王賢英

(重慶市中藥研究院，重慶 400065)

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王賢英，副主任中藥師，從事藥品質(zhì)量檢驗(yàn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究；Tel：(023)89029097，E-mail：wangxianying_315@163.com

八珍袋泡茶中阿魏酸的含量測(cè)定

王賢英

(重慶市中藥研究院，重慶 400065)

目的建立HPLC測(cè)定八珍袋泡茶中阿魏酸的含量。方法采用C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為313 nm。結(jié)果阿魏酸進(jìn)樣量在0.41 ～2.46 μg線性關(guān)系良好(r=0.999 8)，平均回收率為99.02%，RSD為0.39%(n=9)。結(jié)論此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于八珍袋泡茶中阿魏酸的含量測(cè)定。

八珍袋泡茶；HPLC；阿魏酸

八珍袋泡茶是由黨參、白芍、白術(shù)等8味中藥組成的復(fù)方制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第五冊(cè)，具有補(bǔ)氣益血的功效，可用于治療氣血兩虛、面色萎黃、食欲不振、四肢乏力、月經(jīng)過(guò)多等癥狀。方中當(dāng)歸具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)腸通便的功能，為臨床常用藥。當(dāng)歸含有丁二酸、豆甾醇、異菖蒲烯、菖蒲、二烯谷甾醇、豆甾醇-D-葡萄糖苷、尿嘧啶蒿本內(nèi)酯、正丁烯酰內(nèi)酯、阿魏酸、煙酸等成分，其中阿魏酸為主要有效成分之一?，F(xiàn)代藥理研究顯示，阿魏酸具有抑制血小板聚集，抗血栓，抗心肌缺血、缺糖、缺氧等藥理作用。原標(biāo)準(zhǔn)中僅收有顯微特征鑒別項(xiàng)，無(wú)含量測(cè)定控制項(xiàng)。為更好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，筆者參考文獻(xiàn)[1]，采用HPLC測(cè)定方中當(dāng)歸所含的有效成分——阿魏酸的含量，為八珍袋泡茶的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010A高效液相色譜儀；島津AEG-45SM十萬(wàn)分之一電子分析天平(日本)；AB265-S分析天平(梅特勒)；SK250LH超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；D101大孔樹脂(天津市海光化工有限公司)。

1.2 試藥

阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110773-201313)；八珍袋泡茶(重慶市中藥研究院制藥廠，批號(hào)：120901，121002，121103，規(guī)格：2.4 g/袋)。乙腈為色譜純，甲醇、乙醇、磷酸為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為迪馬Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)，流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)為313 nm，進(jìn)樣量10 μL，柱溫為30 ℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取阿魏酸對(duì)照品10.25 mg，置50 mL容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.205 mg·mL-1的阿魏酸儲(chǔ)備液；精密量取3 mL，置50 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得12.3 μg·mL-1的阿魏酸對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取裝量差異項(xiàng)下的八珍袋泡茶，研細(xì)，混勻，取1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(250 W，50 kHz)30 min，取出，放冷，稱重，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 依照處方取除當(dāng)歸以外的中藥，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液制備法制成陰性對(duì)照液。

2.3 線性范圍考察

分別精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備溶液(0.205 mg·mL-1)0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，置于10 mL量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液10 μL，注入液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=2 758 530.8X+14 322.8(r=0.999 9)，阿魏酸進(jìn)樣量在0.41～2.46 μg與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4 專屬性試驗(yàn)

分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液10 μL，進(jìn)樣，結(jié)果供試液中阿魏酸色譜峰達(dá)到基線分離，陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

A.阿魏酸對(duì)照品 B.樣品 C.陰性樣品圖1 八珍袋泡茶及對(duì)照品HPLC圖

2.5 精密度試驗(yàn)

分別吸取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，其RSD=0.70%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，制備9份供試品溶液，分別測(cè)定阿魏酸的含量，其RSD=1.35%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于放置0，2，4，8，12 h進(jìn)樣10 μL，測(cè)定阿魏酸的峰面積，其RSD=1.10%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

分別取0.7，0.5，0.3 g已測(cè)定含量的八珍袋泡茶(88.5 μg·g-1)樣品各3份，精密稱定，分別精密加入高、中、低濃度阿魏酸對(duì)照品溶液(12.3 μg·mL-1)5.0，3.5，2.0 mL各3份，按2.2項(xiàng)下制備，并按2.1項(xiàng)下測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 八珍袋泡茶中阿魏酸回收率試驗(yàn)

2.9 樣品測(cè)定

按2.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法和2.1項(xiàng)測(cè)定方法，分別對(duì)120901，121002，121103 3批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果阿魏酸的含量分別為88.5，91.2，90.4 μg·g-1。

3 討論

3.1 提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了水、70%甲醇、甲醇進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明用70%甲醇溶液作為提取溶媒，測(cè)得的圖譜分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇70%甲醇進(jìn)行超聲提取。

3.2 提取時(shí)間的選擇

選擇了超聲處理15 min、30 min、1 h，結(jié)果超聲處理30 min和1 h含量無(wú)明顯差異，故選定超聲處理30 min。

3.3 波長(zhǎng)的選擇

經(jīng)采用DAD對(duì)阿魏酸對(duì)照品色譜峰和供試品溶液中阿魏酸色譜峰在200～400 nm進(jìn)行掃描，結(jié)果兩者光譜圖一致，均在313 nm有最大吸收。

3.4 流動(dòng)相的考察

選擇了流動(dòng)相甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.75)[2]、乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)[3]、甲醇-水-冰醋酸(28∶71∶1)[4]、甲醇-0.1%磷酸溶液(梯度洗脫)[5]、乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)[6]、甲醇-0.7%冰醋酸溶液(30∶70)[7]和乙腈-水(17∶83)進(jìn)行試驗(yàn)，最后選定了正文中的流動(dòng)相，能使樣品的阿魏酸色譜峰達(dá)到很好的基線分離。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：124.

[2] 李震宇，楊愛(ài)淑.八珍益母膠囊中阿魏酸含量測(cè)定[J].中國(guó)科技縱橫，2012，(3)：253.

[3] 李震宇.八珍丸中阿魏酸含量測(cè)定[J].中國(guó)新技術(shù)新產(chǎn)品，2012，(5)：7.

[4] 周建軍，曹亮，耿直，等.歸脾丸中阿魏酸含量測(cè)定的方法優(yōu)化[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(4)：1010-1012.

[5] 周永其，胡道德，劉亮，等.靈杞黃斑顆粒中阿魏酸含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31(2)：224-226.

[6] 孫立恩.產(chǎn)婦安合劑中阿魏酸含量測(cè)定[J].海峽藥學(xué)，2010，22(10)：74-75.

[7] 張小謙，劉翼華.明目十六味丸中阿魏酸含量測(cè)定的方法學(xué)考察[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2011，9(35)：316-318.

DeterminationofFerulicacidinBazhenDaipaochabyHPLC

WANGXianying

(ChongqingInstituteofChineseMateriaMedica，Chongqing400065，China)

Objective：To develop an HPLC method for determination of Ferulic acid in Bazhen Daipaocha.MethodsThe column was Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，acetonitrile-phosphoric acid (17∶83) as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL·min-1and the detecting wavelength was set at 313 nm.ResultsThere was a good linear relationship for Ferulic acid within the range of 0.41～2.46 μg.The average recovery rate was 99.02% and RSD was 0.39% (n=9).ConclusionThe method is simple，quick and can be used to determin the Ferulic acid of Bazhen Daipaocha.

Bazhen Daipaocha；HPLC；Ferulic acid

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.02.014

2013-11-05)