摘要：利用PCR-RFLP技術(shù)，檢測(cè)101頭長(zhǎng)白豬NCOA-1基因多態(tài)性，并分析其與繁殖性狀的關(guān)系。結(jié)果表明，NCOA-1基因AA、AB、BB基因型頻率分別為0.500、0.335、0.165；NCOA-1基因中BB型在窩產(chǎn)仔數(shù)和窩產(chǎn)仔活數(shù)、初生窩重和斷奶窩重與AA型、AB型有顯著性差異（P<0.05）。

關(guān)鍵詞：長(zhǎng)白豬；NCOA-1；繁殖；性能

中圖分類(lèi)號(hào)： S828.3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）09-0175-03

收稿日期：2013-11-20

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：30901014，31060295）。

作者簡(jiǎn)介：魯慧文（1987—），男，黑龍江綏化人，碩士，研究方向?yàn)檗r(nóng)業(yè)推廣（養(yǎng)殖）。E-mail：lhw0417@126.com。

通信作者：黃濤，副教授，從事豬分子遺傳育種研究。E-mail：taohuang100@sina.com。豬的繁殖性能是一類(lèi)重要的經(jīng)濟(jì)性狀，其好壞直接影響豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。繁殖性能屬于限性表達(dá)的低遺傳力性狀，運(yùn)用常規(guī)的育種方法對(duì)該類(lèi)性狀進(jìn)行改良進(jìn)展緩慢，從分子水平上尋找控制豬產(chǎn)仔數(shù)的主基因并應(yīng)用到育種實(shí)踐中成為可能。核受體/類(lèi)固醇輔激活因子1（NCOA-1/SRC-1）是p160類(lèi)固醇受體輔激活因子（SRC）家族中的一員，有研究表明，SRC家族在發(fā)育、體生長(zhǎng)、類(lèi)固醇激素應(yīng)答、新陳代謝、繁殖、心血管系統(tǒng)和炎性反應(yīng)中有獨(dú)特的生物學(xué)功能[1-2]。NCOA-1作為轉(zhuǎn)錄輔助激活因子，是第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)的類(lèi)固醇受體[3]，核受體輔助活化因子1（NCOA-1）是細(xì)胞核激素受體的輔助激活劑，這些受體有雌性激素、孕酮受體和某些其他轉(zhuǎn)錄因子如Ets-2和PEA3[4]。NCOA-1敲除的小鼠展現(xiàn)正常的發(fā)育能力和體軀生長(zhǎng)，但顯示部分激素抑制類(lèi)固醇和甲狀腺激素、延遲浦肯野細(xì)胞的發(fā)育、降低雌激素依賴(lài)的血管保護(hù)、出現(xiàn)多種代謝異常[5-9]。另有研究發(fā)現(xiàn)，NCOA-1表達(dá)異常是引起乳腺癌的誘因[4，10]。

NCOA-1是豬繁殖性狀候選基因，研究表明，其多態(tài)性與豬的產(chǎn)仔數(shù)可能有關(guān)聯(lián)，定位于豬3號(hào)染色體上，豬的NCOA-1基因總共有97 681 bp，含有19個(gè)外顯子，其cDNA長(zhǎng)度為4 451 bp。核受體輔激活蛋白通過(guò)與結(jié)合到DNA上的核受體相互作用并增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性[11]，受到影響的雄激素受體、雌激素受體等在動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖等生理過(guò)程起到重要作用[12]。NCOA-1蛋白不僅增強(qiáng)了雌激素受體的活性，而且反過(guò)來(lái)刺激特定的雌激素反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)隨后的生理反應(yīng)[13]。國(guó)外學(xué)者已經(jīng)對(duì)NCOA-1基因與豬多產(chǎn)性的相關(guān)性進(jìn)行研究，將其定位于SSC3，稱(chēng)其是繁殖性狀的“開(kāi)關(guān)”[14]。NCOA-1基因在對(duì)不同品種或不同地區(qū)母豬群體研究得到的結(jié)果不盡相同，本研究擬分析NCOA-1基因?qū)π陆貐^(qū)長(zhǎng)白豬繁殖力性狀的遺傳效應(yīng)，為該候選基因的選種應(yīng)用積累數(shù)據(jù)，以期為分子標(biāo)記輔助選擇育種提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)豬均來(lái)自新疆農(nóng)八師142團(tuán)豬場(chǎng)，用隨機(jī)抽樣法選擇有完整繁殖性狀記錄的長(zhǎng)白母豬101頭進(jìn)行活體采樣，同時(shí)收集試驗(yàn)?zāi)肛i的窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)、胎次、初生窩重和斷奶窩重等資料。

1.2主要儀器和試劑

主要儀器：RT-PCR儀、DYY-4穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式恒溫振蕩器、電泳凝膠成像系統(tǒng)、微波爐、臺(tái)式高速離心機(jī)；主要試劑：Taq DNA聚合酶、蛋白酶K及DNA限制性?xún)?nèi)切酶RsaⅠ，均購(gòu)自TaKaRa。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1基因組DNA的提取采用酚-氯仿常規(guī)提取法提取基因組DNA。

1.3.2引物的設(shè)計(jì)與合成根據(jù)豬NCOA-1基因序列設(shè)計(jì)引物，由上海生工生物有限公司合成。引物序列為：F-5′-AGGGGCTACCCTCCTGTAAG-3′；R-5′-CTTCTCTGCCAGTTCTCCAGTC-3′。

1.3.3PCR擴(kuò)增PCR反應(yīng)總體系為25 μL，包括：10×buffer 2.5 μL，dNTP 2 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.5 μL，50 ng/μL模板DNA 0.8 μL，Taq酶0.3 uL，MgCl2 3 μL，ddH2O 15.4 μL。反應(yīng)條件為：94 ℃變性4 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s 35次循環(huán)；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。

1.3.4NCOA-1基因擴(kuò)增產(chǎn)物的酶切8.5 μL PCR產(chǎn)物加入0.5 μL RsaⅠ及1 μL buffer，37 ℃水浴3 h，酶切產(chǎn)物用15%的瓊脂糖電泳檢測(cè)分型。

1.3.5數(shù)據(jù)處理采用Excel和SPSS軟件分析數(shù)據(jù)，并參考徐迎寧等的處理模型[15]?；蛐蛿?shù)據(jù)：NCOA-1、AA、AB、BB；繁殖性狀：窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)、初生窩重、斷奶窩重；模型（基因的獨(dú)立效應(yīng)模型）：yi=μ+αi+ei，其中，yi為性狀值，μ為總體平均數(shù)，αi為基因型效應(yīng)值（i=AA、AB、BB），ei為隨機(jī)誤差。

2結(jié)果與分析

2.1NCOA-1基因擴(kuò)增結(jié)果

NCOA-1基因PCR擴(kuò)增后經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè)到1條長(zhǎng)約408 bp的清晰條帶（圖1）。

2.2PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切結(jié)果

由圖2可見(jiàn)，各基因型條帶清晰。

2.3NCOA-1基因的基因頻率和基因型頻率

根據(jù)檢測(cè)樣品的基因型及檢出總數(shù)，計(jì)算NCOA-1各基因型在長(zhǎng)白豬群體中的頻率和等位基因頻率。由表1可知，NCOA-1基因的基因型頻率是AA>AB>BB，優(yōu)勢(shì)基因型頻率為AA，達(dá)到0.500；基因頻率A>B。表1NCOA-1基因的基因頻率和基因型頻率endprint

品種樣本數(shù)

（頭）基因型分布（頭）基因型頻率基因頻率AAABBBAAABBBAB長(zhǎng)白1015034170.500 00.335 00.165 00.667 50.332 5

2.4NCOA-1基因?qū)ωi基因效應(yīng)的影響

由表2可見(jiàn)，在初產(chǎn)母豬中，NCOA-1各基因型之間窩產(chǎn)仔數(shù)差異顯著（P<0.05），各基因型之間窩產(chǎn)活仔數(shù)差異顯著（P<0.05），其中，AB基因型母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)最多；在經(jīng)產(chǎn)母豬中，NCOA-1各基因型之間窩產(chǎn)仔數(shù)差異顯著（P<0.05），各基因型之間窩產(chǎn)活仔數(shù)差異顯著（P<005），其中，AA基因型母豬的窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)最多；在所有胎次中，NCOA-1各基因型之間窩產(chǎn)仔數(shù)和窩產(chǎn)活仔數(shù)差異均達(dá)到顯著水平（P<0.05）；AA基因型的窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)為最多。

由表3可見(jiàn)，初產(chǎn)母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和所有胎次中，NCOA-1基因各基因型之間初生窩重和斷奶窩重的差異均顯著（P<0.05）；AA型母豬比AB、BB型母豬所產(chǎn)的初生窩重、斷奶窩重都高。

3小結(jié)與討論

通過(guò)NCOA-1分別對(duì)長(zhǎng)白豬繁殖性狀的統(tǒng)計(jì)分析，表明NCOA-1基因?qū)﹂L(zhǎng)白豬窩產(chǎn)仔數(shù)、窩產(chǎn)活仔數(shù)、初生窩重、 斷奶窩重等繁殖性狀，無(wú)論在初產(chǎn)、經(jīng)產(chǎn)還是所有胎次中都有顯著影響。

核受體輔激活蛋白1（NCOA-1）基因的產(chǎn)物核受體輔激活蛋白與結(jié)合在DNA上的雌激素受體相互作用并加強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。施啟順等研究表明，NCOA-1基因RsaⅠ酶切多態(tài)性對(duì)母豬產(chǎn)仔性狀有顯著影響，在窩產(chǎn)仔數(shù)和窩產(chǎn)活仔數(shù)上都出現(xiàn)AA>AB>BB趨勢(shì)，基因型間差異極顯著（P<0.01）[16]，本研究結(jié)果和施啟順等報(bào)道基本一致。NCOA-1基因大部分AA和BB、AB和BB差異顯著，如該基因TNB加性效應(yīng)為0.33，NBA加性效應(yīng)為1.38，與Melville等報(bào)道結(jié)果[17]基本一致。總之，試驗(yàn)結(jié)果表明，NCOA-1中AA為優(yōu)勢(shì)基因，這可以為今后的生產(chǎn)研究提供良好的選擇方向。

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