基質(zhì)固相分散—超快速液相色譜測定山楂片中的4種蘇丹紅染料

王重洋等

摘要：采用基質(zhì)固相分散超快速液相色譜法測定了山楂片中的蘇丹紅染料，基質(zhì)固相分散萃取的最佳條件為：0.45 g硅膠分散劑，6 mL乙酸乙酯作為洗脫劑，樣品與分散劑質(zhì)量比為1∶3。乙腈水為流動(dòng)相，流速：0.3 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL，柱溫：30 ℃，梯度洗脫，4種蘇丹紅化合物回收率在86.1%～ 108.3% 之間； RSD在2.3%～9.8%之間。測定蘇丹紅的線性范圍為0.01～2.5 mg/kg（蘇丹紅Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ），0.025～2.5 mg/kg（蘇丹紅Ⅳ），檢出限為4.2～8.9 μg/kg，檢出限優(yōu)于國標(biāo)方法，可滿足實(shí)際樣品分析的要求。

關(guān)鍵詞：基質(zhì)固相分散； 超快速液相色譜； 蘇丹紅； 山楂片

1引言

蘇丹紅是人工合成工業(yè)染料，為親脂性偶氮化合物。1995年歐盟（EU）等國家已禁止其作為色素添加在食品中，國際癌癥研究機(jī)構(gòu)將蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ列為動(dòng)物致癌物，我國衛(wèi)生監(jiān)管部門已禁止蘇丹紅作為食品添加劑使用[1]。蘇丹紅作為禁用的工業(yè)染料，卻被違法添加到山楂片等食品中，即使過期也能保持鮮艷的紅色。

我國國家標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法檢測食品中蘇丹紅染料，方法檢出限為0.010 μg/g[2]。現(xiàn)有測定蘇丹紅的方法有很多，主要包括HPLC[3]、UPLCMS[4，5]、酶聯(lián)免疫[6]以及流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法[7]等。常見的前處理方法主要有微波輔助[8]、固相萃取[9]、基質(zhì)固相分散[10～12]等技術(shù)?；|(zhì)固相分散（Matrix solid phase dispersion， MSPD）由于可以避免樣品處理過程的損失，減少溶劑用量，且可以整合樣品均化、預(yù)處理、過濾、凈化、提取等過程，因此常被用于固體、半固體和高粘性的生物樣品的制備和萃取，在食品分析行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用[13]。食品基質(zhì)較為復(fù)雜，且蘇丹紅在食品中非法添加的含量往往較低，選用MSPD樣品前處理過程消除干擾，可滿足復(fù)雜食品基質(zhì)中痕量蘇丹紅的檢測。

由于MSPD無需萃取溶劑、提取條件溫和，適用于現(xiàn)場處理樣品。本實(shí)驗(yàn)采用了基質(zhì)固相分散超快速液相色譜法（MSPDUFLC）測定山楂片中的蘇丹紅，線性范圍為0.01～2.5 mg/kg，檢出限為4.2～8.9 μg/kg，出峰時(shí)間和檢測靈敏度均優(yōu)于國家標(biāo)準(zhǔn)方法，滿足實(shí)際樣品分析的要求。2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

超快速液相色譜儀（日本島津公司），配備兩個(gè)泵（型號(hào)LC20AD）、自動(dòng)進(jìn)樣器（SIL20A）、柱溫箱 （CTO20A）和紫外檢測器（SPD20A）；色譜柱（XRODS，100 mm × 2 mm， 2.2 μm）。MSPD裝置由10 mL玻璃注射器自制而成。

蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ購于中國藥品生物制品檢定所。使用乙腈配制100 mg/L蘇丹紅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃保存。工作溶液采用乙腈稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。乙腈、甲醇（色譜級(jí)，美國Fisher 公司）；丙酮、乙酸乙酯及正己烷（分析級(jí)，北京化工廠）；硅膠（粒徑150 μm）、硅藻土（粒徑38 μm）以及氧化鋁（粒徑75 μm）購于中國藥品生物制品檢定所，在650 ℃下灼燒4 h，烘干2 h，儲(chǔ)藏于干燥器中。二次蒸餾水由MilliQ水純化系統(tǒng)（美國Millipore公司）制得。山楂片購于當(dāng)?shù)爻小?/p>

2.2MSPD過程

將市售山楂片在60 ℃下干燥24 h，然后使用電動(dòng)粉碎機(jī)將其粉碎，過孔徑250 μm的篩子，得到均勻的山楂片粉末。將樣品粉末保存于4 ℃冰箱中，待用。

稱取0.15 g山楂片樣品，加入0.45 g硅膠分散劑，研磨均勻。在10 mL玻璃注射器底部放一層脫脂棉，將混合物轉(zhuǎn)移到注射器中，樣品上方再放置一層脫脂棉，壓實(shí)。以6 mL乙酸乙酯為洗脫劑，重力洗脫目標(biāo)分析物。收集洗脫液，40 ℃下氮?dú)獯蹈?，加?00 μL乙腈，過0.22 μm濾膜， 待測。

2.3色譜條件

3.2樣品與分散劑質(zhì)量比的影響

樣品與分散劑的質(zhì)量比對(duì)提取效果有一定的影響。本實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確稱取0.15 g山楂片樣品，分別考察0.15、0.30、0.45 和0.60 g硅膠對(duì)提取效果的影響，采用6 mL乙酸乙酯洗脫，進(jìn)行基質(zhì)固相提取，每個(gè)樣品平行制備3組。結(jié)果表明，山楂片樣品與硅膠的質(zhì)量比為1∶3時(shí)，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的回收效果最好，這是因?yàn)樵诙哔|(zhì)量比為1∶1～1∶3時(shí)，隨著分散劑用量的增加，基質(zhì)更好地被分散，所以回收率有所提高；二者質(zhì)量比為1∶ 4時(shí)，殘留在分散劑中的洗脫液隨之增加，使得回收率反而下降，因此樣品與分散劑最佳質(zhì)量比為1∶3（表 2）。

3.3洗脫劑及其用量的影響

洗脫劑的選擇對(duì)目標(biāo)物的提取有重要影響。本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯及正己烷5種洗脫劑對(duì)4種蘇丹紅的洗脫能力。準(zhǔn)確稱取0.15 g山楂片樣品，硅膠用量為0.45 g，洗脫劑用量為6 mL， 進(jìn)行基質(zhì)固相提取，每個(gè)樣品平行制備3組。結(jié)果表明，甲醇、正己烷的洗脫能力很弱；乙腈為洗脫劑的回收率明顯高于丙酮，但提取不充分，不適于作為洗脫劑；而乙酸乙酯作為洗脫劑時(shí)，由于其極性與蘇丹紅化合物的極性最為相當(dāng)，洗脫效果明顯優(yōu)于其它洗脫劑。本實(shí)驗(yàn)選擇乙酸乙酯作洗脫劑（表 3）。

3.5檢出限、定量限和精密度

3.6實(shí)際樣品檢測

References

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