胡興文，王維鵬（湖北省婦幼保健院檢驗科，武漢 430070）

兒童呼吸道感染發(fā)病率是成人的2～3倍，且大多數(shù)兒童急性呼吸道感染因病毒感染所致［1］。筆者分析了湖北省婦幼保健院兒科2011年1月至2012年12月收治的5 925例呼吸道感染患者臨床資料，對腺病毒（ADV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、甲型流感病毒（FluA）、乙型流感病毒（FluB）、副流感病毒1型（PIV1）、副流感病毒2型（PIV2）和副流感病毒3型（PIV3），共計7種呼吸道病毒的檢出情況，以期了解上述7種呼吸道病毒在武漢地區(qū)兒童患者中的流行特征，旨在為防治呼吸道病毒感染提供依據(jù)，并為臨床醫(yī)生合理用藥提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料2011年1月至2012年12月湖北省婦幼保健院兒科收治的呼吸道感染患者5 925例，年齡1個月至14歲，平均年齡（1.3±1.7）歲，其中男3 818例、女2 107例。

1.2 儀器與試劑BX51型熒光顯微鏡（日本OLYMPUS），直接免疫熒光法檢測試劑（美國Diagnostic HYBRIDS）。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 將植絨拭子從患者鼻孔插入鼻腔，達到鼻咽部，旋轉2～3次后迅速取出拭子，放入標本盛有轉運液的試管中。

1.3.2 標本處理 將裝入植絨拭子標本的試管在漩渦混勻器上輕微混勻約30s，見轉運液渾濁后取出植絨拭子，以2 500r／min離心試管10min，棄去上清液，保留轉運液約300μL，用吸管吹打混勻剩余的轉運液，形成渾濁的細胞懸浮液。

1.3.3 標本制片 將制備好的細胞懸浮液標本點樣于8孔載玻片上（每孔約10～15μL），每份標本點樣7孔，自然晾干后將載玻片置冷丙酮中固定標本10min，取出自然晾干。

1.3.4 標本反應 每個點樣孔分別滴加7種呼吸道病毒（ADV、RSV、FluA、FluB、PIV1、PIV2、PIV3）特異性異硫氰酸熒光素標記單克隆抗體1滴，約25μL（必須保證抗體試劑完全覆蓋待測標本），將載玻片放在濕盒中，置37℃水浴箱孵育30min；取出載玻片，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗1次后，將載玻片置PBS中，再次洗滌（PBS不能重復使用）。

1.3.5 標本觀察 將1滴封閉液滴加于載玻片中央，蓋上蓋玻片，在熒光顯微鏡下觀察。

1.3.6 結果判斷 異硫氰酸熒光素標記的呼吸道病毒特異性單克隆抗體與細胞中的病毒抗原結合后，形成抗原抗體復合物，熒光顯微鏡下觀察可見細胞內(nèi)出現(xiàn)綠色熒光；未發(fā)生抗原抗體特異性結合反應的細胞，則被染成紅色。因此，顯示綠色熒光的細胞，判為陽性細胞。當放大倍數(shù)為200倍時，在視野中可見陽性細胞數(shù)超過2個，則可將標本判為陽性標本。

1.4 統(tǒng)計學處理采用SSPS15.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗；P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 總體檢測情況共檢測5 925例患者標本，檢出陽性標本1 657例，總陽性率為28.0%，其中RSV陽性率最高，為17.4%；其次為PIV3，為4.6%；PIV2陽性率最低，為0.2%。見表1。

表1 7種呼吸道病毒檢測陽性率（n=5 925）

2.2 混合感染同一標本同時有2種病毒檢測結果為陽性的共有28例，占0.5%，其中以ADV和RSV混合感染最多，為11例，占混合感染的39.3%，其次為RSV和PIV3混合感染，為6例，占混合感染的21.4%，見表2。

2.3 不同年齡段患者病毒陽性檢出率按年齡將患者分為0～1歲兒童組和大于1歲兒童組，并進行組間比較，RSV和PIV3在0～1歲兒童組的陽性檢出率明顯高于大于1歲兒童組（P＜0.05），而ADV、FluA和FluB在0～1歲兒童組的感染率明顯低于大于1歲兒童組（P＜0.05），PIV1和PIV2感染率組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3。

表2 混合感染2種病毒的分布情況（n）

表3 不同病毒在各年齡段兒童中的陽性檢出率比較［n（%）］

2.4 不同月份病毒陽性檢出率就7種病毒總體檢出陽性率而言，2月份病毒陽性檢出率最高，為54.0%，10月份最低，為15.4%。RSV在1～4月份和11～12月份陽性檢出率較高，其中2月份最高，為44.2%，在5～10月份較低，其中7月份最低，為1.1%；PIV3在5～7月份陽性檢出率較高，其中6月份最高，為12.6%，7月份次之，為10.3%；FluA在7月份陽性檢出率最高，為8.1%。只有FluB陽性檢出率高峰與ASV一致。在1～4月份和8～12月份，RSV陽性檢出率高于其他病毒，但在5～7月份PIV3陽性檢出率高于其他病毒，見圖1。

圖1 不同月份7種病毒陽性檢出率分布

3 討 論

兒童急性呼吸道感染主要因病毒感染所致，且可導致呼吸道感染的病毒種類很多。本文主要研究了ADV、RSV、FluA、FluB、PIV1、PIV2和PIV3在兒童呼吸道感染患者中的檢出情況。本研究顯示，7種病毒在兒童呼吸道感染患者中的總檢出率為28.0%，與國外用直接免疫熒光法對下呼吸道感染患兒進行7種病毒檢測，陽性率為25.2%［2］，胡芙蓉等［3］報道的浙江嘉興地區(qū)為24.99%的研究結果基本一致。在這7種病毒中，RSV陽性檢出率最高，為17.4%，其次是PIV3，為4.6%，PIV2陽性檢出率最低，為0.2%。由此可見，RSV感染最為常見，是武漢地區(qū)兒童呼吸道感染的主要病原體。這與趙百慧等［4］報道的上海地區(qū)兒童RSV陽性檢出率最高，PIV2陽性檢出率最低一致。

本研究顯示，武漢地區(qū)兒童呼吸道感染以單一病毒感染為主，2種病毒混合感染較為少見，僅占感染患兒的0.5%，且沒有檢出3種及其以上病毒混合感染的患兒。RSV在0～1歲兒童組和大于1歲兒童組的陽性檢出率分別為20.2%和8.1%，PIV3在0～1歲兒童組和大于1歲兒童組的陽性檢出率分別為5.3%和2.4%，RSV和PIV3在0～1歲兒童組的陽性檢出率均較大于1歲兒童組的陽性檢出率升高1倍以上（P＜0.05），而ADV、FluA和FluB的檢測結果恰恰相反，均為大于1歲兒童組的陽性檢出率比0～1歲兒童組的陽性檢出率升高1倍以上（P＜0.05）。出現(xiàn)上述差異，考慮可能與以下因素有關：（1）RSV在世界各地都廣泛流行，相比其他病毒，在生活中接觸RSV的可能性更大；（2）由于0～1歲兒童的免疫系統(tǒng)尚未完全成熟，免疫抵抗力相比大于1歲的兒童更弱，導致其被病毒感染的可能性更大；（3）PIV3和RSV都屬于副黏病毒科病毒，有可能導致PIV3的檢出情況與RSV相似；（4）ADV、FluA、FluB主要通過飛沫或接觸方式傳播，0～1歲兒童主要在室內(nèi)活動，而大于1歲的兒童組活動范圍較0～1歲兒童更為廣泛，例如3歲以后兒童一般已進入幼兒園，因此，大于1歲的兒童因相互間的密切接觸，更易出現(xiàn)ADV、FluA和FluB的感染。

呼吸道病毒的流行一般有季節(jié)特征。本研究結果顯示，7種病毒在武漢地區(qū)的總流行高峰在2月份，低峰在10月份。RSV在1～4月份和11～12月份為流行高峰，其中2月份為最高峰，陽性檢出率可達44.2%，在5～10月份為流行低峰，其中7月份最低，陽性檢出率降至1.1%。FluB的流行高峰與RSV基本一致，但PIV3和FluA與RSV呈現(xiàn)相反的流行趨勢，即在夏季出現(xiàn)流行高峰。PIV3在5～7月份為流行高峰，其中6月份為最高峰，陽性檢出率為12.6%，7月份次之，為10.3%；FluA在7月份為流行最高峰，陽性檢出率達8.1%。在一年當中，大多數(shù)月份RSV陽性檢出率高于其他病毒，僅在5～7月份出現(xiàn)PIV3陽性檢出率高于其他病毒的情況。因此，可以認為武漢地區(qū)兒童呼吸道感染以RSV感染為主，可能與RSV不僅可以通過呼吸道傳播，也可以通過接觸傳播有關［5］，也可能與已感染患者接觸過的物品表面和分泌物都可以檢出RSV，造成RSV極易在人群中傳播有關［6］。此外，RSV感染的復發(fā)率也很高。有研究顯示，RSV在嬰幼兒出生后第1年內(nèi)的感染率為68.8%，在第2年可達到82.6%，且一半的患兒曾經(jīng)有過2次RSV感染病史，但到4歲時，發(fā)生再次感染的危險性可降低到33.3%［7］。另一方面，RSV的G蛋白可以誘導機體產(chǎn)生部分細胞因子，調節(jié)免疫應答，有利于病毒出現(xiàn)免疫逃逸現(xiàn)象［8-10］。

本研究結果顯示武漢地區(qū)兒童RSV感染存在明顯的季節(jié)性特征，最高2月份的感染率（44.2%）是最低7月份（1.1%）的40倍，這與上海地區(qū)RSV感染的季節(jié)性特征有所差異［4］，其原因尚有待研究。

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