)殖期間，采用飽食投喂法，每天08:00和16:30各投喂1次，次日吸污并補(bǔ)充養(yǎng)殖用水，試驗(yàn)期為6周。每周測(cè)量1次水質(zhì)，水溫為(28±2)℃、溶解氧 ＞5 mg/L、pH 7.5±0.5，連續(xù)充氣增氧。

1.4 樣品收集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停食24 h排空腸道，分組稱重，并統(tǒng)計(jì)成活數(shù)。每個(gè)養(yǎng)殖箱中隨機(jī)選取成活數(shù)的1/2立即烘干，制成全蟹樣品用于體成分分析，另外1/2立即解剖，取其肝胰腺用于消化酶活性測(cè)定，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 指標(biāo)測(cè)定

生長(zhǎng)性能指標(biāo)參照以下公式計(jì)算:

成活率(SR，%)=(終末蟹數(shù)/初始蟹數(shù))×100;增重率(WGR，%)=［(終末體重-初始體重)/初始體重］×100;

特定生長(zhǎng)率(SGR，%/d)=［(ln終末體重-ln初始體重)/試驗(yàn)天數(shù)］×100;

蛋白質(zhì)效率(PER，%)=［(終末體重-初始體重)/蛋白質(zhì)攝入量］×100;

飼料系數(shù)(FCR)=投喂量/(終末體重-初始體重)。

飼料原料及全蟹樣品中水分含量采用105℃恒重法測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測(cè)定，粗脂肪含量采用乙醚抽提法測(cè)定，粗灰分含量采用馬福爐550℃灼燒法測(cè)定，游離棉酚含量按照《飼料中游離棉酚的測(cè)定方法》(GB/T 13086—1991)中方法測(cè)定。

粗酶液制備:用分析天平準(zhǔn)確稱量肝胰腺，按組織重量加入9倍體積的預(yù)冷0.9%生理鹽水，制成10%的組織勻漿，4℃、2 500 r/min離心10 min，取上清液待測(cè)。采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。胰蛋白酶活性定義為:在pH 8.0、37℃條件下，每毫克組織蛋白質(zhì)中含有的胰蛋白酶每分鐘使吸光度變化0.003為1個(gè)酶活性單位(U/mg prot)。胃蛋白酶活性定義為:每毫克組織蛋白質(zhì)在37℃條件下每分鐘分解蛋白質(zhì)生成1 μg氨基酸為1個(gè)酶活性單位(U/mg prot)。淀粉酶活性定義為:每毫克組織蛋白質(zhì)在37℃條件下與底物作用30 min，水解10 mg淀粉為1個(gè)酶活性單位(U/mg prot)。脂肪酶活性定義為:在37℃條件下，每克組織蛋白質(zhì)在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活性單位(U/g prot)。纖維素酶活性采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒測(cè)定，試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 20.0中的one-way ANOVA軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，若有顯著差異(P＜0.05)，再用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能的影響

由表 4 可知，CSM8、CSM16、FCSM8、FCSM16、FCSM24組的增重率、特定生長(zhǎng)率、成活率與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)，CSM40組的增重率、特定生長(zhǎng)率、成活率顯著低于其他各組(P＜0.05)，且蛋白質(zhì)效率達(dá)最小值，飼料系數(shù)達(dá)最大值。與對(duì)照組相比，F(xiàn)CSM8組的蛋白質(zhì)效率無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其他各組均顯著降低(P＜0.05)。在相同替代水平下，發(fā)酵棉籽粕組的各項(xiàng)生長(zhǎng)性能指標(biāo)均好于普通棉籽粕組，完全替代魚粉組(FCSM47.5組)的增重率、特定生長(zhǎng)率和成活率均顯著高于CSM40組(P＜0.05)。

以飼料中游離棉酚含量為橫坐標(biāo)，特定生長(zhǎng)率為縱坐標(biāo)，通過(guò)二次曲線回歸分析得出，當(dāng)普通棉籽粕飼料中的游離棉酚含量不超過(guò)62.18 mg/kg時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的特定生長(zhǎng)率不會(huì)明顯降低(圖1)。同時(shí)，當(dāng)發(fā)酵棉籽粕飼料中的游離棉酚含量不超過(guò)44.36 mg/kg時(shí)，中華絨螯蟹幼蟹的特定生長(zhǎng)率不會(huì)明顯降低(圖2)。

2.2 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹體成分的影響

由表 5可知，CSM8、FCSM8、FCSM16和 FCSM24組的全蟹粗蛋白質(zhì)含量與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)，其他組則均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。在普通棉籽粕組中，隨替代水平的升高，全蟹粗蛋白質(zhì)含量顯著下降(P＜0.05)，CSM40組的粗蛋白質(zhì)含量?jī)H為11.40%;在發(fā)酵棉籽粕組中也呈類似的趨勢(shì)，F(xiàn)CSM47.5組的全蟹粗蛋白質(zhì)含量為11.75%，顯著高于CSM40組(P＜0.05)。不同水平的普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹全蟹水分、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

表4 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)性能的影響Table 4 Effects of fish meal replacement by CSM and FCSM on growth performance of juvenile Chinese mitten crab(Eriocheir sinensis)

圖1 中華絨螯蟹幼蟹特定生長(zhǎng)率與普通棉籽粕飼料中游離棉酚含量的關(guān)系Fig.1 Relationship between the content of free gossypol in CSM diets and specific growth rate of juvenile Chinese mitten crab(Eriocheir sinensis)

2.3 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響

由表6可知，F(xiàn)CSM8組的肝胰腺胃蛋白酶活性略低于對(duì)照組，但差異不顯著(P＞0.05)，而其他各組的肝胰腺胃蛋白酶活性均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，且 以 CSM40組 最 低，僅 為8.28 U/mg prot。隨著普通棉籽粕或發(fā)酵棉籽粕替代水平的升高，肝胰腺胃蛋白酶活性呈下降趨勢(shì)，但相同替代水平下，發(fā)酵棉籽粕組的肝胰腺胃蛋白酶活性要高于普通棉籽粕組。肝胰腺胰蛋白酶活性與胃蛋白酶活性的變化趨勢(shì)相似，除對(duì)照組外，以FCSM8組的肝胰腺胰蛋白酶活性最高，為1 099.84 U/mg prot，而 CSM40組的胰蛋白酶活性則最低，為497.47 U/mg prot，顯著低于其他各組(P＜0.05)。

圖2 中華絨螯蟹幼蟹特定生長(zhǎng)率與發(fā)酵棉籽粕飼料中游離棉酚含量的關(guān)系Fig.2 Relationship between the content of free gossypol in FCSM diets and specific growth rate of juvenile Chinese mitten crab(Eriocheir sinensis)

不同水平的發(fā)酵棉籽粕和普通棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺脂肪酶活性的影響差異不顯著(P＞0.05)，且各組脂肪酶活性均較低，平均為40.53 U/g prot。

對(duì)照組的肝胰腺淀粉酶活性最低，為5.96 U/mg prot，顯著低于其他各組(P＜0.05)。在普通棉籽粕組中，肝胰腺淀粉酶活性隨替代水平的升高而逐漸升高，在發(fā)酵棉籽粕組中也呈現(xiàn)出類似的趨勢(shì)。其中，以CSM40組的肝胰腺淀粉酶活性最高，為9.39 U/mg prot。肝胰腺纖維素酶活性的變化趨勢(shì)與淀粉酶活性類似，以對(duì)照組的肝胰腺纖維素酶活性最低，為7.82 μg/mL，顯著低于其他各組(P＜0.05)。在相同替代水平下，普通棉籽粕組的肝胰腺纖維素酶活性要顯著高于發(fā)酵棉籽粕組(P＜0.05)。其中，CSM40組的肝胰腺纖維素酶活性達(dá)最大值30.63 μg/mL。

表5 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹全蟹體成分的影響Table 5 Effects of fish meal replacement by CSM and FCSM on body composition of juvenile Chinese mitten crab(Eriocheir sinensis) %

表6 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響Table 6 Effects of fish meal replacement by CSM and FCSM on digestive enzyme activities in hepatopancreas of juvenile Chinese mitten crab(Eriocheir sinensis)

3 討論

3.1 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)性能和體成分的影響

研究發(fā)現(xiàn)，在以植物蛋白質(zhì)源作為飼料中唯一蛋白質(zhì)源時(shí)，大多數(shù)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)都將受到抑制。但是，當(dāng)植物蛋白質(zhì)源的添加量控制在一定范圍時(shí)，水生動(dòng)物的生長(zhǎng)性能不會(huì)出現(xiàn)較大差異，當(dāng)添加量超過(guò)該范圍時(shí)，其生長(zhǎng)性急劇下降［9］。本試驗(yàn)的結(jié)果也驗(yàn)證了這一點(diǎn)，即隨著普通棉籽粕或發(fā)酵棉籽粕替代魚粉水平的升高，中華絨螯蟹幼蟹的增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率和成活率均呈下降趨勢(shì)。其中，CSM8和CSM16組的增重率、特定生長(zhǎng)率和成活率與對(duì)照組差異不顯著，但是，當(dāng)普通棉籽粕添加量為40%時(shí)(CSM40組)，中華絨螯蟹幼蟹的成活率低于50%，僅為48.33%。這是本試驗(yàn)提前結(jié)束，只進(jìn)行了6周養(yǎng)殖試驗(yàn)的重要原因之一。上述結(jié)果說(shuō)明中華絨螯蟹幼蟹對(duì)棉籽粕中的有害物質(zhì)——游離棉酚具有一定的耐受力，但必須控制添加量。由此得出，本試驗(yàn)中普通棉籽粕的適宜添加量為16%。此外，回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，當(dāng)普通棉籽粕飼料中游離棉酚含量不超過(guò)62.18 mg/kg時(shí)，對(duì)中華絨螯蟹幼蟹的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的抑制作用。另外，有研究者提出，高水平的植物蛋白質(zhì)源替代魚粉除了其中抗?fàn)I養(yǎng)因子的毒性對(duì)水生動(dòng)物生長(zhǎng)產(chǎn)生影響外，還可能由于植物蛋白質(zhì)源中氨基酸組成不能滿足水生動(dòng)物生長(zhǎng)所需的某些必需氨基酸(尤其是賴氨酸和蛋氨酸)而對(duì)生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，所以需在飼料中補(bǔ)充晶體氨基酸［9］。從棉籽粕的氨基酸組成來(lái)看，除精氨酸、苯丙氨酸含量較多外，其他氨基酸的含量均低于魚和蝦、蟹的生長(zhǎng)需要［15］。孫立梅等［9］研究了在高水平棉籽粕飼料中補(bǔ)充蛋氨酸對(duì)中華絨螯蟹幼蟹［(0.39±0.02)g］生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，添加0.42%蛋氨酸的40%棉籽粕飼料組的增重率、特定生長(zhǎng)率和飼料系數(shù)與全魚粉組相比均無(wú)顯著差異，說(shuō)明在高水平棉籽粕飼料中適當(dāng)補(bǔ)充外源蛋氨酸可以明顯改善飼料的適口性，有效提高中華絨螯蟹幼蟹的生長(zhǎng)性能。

目前，關(guān)于中華絨螯蟹飼料蛋白質(zhì)源替代的研究主要集中在采用普通植物蛋白質(zhì)(豆粕、棉籽粕、菜籽粕、花生粕等)替代魚粉［5-10，12-14］，關(guān)于發(fā)酵棉籽粕在中華絨螯蟹飼料中的應(yīng)用還未見報(bào)道。而棉籽粕經(jīng)微生物發(fā)酵或脫酚處理后，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和適口性均明顯得到改善，利用率大大提高，這已經(jīng)在許多水產(chǎn)動(dòng)物中得到了驗(yàn)證［16-22］。孔麗等［16］在研究發(fā)酵棉籽粕對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組(不添加發(fā)酵棉籽粕組)相比，6%發(fā)酵棉籽粕組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著增加。吳秀峰等［17］研究了用脫酚棉籽粉(SECM)替代0、25%和40%的魚粉對(duì)西伯利亞鱘幼魚(57.36 g)生長(zhǎng)性能的影響，結(jié)果顯示，SECM 25C組(替代25%且晶體氨基酸平衡組)的增重率、特定生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)效率顯著高于SECM 25B組(替代25%且血粉氨基酸平衡組);SECM 25C組的飼料系數(shù)與對(duì)照組差異不顯著，其他試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組。薛敏等［18］以0.17 g左右的南美白對(duì)蝦蝦苗為試驗(yàn)對(duì)象，用脫酚棉籽蛋白替代0、20%、35%、50%的魚粉蛋白(對(duì)照組魚粉添加量為36%)，結(jié)果顯示，20%替代組南美白對(duì)蝦的增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料系數(shù)和蛋白質(zhì)效率與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果相似，本試驗(yàn)中FCSM8、FCSM16和FCSM24組的增重率、特定生長(zhǎng)率和成活率與對(duì)照組均無(wú)顯著差異，因此，建議發(fā)酵棉籽粕的適宜添加量為24%?？梢?，由于加工工藝和試驗(yàn)對(duì)象不同，發(fā)酵棉籽粕的適宜添加量差異較大。此外，回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵棉籽粕中游離棉酚含量不超過(guò)44.36 mg/kg時(shí)，對(duì)中華絨螯蟹幼蟹生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的抑制作用。一般認(rèn)為，鮭科魚類飼料中游離棉酚的含量應(yīng)限制在100 mg/kg以下［23］。而凡納濱對(duì)蝦在攝食含1 100 mg/kg游離棉酚飼料時(shí)，其生長(zhǎng)才受到抑制［3］。這與本試驗(yàn)的結(jié)果差異較大，有待進(jìn)一步證實(shí)，但也說(shuō)明不同種類的水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)游離棉酚的敏感程度不同，而中華絨螯蟹幼蟹對(duì)游離棉酚的毒性更敏感。此外，CSM16組與FCSM24組相比，增重率、特定生長(zhǎng)率、蛋白質(zhì)效率、成活率和飼料系數(shù)均無(wú)顯著差異，說(shuō)明添加發(fā)酵棉籽粕可以更多地減少魚粉用量，降低飼料成本。同時(shí)，在相同替代水平下，發(fā)酵棉籽粕的效果要優(yōu)于普通棉籽粕，其原因可能有2方面:一是普通棉籽粕經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵后，游離棉酚等抗?fàn)I養(yǎng)因子明顯減少，使得飼料的適口性得到改善，動(dòng)物的采食量增加;二是微生物脫毒處理的整個(gè)過(guò)程都比較溫和，不會(huì)破壞其原有的營(yíng)養(yǎng)成分，微生物在脫毒的同時(shí)還能夠生成菌體蛋白和維生素，使棉籽餅粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食用價(jià)值均得到提高(表1和表3)。

在體成分方面，陳亮［5］的研究表明，不同水平棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹全蟹水分含量沒(méi)有顯著影響;對(duì)照組全蟹粗灰分含量顯著低于66%棉籽粕添加組，而全蟹粗蛋白質(zhì)含量則高于各棉籽粕添加組，但僅與66%棉籽粕添加組之間存在顯著差異。薛敏等［18］研究認(rèn)為，不同水平脫酚棉籽蛋白替代魚粉蛋白對(duì)南美白對(duì)蝦全蝦粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和水分含量的影響均不顯著。伍代勇等［23］認(rèn)為，不同水平棉籽粕替代魚粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉成分無(wú)顯著影響。Yue等［24］和El-Saidy等［25］研究均表明，不同水平棉籽粕替代魚粉對(duì)尼羅羅非魚肌肉成分無(wú)顯著影響。以上結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果略有不同，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同水平棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹全蟹水分、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著影響，但隨著普通棉籽粕或發(fā)酵棉籽粕替代水平的升高，全蟹粗蛋白質(zhì)含量逐漸減少，且CSM16、CSM24、CSM32、CSM40、FCSM32和 FCSM47.5 組與對(duì)照組相比顯著下降。這可能與試驗(yàn)動(dòng)物種類、替代水平和替代方法等不同有關(guān)。

3.2 普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕替代魚粉對(duì)中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響

研究表明，甲殼動(dòng)物幼體消化酶活性的高低直接反映了其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，并且與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量呈正相關(guān)。肝胰腺是甲殼動(dòng)物主要的消化腺，其消化酶活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)胃和腸道。本試驗(yàn)結(jié)果表明，華絨螯蟹幼蟹肝胰腺蛋白酶活性較高，且胰蛋白酶活性高于胃蛋白酶活性，這與其他學(xué)者對(duì)甲殼動(dòng)物消化酶活性的研究結(jié)果［26-29］一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中普通棉籽粕或發(fā)酵棉籽粕替代水平的升高，胰蛋白酶和胃蛋白酶活性均顯著下降，而且在相同替代水平下，發(fā)酵棉籽粕組高于普通棉籽粕組。棉籽粕對(duì)中華絨螯蟹肝胰腺蛋白酶活性產(chǎn)生影響，其主要原因是現(xiàn)階段棉籽粕的加工普遍采用的是高溫蒸炒壓榨工藝，溫度過(guò)高，破壞了賴氨酸、蛋氨酸及其他必需氨基酸。此外，普通棉籽粕中的游離棉酚會(huì)與賴氨酸的氨基結(jié)合發(fā)生褐變反應(yīng)，從而大大降低賴氨酸的有效成分［30］，機(jī)體不能夠獲得足夠的、平衡的氨基酸，蛋白酶也就不能順利合成和分泌，最終會(huì)影響飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和利用［5］。經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵處理后，發(fā)酵棉籽粕中游離棉酚的含量大大降低，氨基酸組成也趨于合理，使得蛋白酶合成和分泌增加。

中華絨螯蟹屬于雜食性甲殼動(dòng)物，其肝胰腺中脂肪酶活性與動(dòng)物性飼料有關(guān)，而淀粉酶和纖維素酶活性則與植物性飼料有關(guān)。本試驗(yàn)顯示，中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺脂肪酶活性各組間無(wú)顯著差異，并且各組的活性均較低，這與其他學(xué)者關(guān)于甲殼動(dòng)物脂肪酶活性的研究結(jié)果［28-29］一致。碳水化合物是生物體內(nèi)三大能源物質(zhì)之一，目前關(guān)于甲殼動(dòng)物淀粉酶和纖維素酶活性的研究存在較大爭(zhēng)議。Hirche等［31］認(rèn)為，甲殼動(dòng)物幼體相對(duì)較高的淀粉酶活性并不是對(duì)食物中相應(yīng)生化成分的反映，而可能是祖先物種食草性幼體系統(tǒng)發(fā)育的殘余。關(guān)于甲殼動(dòng)物是否能分泌纖維素酶尚無(wú)定論。于書坤等［32］認(rèn)為，在濾食性和雜食性動(dòng)物中纖維素酶完全由腸道內(nèi)微生物產(chǎn)生，而在肉食性甲殼動(dòng)物中纖維素酶是退化的痕跡，毫無(wú)功能。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料中添加普通棉籽粕和發(fā)酵棉籽粕均能夠提高中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺淀粉酶和纖維素酶的活性，而棉籽粕中碳水化合物(28.69%)和粗纖維含量(10.24%)都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于魚粉(分別為8.00%和0.50%)，這說(shuō)明中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺對(duì)淀粉和纖維素的消化能力與食物組成有關(guān)。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，在相同替代水平下，普通棉籽粕組的肝胰腺纖維素酶活性高于發(fā)酵棉籽粕組，這可能是由于本試驗(yàn)中所用的發(fā)酵棉籽粕是由真菌發(fā)酵普通棉籽粕所得，而真菌本身能夠分泌纖維素酶，導(dǎo)致發(fā)酵棉籽粕中的粗纖維含量(4.47%)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于普通棉籽粕(10.24%)。中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺中高活性的淀粉酶和纖維素酶無(wú)論是自身分泌的還是腸道細(xì)菌產(chǎn)生的，只要它攝取了含淀粉和纖維素的食物，這2種酶就能夠起作用。因此，在中華絨螯蟹幼蟹配合飼料中添加含淀粉和纖維素較高的植物蛋白質(zhì)原料是可行的。

4 結(jié)論

①作為中華絨螯蟹幼蟹飼料中魚粉的替代蛋白質(zhì)源時(shí)，普通棉籽粕的適宜添加量為16%，發(fā)酵棉籽粕的適宜添加量為24%。

②在相同替代水平下，發(fā)酵棉籽粕的飼喂效果比普通棉籽粕好。

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