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      不同發(fā)酵溫度對(duì)開(kāi)菲爾產(chǎn)氨基酸及理化性質(zhì)的影響

      2014-11-15 13:28:06王豪
      江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年9期
      關(guān)鍵詞:活菌數(shù)乳酸氨基酸

      摘要:開(kāi)菲爾中除含有多種益生菌外,在發(fā)酵過(guò)程中還可代謝產(chǎn)生多種功能性物質(zhì)。試驗(yàn)研究了開(kāi)菲爾在不同發(fā)酵溫度下游離氨基酸變化、活性益生菌增殖及對(duì)乳酸合成水平的影響,結(jié)果表明,30 ℃發(fā)酵至終點(diǎn),pH值為4.60,開(kāi)菲爾中游離氨基酸水平高達(dá)576.2 mg/kg,活菌數(shù)達(dá)1.6×1011 CFU/g,乳酸合成量為8.0 g/L,表現(xiàn)出極好的功能性成分產(chǎn)生水平、菌體細(xì)胞生長(zhǎng)活性和酸化能力。

      關(guān)鍵詞:開(kāi)菲爾;氨基酸;發(fā)酵溫度;活菌數(shù);乳酸

      中圖分類(lèi)號(hào): TS252.42文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2014)09-0236-03

      收稿日期:2013-11-21

      基金項(xiàng)目:“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃(編號(hào):2012BAD28B07、2013BAD18B01)。

      作者簡(jiǎn)介:王豪(1984—),男,上海人,碩士,工程師,主要從事乳品生物技術(shù)研究。E-mail:wanghao840818@126.com。發(fā)酵乳是通過(guò)乳酸菌等菌種,代謝利用乳中乳糖和蛋白質(zhì)等成分,產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì),賦予機(jī)體極好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及益生特效的一種產(chǎn)品[1]。乳酸菌是一類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)選擇較為挑剔的微生物,在多數(shù)情況下此類(lèi)菌群的生物合成能力有限,需要外源的氨基酸或肽來(lái)支持其生長(zhǎng)代謝。由于生乳中缺乏此類(lèi)小分子物質(zhì),因此,乳酸菌的生長(zhǎng)取決于對(duì)酪蛋白的水解能力[2]。酪蛋白是氨基酸的主要來(lái)源,其水解與乳酸菌所分泌的蛋白酶密切相關(guān),細(xì)胞膜上的蛋白酶是唯一能夠催化酪蛋白降解為低聚肽的關(guān)鍵酶,然后,低聚肽才能被轉(zhuǎn)入膜內(nèi),再經(jīng)由內(nèi)肽酶及氨肽酶等進(jìn)一步降解。發(fā)酵乳中由乳酸菌代謝釋放積累的氨基酸會(huì)顯著影響發(fā)酵乳制品的營(yíng)養(yǎng)功能,而游離氨基酸的種類(lèi)及產(chǎn)生水平取決于乳的品類(lèi)、乳酸菌的組成、發(fā)酵參數(shù)和貯存條件等因素。發(fā)酵乳中氨基酸總量反映蛋白水解及菌體細(xì)胞同化之間的平衡關(guān)系,例如,保加利亞乳桿菌的蛋白水解活性要強(qiáng)于嗜熱鏈球菌,前者產(chǎn)生的氨基酸為后者同化利用,從而建立了一種菌群共生平衡關(guān)系。

      開(kāi)菲爾是一種由混合菌群發(fā)酵制成的乳制品,目前少有文獻(xiàn)報(bào)道開(kāi)菲爾發(fā)酵過(guò)程中體系內(nèi)游離氨基酸的變化。本試驗(yàn)研究開(kāi)菲爾菌群在不同發(fā)酵溫度下氨基酸釋放利用、細(xì)胞生長(zhǎng)及乳酸產(chǎn)生的特性,以揭示開(kāi)菲爾菌株間的互生關(guān)系,從而在未來(lái)工業(yè)化生產(chǎn)中可以設(shè)計(jì)出具有高活菌數(shù)、高含量游離氨基酸的發(fā)酵乳,提升產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和益生功效。

      1材料與方法

      1.1材料與試劑

      生鮮牛乳,光明乳品八廠生產(chǎn);白砂糖,廣西上上糖業(yè)有限公司生產(chǎn);開(kāi)菲爾復(fù)合發(fā)酵劑,含保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、乳酸乳球菌乳酸亞種、乳酸乳球菌乳脂亞種、乳酸乳球菌雙乙酰亞種,丹尼斯克公司生產(chǎn);氨基酸化學(xué)分析試劑包,美國(guó) Waters 公司生產(chǎn);Pico Taq衍生化試劑盒,美國(guó)Waters公司生產(chǎn);超濾膜,美國(guó)Millpore公司生產(chǎn);MRS培養(yǎng)基、M17培養(yǎng)基,德國(guó)Merck公司生產(chǎn);其他均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

      1.2儀器與設(shè)備

      超凈工作臺(tái),美國(guó)Labconco公司生產(chǎn);厭氧培養(yǎng)箱,英國(guó)Ruskinn公司生產(chǎn);電熱恒溫水槽,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司生產(chǎn);高壓滅菌鍋,日本Hirayama公司生產(chǎn);高速冷凍離心機(jī),美國(guó)BECKMAN COULTER公司生產(chǎn);HPLC色譜儀,美國(guó) Waters 公司生產(chǎn);pH計(jì),美國(guó)奧立龍公司生產(chǎn)。

      1.3試驗(yàn)方法

      1.3.1開(kāi)菲爾制備生牛乳驗(yàn)收→凈化→混料(白砂糖,40~45 ℃)→均質(zhì)(60~65 ℃,19~21MPa)→殺菌(90 ℃,5 min)→冷卻→接種發(fā)酵至pH值4.6±0.02→攪拌破乳→冷卻至16~22 ℃→灌裝封口。

      1.3.2氨基酸測(cè)定樣品用4%磺基水楊酸沉淀,4 ℃、10 000 g 離心20 min;取上清液,用10 000 NMWL的膜超濾,等分為50 L,采用Pico Taq衍生化試劑盒進(jìn)行衍生反應(yīng),用于HPLC上樣分析;采用氨基酸化學(xué)分析試劑包對(duì)游離氨基酸的異硫氰酸苯酯衍生物進(jìn)行定量。色譜分析條件:Pico Taq柱(3.9 mm×30 cm),溫度46 ℃,進(jìn)樣量10 L(取自 100 L 稀釋的衍生化樣品);標(biāo)準(zhǔn)品為額外添加了色氨酸和天冬酰胺的H級(jí)氨基酸,進(jìn)樣量為25 pmol。

      1.3.3乳酸測(cè)定參考Boehringer描述的酶法檢測(cè)流程[3]。

      1.3.4微生物計(jì)數(shù)采用無(wú)菌去離子水進(jìn)行梯度系列稀釋?zhuān)叫性囼?yàn)3次。乳球菌及鏈球菌計(jì)數(shù)使用M17瓊脂培養(yǎng)基,乳桿菌計(jì)數(shù)使用MRS瓊脂培養(yǎng)基,均采用傾注平板法,分別在30、37、42 ℃環(huán)境溫度下培養(yǎng)至形成明顯菌落后進(jìn)行計(jì)數(shù)?;罹?jì)數(shù)以1 g中的菌落集成單位(CFU/g)來(lái)表示。

      2結(jié)果與分析

      2.1不同發(fā)酵溫度下開(kāi)菲爾的活菌數(shù)含量及乳酸合成量

      由圖1可見(jiàn),開(kāi)菲爾菌群中無(wú)論是桿菌還是球菌,在 30 ℃ 培養(yǎng)時(shí)前6 h內(nèi)均呈指數(shù)級(jí)態(tài)勢(shì)生長(zhǎng),此發(fā)酵溫度處于乳酸乳球菌最適的生長(zhǎng)溫度范圍,低于保加利亞乳桿菌和嗜酸乳桿菌的最適生長(zhǎng)溫度,促使整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中球菌數(shù)均高于桿菌數(shù);發(fā)酵17 h后,pH值降至酪蛋白等電點(diǎn)4.61時(shí),球菌數(shù)較桿菌數(shù)高出約1個(gè)數(shù)量級(jí),總菌數(shù)達(dá)1.6×1011 CFU/g,所合成的乳酸總量達(dá)8.0 g/L。在發(fā)酵過(guò)程中,雖然球菌和桿菌均表現(xiàn)出很好的細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)及酸化活性,但是均未到達(dá)典型的穩(wěn)定期。

      2.2不同發(fā)酵溫度下開(kāi)菲爾的氨基酸產(chǎn)生種類(lèi)及合成量endprint

      摘要:開(kāi)菲爾中除含有多種益生菌外,在發(fā)酵過(guò)程中還可代謝產(chǎn)生多種功能性物質(zhì)。試驗(yàn)研究了開(kāi)菲爾在不同發(fā)酵溫度下游離氨基酸變化、活性益生菌增殖及對(duì)乳酸合成水平的影響,結(jié)果表明,30 ℃發(fā)酵至終點(diǎn),pH值為4.60,開(kāi)菲爾中游離氨基酸水平高達(dá)576.2 mg/kg,活菌數(shù)達(dá)1.6×1011 CFU/g,乳酸合成量為8.0 g/L,表現(xiàn)出極好的功能性成分產(chǎn)生水平、菌體細(xì)胞生長(zhǎng)活性和酸化能力。

      關(guān)鍵詞:開(kāi)菲爾;氨基酸;發(fā)酵溫度;活菌數(shù);乳酸

      中圖分類(lèi)號(hào): TS252.42文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2014)09-0236-03

      收稿日期:2013-11-21

      基金項(xiàng)目:“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃(編號(hào):2012BAD28B07、2013BAD18B01)。

      作者簡(jiǎn)介:王豪(1984—),男,上海人,碩士,工程師,主要從事乳品生物技術(shù)研究。E-mail:wanghao840818@126.com。發(fā)酵乳是通過(guò)乳酸菌等菌種,代謝利用乳中乳糖和蛋白質(zhì)等成分,產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì),賦予機(jī)體極好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及益生特效的一種產(chǎn)品[1]。乳酸菌是一類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)選擇較為挑剔的微生物,在多數(shù)情況下此類(lèi)菌群的生物合成能力有限,需要外源的氨基酸或肽來(lái)支持其生長(zhǎng)代謝。由于生乳中缺乏此類(lèi)小分子物質(zhì),因此,乳酸菌的生長(zhǎng)取決于對(duì)酪蛋白的水解能力[2]。酪蛋白是氨基酸的主要來(lái)源,其水解與乳酸菌所分泌的蛋白酶密切相關(guān),細(xì)胞膜上的蛋白酶是唯一能夠催化酪蛋白降解為低聚肽的關(guān)鍵酶,然后,低聚肽才能被轉(zhuǎn)入膜內(nèi),再經(jīng)由內(nèi)肽酶及氨肽酶等進(jìn)一步降解。發(fā)酵乳中由乳酸菌代謝釋放積累的氨基酸會(huì)顯著影響發(fā)酵乳制品的營(yíng)養(yǎng)功能,而游離氨基酸的種類(lèi)及產(chǎn)生水平取決于乳的品類(lèi)、乳酸菌的組成、發(fā)酵參數(shù)和貯存條件等因素。發(fā)酵乳中氨基酸總量反映蛋白水解及菌體細(xì)胞同化之間的平衡關(guān)系,例如,保加利亞乳桿菌的蛋白水解活性要強(qiáng)于嗜熱鏈球菌,前者產(chǎn)生的氨基酸為后者同化利用,從而建立了一種菌群共生平衡關(guān)系。

      開(kāi)菲爾是一種由混合菌群發(fā)酵制成的乳制品,目前少有文獻(xiàn)報(bào)道開(kāi)菲爾發(fā)酵過(guò)程中體系內(nèi)游離氨基酸的變化。本試驗(yàn)研究開(kāi)菲爾菌群在不同發(fā)酵溫度下氨基酸釋放利用、細(xì)胞生長(zhǎng)及乳酸產(chǎn)生的特性,以揭示開(kāi)菲爾菌株間的互生關(guān)系,從而在未來(lái)工業(yè)化生產(chǎn)中可以設(shè)計(jì)出具有高活菌數(shù)、高含量游離氨基酸的發(fā)酵乳,提升產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和益生功效。

      1材料與方法

      1.1材料與試劑

      生鮮牛乳,光明乳品八廠生產(chǎn);白砂糖,廣西上上糖業(yè)有限公司生產(chǎn);開(kāi)菲爾復(fù)合發(fā)酵劑,含保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、乳酸乳球菌乳酸亞種、乳酸乳球菌乳脂亞種、乳酸乳球菌雙乙酰亞種,丹尼斯克公司生產(chǎn);氨基酸化學(xué)分析試劑包,美國(guó) Waters 公司生產(chǎn);Pico Taq衍生化試劑盒,美國(guó)Waters公司生產(chǎn);超濾膜,美國(guó)Millpore公司生產(chǎn);MRS培養(yǎng)基、M17培養(yǎng)基,德國(guó)Merck公司生產(chǎn);其他均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

      1.2儀器與設(shè)備

      超凈工作臺(tái),美國(guó)Labconco公司生產(chǎn);厭氧培養(yǎng)箱,英國(guó)Ruskinn公司生產(chǎn);電熱恒溫水槽,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司生產(chǎn);高壓滅菌鍋,日本Hirayama公司生產(chǎn);高速冷凍離心機(jī),美國(guó)BECKMAN COULTER公司生產(chǎn);HPLC色譜儀,美國(guó) Waters 公司生產(chǎn);pH計(jì),美國(guó)奧立龍公司生產(chǎn)。

      1.3試驗(yàn)方法

      1.3.1開(kāi)菲爾制備生牛乳驗(yàn)收→凈化→混料(白砂糖,40~45 ℃)→均質(zhì)(60~65 ℃,19~21MPa)→殺菌(90 ℃,5 min)→冷卻→接種發(fā)酵至pH值4.6±0.02→攪拌破乳→冷卻至16~22 ℃→灌裝封口。

      1.3.2氨基酸測(cè)定樣品用4%磺基水楊酸沉淀,4 ℃、10 000 g 離心20 min;取上清液,用10 000 NMWL的膜超濾,等分為50 L,采用Pico Taq衍生化試劑盒進(jìn)行衍生反應(yīng),用于HPLC上樣分析;采用氨基酸化學(xué)分析試劑包對(duì)游離氨基酸的異硫氰酸苯酯衍生物進(jìn)行定量。色譜分析條件:Pico Taq柱(3.9 mm×30 cm),溫度46 ℃,進(jìn)樣量10 L(取自 100 L 稀釋的衍生化樣品);標(biāo)準(zhǔn)品為額外添加了色氨酸和天冬酰胺的H級(jí)氨基酸,進(jìn)樣量為25 pmol。

      1.3.3乳酸測(cè)定參考Boehringer描述的酶法檢測(cè)流程[3]。

      1.3.4微生物計(jì)數(shù)采用無(wú)菌去離子水進(jìn)行梯度系列稀釋?zhuān)叫性囼?yàn)3次。乳球菌及鏈球菌計(jì)數(shù)使用M17瓊脂培養(yǎng)基,乳桿菌計(jì)數(shù)使用MRS瓊脂培養(yǎng)基,均采用傾注平板法,分別在30、37、42 ℃環(huán)境溫度下培養(yǎng)至形成明顯菌落后進(jìn)行計(jì)數(shù)?;罹?jì)數(shù)以1 g中的菌落集成單位(CFU/g)來(lái)表示。

      2結(jié)果與分析

      2.1不同發(fā)酵溫度下開(kāi)菲爾的活菌數(shù)含量及乳酸合成量

      由圖1可見(jiàn),開(kāi)菲爾菌群中無(wú)論是桿菌還是球菌,在 30 ℃ 培養(yǎng)時(shí)前6 h內(nèi)均呈指數(shù)級(jí)態(tài)勢(shì)生長(zhǎng),此發(fā)酵溫度處于乳酸乳球菌最適的生長(zhǎng)溫度范圍,低于保加利亞乳桿菌和嗜酸乳桿菌的最適生長(zhǎng)溫度,促使整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中球菌數(shù)均高于桿菌數(shù);發(fā)酵17 h后,pH值降至酪蛋白等電點(diǎn)4.61時(shí),球菌數(shù)較桿菌數(shù)高出約1個(gè)數(shù)量級(jí),總菌數(shù)達(dá)1.6×1011 CFU/g,所合成的乳酸總量達(dá)8.0 g/L。在發(fā)酵過(guò)程中,雖然球菌和桿菌均表現(xiàn)出很好的細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)及酸化活性,但是均未到達(dá)典型的穩(wěn)定期。

      2.2不同發(fā)酵溫度下開(kāi)菲爾的氨基酸產(chǎn)生種類(lèi)及合成量endprint

      摘要:開(kāi)菲爾中除含有多種益生菌外,在發(fā)酵過(guò)程中還可代謝產(chǎn)生多種功能性物質(zhì)。試驗(yàn)研究了開(kāi)菲爾在不同發(fā)酵溫度下游離氨基酸變化、活性益生菌增殖及對(duì)乳酸合成水平的影響,結(jié)果表明,30 ℃發(fā)酵至終點(diǎn),pH值為4.60,開(kāi)菲爾中游離氨基酸水平高達(dá)576.2 mg/kg,活菌數(shù)達(dá)1.6×1011 CFU/g,乳酸合成量為8.0 g/L,表現(xiàn)出極好的功能性成分產(chǎn)生水平、菌體細(xì)胞生長(zhǎng)活性和酸化能力。

      關(guān)鍵詞:開(kāi)菲爾;氨基酸;發(fā)酵溫度;活菌數(shù);乳酸

      中圖分類(lèi)號(hào): TS252.42文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A文章編號(hào):1002-1302(2014)09-0236-03

      收稿日期:2013-11-21

      基金項(xiàng)目:“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃(編號(hào):2012BAD28B07、2013BAD18B01)。

      作者簡(jiǎn)介:王豪(1984—),男,上海人,碩士,工程師,主要從事乳品生物技術(shù)研究。E-mail:wanghao840818@126.com。發(fā)酵乳是通過(guò)乳酸菌等菌種,代謝利用乳中乳糖和蛋白質(zhì)等成分,產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì),賦予機(jī)體極好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及益生特效的一種產(chǎn)品[1]。乳酸菌是一類(lèi)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)選擇較為挑剔的微生物,在多數(shù)情況下此類(lèi)菌群的生物合成能力有限,需要外源的氨基酸或肽來(lái)支持其生長(zhǎng)代謝。由于生乳中缺乏此類(lèi)小分子物質(zhì),因此,乳酸菌的生長(zhǎng)取決于對(duì)酪蛋白的水解能力[2]。酪蛋白是氨基酸的主要來(lái)源,其水解與乳酸菌所分泌的蛋白酶密切相關(guān),細(xì)胞膜上的蛋白酶是唯一能夠催化酪蛋白降解為低聚肽的關(guān)鍵酶,然后,低聚肽才能被轉(zhuǎn)入膜內(nèi),再經(jīng)由內(nèi)肽酶及氨肽酶等進(jìn)一步降解。發(fā)酵乳中由乳酸菌代謝釋放積累的氨基酸會(huì)顯著影響發(fā)酵乳制品的營(yíng)養(yǎng)功能,而游離氨基酸的種類(lèi)及產(chǎn)生水平取決于乳的品類(lèi)、乳酸菌的組成、發(fā)酵參數(shù)和貯存條件等因素。發(fā)酵乳中氨基酸總量反映蛋白水解及菌體細(xì)胞同化之間的平衡關(guān)系,例如,保加利亞乳桿菌的蛋白水解活性要強(qiáng)于嗜熱鏈球菌,前者產(chǎn)生的氨基酸為后者同化利用,從而建立了一種菌群共生平衡關(guān)系。

      開(kāi)菲爾是一種由混合菌群發(fā)酵制成的乳制品,目前少有文獻(xiàn)報(bào)道開(kāi)菲爾發(fā)酵過(guò)程中體系內(nèi)游離氨基酸的變化。本試驗(yàn)研究開(kāi)菲爾菌群在不同發(fā)酵溫度下氨基酸釋放利用、細(xì)胞生長(zhǎng)及乳酸產(chǎn)生的特性,以揭示開(kāi)菲爾菌株間的互生關(guān)系,從而在未來(lái)工業(yè)化生產(chǎn)中可以設(shè)計(jì)出具有高活菌數(shù)、高含量游離氨基酸的發(fā)酵乳,提升產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和益生功效。

      1材料與方法

      1.1材料與試劑

      生鮮牛乳,光明乳品八廠生產(chǎn);白砂糖,廣西上上糖業(yè)有限公司生產(chǎn);開(kāi)菲爾復(fù)合發(fā)酵劑,含保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、乳酸乳球菌乳酸亞種、乳酸乳球菌乳脂亞種、乳酸乳球菌雙乙酰亞種,丹尼斯克公司生產(chǎn);氨基酸化學(xué)分析試劑包,美國(guó) Waters 公司生產(chǎn);Pico Taq衍生化試劑盒,美國(guó)Waters公司生產(chǎn);超濾膜,美國(guó)Millpore公司生產(chǎn);MRS培養(yǎng)基、M17培養(yǎng)基,德國(guó)Merck公司生產(chǎn);其他均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

      1.2儀器與設(shè)備

      超凈工作臺(tái),美國(guó)Labconco公司生產(chǎn);厭氧培養(yǎng)箱,英國(guó)Ruskinn公司生產(chǎn);電熱恒溫水槽,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司生產(chǎn);高壓滅菌鍋,日本Hirayama公司生產(chǎn);高速冷凍離心機(jī),美國(guó)BECKMAN COULTER公司生產(chǎn);HPLC色譜儀,美國(guó) Waters 公司生產(chǎn);pH計(jì),美國(guó)奧立龍公司生產(chǎn)。

      1.3試驗(yàn)方法

      1.3.1開(kāi)菲爾制備生牛乳驗(yàn)收→凈化→混料(白砂糖,40~45 ℃)→均質(zhì)(60~65 ℃,19~21MPa)→殺菌(90 ℃,5 min)→冷卻→接種發(fā)酵至pH值4.6±0.02→攪拌破乳→冷卻至16~22 ℃→灌裝封口。

      1.3.2氨基酸測(cè)定樣品用4%磺基水楊酸沉淀,4 ℃、10 000 g 離心20 min;取上清液,用10 000 NMWL的膜超濾,等分為50 L,采用Pico Taq衍生化試劑盒進(jìn)行衍生反應(yīng),用于HPLC上樣分析;采用氨基酸化學(xué)分析試劑包對(duì)游離氨基酸的異硫氰酸苯酯衍生物進(jìn)行定量。色譜分析條件:Pico Taq柱(3.9 mm×30 cm),溫度46 ℃,進(jìn)樣量10 L(取自 100 L 稀釋的衍生化樣品);標(biāo)準(zhǔn)品為額外添加了色氨酸和天冬酰胺的H級(jí)氨基酸,進(jìn)樣量為25 pmol。

      1.3.3乳酸測(cè)定參考Boehringer描述的酶法檢測(cè)流程[3]。

      1.3.4微生物計(jì)數(shù)采用無(wú)菌去離子水進(jìn)行梯度系列稀釋?zhuān)叫性囼?yàn)3次。乳球菌及鏈球菌計(jì)數(shù)使用M17瓊脂培養(yǎng)基,乳桿菌計(jì)數(shù)使用MRS瓊脂培養(yǎng)基,均采用傾注平板法,分別在30、37、42 ℃環(huán)境溫度下培養(yǎng)至形成明顯菌落后進(jìn)行計(jì)數(shù)?;罹?jì)數(shù)以1 g中的菌落集成單位(CFU/g)來(lái)表示。

      2結(jié)果與分析

      2.1不同發(fā)酵溫度下開(kāi)菲爾的活菌數(shù)含量及乳酸合成量

      由圖1可見(jiàn),開(kāi)菲爾菌群中無(wú)論是桿菌還是球菌,在 30 ℃ 培養(yǎng)時(shí)前6 h內(nèi)均呈指數(shù)級(jí)態(tài)勢(shì)生長(zhǎng),此發(fā)酵溫度處于乳酸乳球菌最適的生長(zhǎng)溫度范圍,低于保加利亞乳桿菌和嗜酸乳桿菌的最適生長(zhǎng)溫度,促使整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中球菌數(shù)均高于桿菌數(shù);發(fā)酵17 h后,pH值降至酪蛋白等電點(diǎn)4.61時(shí),球菌數(shù)較桿菌數(shù)高出約1個(gè)數(shù)量級(jí),總菌數(shù)達(dá)1.6×1011 CFU/g,所合成的乳酸總量達(dá)8.0 g/L。在發(fā)酵過(guò)程中,雖然球菌和桿菌均表現(xiàn)出很好的細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)及酸化活性,但是均未到達(dá)典型的穩(wěn)定期。

      2.2不同發(fā)酵溫度下開(kāi)菲爾的氨基酸產(chǎn)生種類(lèi)及合成量endprint

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