熱敏灸“大椎”穴對(duì)哮喘大鼠行為學(xué)及病理學(xué)的影響*

★ 張偉 熊俊 張琳

(江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 江西南昌330006)

支氣管哮喘(bronchial asthma，簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘)是由多種細(xì)胞(如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞等)和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾?。?］。目前，全球哮喘患者約3億人，中國(guó)哮喘患者約3 000萬(wàn)。哮喘是影響人們身心健康的重要疾病。氣道炎癥幾乎是所有類(lèi)型哮喘的共同特征，也是臨床癥狀和氣道高反應(yīng)性的基礎(chǔ)，氣道炎癥存在于哮喘的所有時(shí)段。目前西醫(yī)用藥主要以激素、β2-受體激動(dòng)劑、白三烯受體拮抗劑、茶堿、抗膽堿藥物、抗IgE治療，但需要規(guī)范化長(zhǎng)期治療，只能控制不能根治，且給患者造成較大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。熱敏灸療法［2-7］是一種新型的中醫(yī)灸療方法，它以腧穴的熱敏化為技術(shù)核心，施以人體需要的飽和灸量，最大限度調(diào)動(dòng)人體的自我調(diào)控能力，從而提高人體自我修復(fù)能力，以達(dá)到治療疾病的目的。熱敏灸療法用時(shí)短，直接提高人體正氣，療效顯著且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，值得臨床推廣?，F(xiàn)就熱敏灸改善哮喘大鼠的行為學(xué)、病理學(xué)情況作以下詳細(xì)研究。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組 SD雄性大鼠40只，體重220～250g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào):SCXK(湘)2009-0004，動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性馴養(yǎng)1周，飼養(yǎng)環(huán)境為江西中醫(yī)學(xué)院熱敏灸重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，室溫25℃，空氣濕度為50%，通風(fēng)條件良好。按隨機(jī)數(shù)字表法，空白組、模型組每組各10只、治療組20只，根據(jù)“大椎”穴是否被熱敏化自動(dòng)分為普通懸灸組(未熱敏化)和熱敏灸組(熱敏化)。

1.2 主要試劑和儀器 TSI-21型熱掃描成像系統(tǒng)(北京貝億醫(yī)療器械有限公司)，卵清蛋白(生產(chǎn)商:Sigma公司，北京索萊寶科技有限公司分裝)、氫氧化鋁干粉500g/瓶(廣州化學(xué)試劑廠)、滅菌注射用水(運(yùn)城市天源制藥有限公司)、超聲霧化器(型號(hào):402AI，上海魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)，0.5% ～1%的伊紅酒精溶液、蘇木素染液、1%鹽酸酒精分化液、奧林巴斯OLYMPUS BX41研究顯微鏡、秒表、艾條(0.4cm×10cm，江西省中醫(yī)院生產(chǎn))。

1.3 造模方法 大鼠于第1、8天腹腔注射致敏混懸劑(含卵蛋白100mg、氫氧化鋁干粉100 mg、滅活百日咳桿菌5×109個(gè))1mL，第15天開(kāi)始用1%卵白蛋白生理鹽水霧化吸入激發(fā)哮喘，每天1次，每次20min，共1周。正常對(duì)照組用滅菌注射用水代替卵清白蛋白液進(jìn)行注射和霧化吸入。

1.4 造模成功標(biāo)準(zhǔn) 以大鼠出現(xiàn)煩躁、嗆咳、打噴嚏，呼吸頻率加快、幅度加大、腹式呼吸明顯和點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)重者呼吸減慢或節(jié)律不整，四肢癱軟，行動(dòng)遲滯或俯伏不動(dòng)，反應(yīng)遲鈍等癥狀為激發(fā)成功。

1.5 穴位熱敏化標(biāo)準(zhǔn) 用固定夾將大鼠固定后，選取大鼠大椎穴，定位取穴按照國(guó)家十一五規(guī)劃教材李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，以及胡元亮編《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸手冊(cè)》，取第7頸椎與第1胸椎之間背部正中。用艾條懸于大椎穴上約2mm處先回旋灸2 min預(yù)熱局部皮膚，再固定于大椎穴施行溫和灸。艾灸“大椎”穴10min后，對(duì)大鼠進(jìn)行紅外熱像檢測(cè)，紅外熱成像產(chǎn)生沿脊柱縱向擴(kuò)散或橫向擴(kuò)散的紅外輻射增強(qiáng)區(qū)域(溫度升高0.5℃以上)長(zhǎng)徑≥3cm被視為腧穴的熱敏化陽(yáng)性。

1.6 治療方法 造模成功后，開(kāi)始介入艾灸治療。每日于早9∶00開(kāi)始，普通懸灸組與熱敏灸組各灸20min，每日1次，共治療7天。

1.7 樣本采集及檢測(cè) 治療結(jié)束后，模型組、普通懸灸組、熱敏灸組做最后一次霧化激發(fā)實(shí)驗(yàn)，之后將所有大鼠乙醚麻醉后于股動(dòng)脈取血并處死。取大鼠右肺中葉，10%緩沖福爾馬林固定液固定，再進(jìn)行脫水、透明、石蠟包埋、切片和HE染色，最后在光鏡下觀察結(jié)果。

1.8 統(tǒng)計(jì)方法 用SPSS 13.0軟件包處理，所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，進(jìn)行多個(gè)樣本均數(shù)的方差分析以及均數(shù)間兩兩比較(SNK-q檢驗(yàn))，如果出現(xiàn)方差不齊，經(jīng)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后使方差齊，再進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 哮喘大鼠行為學(xué)觀察 (1)最后一次激發(fā)實(shí)驗(yàn)各組大鼠行為變化。模型組在激發(fā)后出現(xiàn)明顯鼻部瘙癢抓鼻，進(jìn)而呼吸加深、加快，跌倒，少動(dòng)，點(diǎn)頭呼吸，呈哮喘樣表現(xiàn);熱敏化組、普通懸灸組癥狀明顯減輕，且熱敏化組優(yōu)于普通懸灸組。

(2)大鼠20min引喘潛伏期、發(fā)作總持續(xù)時(shí)間比較。見(jiàn)表1。

表1 大鼠20min引喘潛伏期、發(fā)作總持續(xù)時(shí)間比較

說(shuō)明:■P ＜0.01，說(shuō)明造模成功;▲P ＜0.01，說(shuō)明熱敏灸與普通懸灸對(duì)于減輕哮喘大鼠的發(fā)作，改善哮喘大鼠的行為學(xué)指標(biāo)皆有非常顯著的療效;●P＜0.01，說(shuō)明熱敏化組對(duì)于改善哮喘大鼠的行為學(xué)指標(biāo)明顯優(yōu)于普通懸灸組。

(3)大鼠20min發(fā)作次數(shù)、打噴嚏次數(shù)、鼻癢抓鼻次數(shù)比較。見(jiàn)表2。說(shuō)明:■P ＜0.01，說(shuō)明造模成功;▲P ＜0.01，說(shuō)明普通懸灸組及熱敏化組對(duì)于減輕哮喘大鼠的發(fā)作，改善哮喘大鼠的行為學(xué)指標(biāo)皆有非常顯著的療效;●P＜0.01，說(shuō)明熱敏化組對(duì)于改善哮喘大鼠的行為學(xué)指標(biāo)明顯優(yōu)于普通懸灸組。

表2 大鼠20min發(fā)作次數(shù)、打噴嚏次數(shù)、鼻癢抓鼻次數(shù)比較

2.2 病理組織學(xué)觀察 (1)正常肺組織切片。正常對(duì)照組肺組織顯示細(xì)支氣管管壁光滑，支氣管平滑肌細(xì)胞未見(jiàn)增生，支氣管粘膜皺壁無(wú)增生，管腔通暢，管內(nèi)無(wú)炎性滲出物，小動(dòng)脈管壁厚薄均勻，肺泡壁厚薄均勻一致，肺泡大小均勻一致，肺泡無(wú)溶合(見(jiàn)圖1、2)。

圖1 、2 為正常肺組織切片

(2)模型組肺組織切片。病理組織學(xué)改變:氣管管壁周?chē)写罅垦仔约?xì)胞浸潤(rùn);支氣管粘膜皺裳增多延長(zhǎng)，杯狀細(xì)胞增生明顯，平滑肌增厚，管腔縮窄，內(nèi)有粘液栓;伴行小動(dòng)脈管壁增厚縮窄，管腔閉塞;部分肺泡壁變薄或斷裂，融合成肺氣腫(見(jiàn)圖3、4)。

圖3 、4 為模型組肺組織切片

(3)普通懸灸組肺組織切片。病理組織學(xué)改變:氣管管壁周?chē)休^多炎性細(xì)胞浸潤(rùn);支氣管粘膜皺裳有增多延長(zhǎng)，杯狀細(xì)胞有增生，平滑肌中度增厚，管腔中度縮窄，內(nèi)有少量粘液栓;伴行小動(dòng)脈管壁中度增厚縮窄，管腔狹窄;少量肺泡壁變薄或斷裂，融合成肺氣腫(見(jiàn)圖5、6)。

圖5 、6 為普通懸灸組肺組織切片

(4)熱敏灸組肺組織切片。病理組織學(xué)改變:氣管管壁周?chē)猩倭垦仔约?xì)胞浸潤(rùn);支氣管粘膜皺裳少許增多延長(zhǎng)，杯狀細(xì)胞少量增生，平滑肌輕度增厚，管腔稍有縮窄，內(nèi)有少量粘液栓;伴行小動(dòng)脈管壁輕度增厚縮窄，管腔稍狹窄;少量肺泡壁變薄或斷裂，融合成肺氣腫(見(jiàn)圖7、8)。

圖7 、8 為熱敏灸組肺組織切片

綜上所述，普通懸灸組、熱敏灸組與模型組比較，說(shuō)明艾灸可改善肺組織的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)，減輕肺組織的炎癥反應(yīng)和氣道高反應(yīng)性，對(duì)哮喘有明顯的改善作用;而熱敏灸組與普通懸灸組比較，肺組織形態(tài)學(xué)方面亦有非常明顯的改善，說(shuō)明熱敏灸“大椎穴”可明顯改善哮喘大鼠的炎癥反應(yīng)和氣道高反應(yīng)性，減輕哮喘發(fā)作。

3 討論

哮喘是臨床常見(jiàn)病多發(fā)病，目前，西醫(yī)學(xué)有關(guān)支氣管哮喘的基礎(chǔ)研究已進(jìn)入細(xì)胞和分子研究水平，但在治療方面只能控制病情，所以在遠(yuǎn)期療效和預(yù)后的評(píng)價(jià)上仍不令人十分滿意。艾灸是使用灸火給人體以溫?zé)嵝源碳?，通過(guò)經(jīng)絡(luò)腧穴的作用，以達(dá)到防治疾病目的的一種方法［8］，能溫經(jīng)散寒、活血通絡(luò)、扶陽(yáng)固脫?！夺t(yī)學(xué)入門(mén)·針灸》載:“藥之不及，針之不到，必須灸之。”是中醫(yī)學(xué)治療哮喘的常用手段。熱敏灸療法是利用某些穴位喜熱、嗜熱的特性，溫和灸產(chǎn)生一個(gè)“小刺激大反應(yīng)”，通過(guò)穴位的六種熱敏化形式產(chǎn)生經(jīng)氣感傳并達(dá)到飽和灸量，從而使治療效果達(dá)到最大化的治療手段。

大量研究說(shuō)明艾灸能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，并對(duì)改善肺通氣功能有顯著效果，尤其適用于變態(tài)反應(yīng)性疾病和氣道反應(yīng)性疾病，能有效控制哮喘發(fā)作。本人以前的研究［9，10］亦發(fā)現(xiàn)艾灸哮喘大鼠“大椎穴”可降低血清中IL-4、IgE含量，提高IFN-γ含量，從而提高TH1/TH2，減輕氣道炎癥及高阻性。本研究熱敏灸組與非熱敏灸組對(duì)哮喘大鼠行為學(xué)、病理學(xué)均有顯著改善，說(shuō)明艾灸對(duì)改善哮喘大鼠的行為學(xué)、病理學(xué)有較好療效;而熱敏灸組與非熱敏灸組比較，熱敏灸組對(duì)哮喘大鼠行為學(xué)、病理學(xué)方面較非熱敏灸組有非常顯著性改善，說(shuō)明熱敏灸通過(guò)穴位的熱敏化治療提高療效。

“灸之要，氣至而有效”，此研究說(shuō)明艾灸同樣需要重視穴位的狀態(tài)，而熱敏化腧穴正是處于敏化狀態(tài)的喜熱、嗜熱穴位，艾灸熱敏化腧穴可發(fā)動(dòng)經(jīng)氣感傳甚至氣至病所，可大大提高療效，值得臨床推廣應(yīng)用。

［1］葉任高.內(nèi)科學(xué)［M］.第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:64.

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［5］陳日新，陳明人，康明非，等.重視熱敏灸感是提高灸療療效的關(guān)鍵［J］.針刺研究，2010，35(4):311-314.

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