陳培華 梁永曄（江蘇省寶應(yīng)縣畜牧獸醫(yī)站 225800）

禽流感H5亞型二價(jià)滅活苗免疫效果的試驗(yàn)報(bào)告

陳培華 梁永曄（江蘇省寶應(yīng)縣畜牧獸醫(yī)站 225800）

為驗(yàn)證重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）對蛋雞群的安全性和免疫效果，通過注射3家蛋雞場32400只蛋雞，注射疫苗后連續(xù)2周觀察雞只的精神狀態(tài)、采食量、糞便及雞群死亡率，均未發(fā)生異常情況，與注射之前無明顯差異。表明在雞場試驗(yàn)條件下，重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）安全性高、副反應(yīng)小，免疫效果相對較好。

禽流感;Re-6株+Re-7株;田間試驗(yàn);免疫效果;觀察

高致病性禽流感是嚴(yán)重危害蛋雞生產(chǎn)健康發(fā)展主要疾病之一。免疫是防治高致病性禽流感最重要、最有效的手段，并且也取得了很好的防治效果。但是由于近年來，禽流感病毒變異的速度不斷加快，防治高致病性禽流感工作面臨著極大的挑戰(zhàn)。要做好高致病性禽流感的免疫工作，就必須及時(shí)掌握流行毒株情況，并及時(shí)應(yīng)用針對性的疫苗。為了驗(yàn)證重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）對蛋雞的安全性和免疫效果，2014年7～10月，筆者在3家蛋雞場開展了重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）的免疫試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果證明，重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）的免疫效果很好。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)雞群

用于試驗(yàn)觀察疫苗免疫安全性和免疫效果測定的3個(gè)雞群為寶應(yīng)庭余有機(jī)農(nóng)業(yè)產(chǎn)銷合作社、寶應(yīng)縣興旺禽業(yè)專業(yè)合作社、寶應(yīng)縣馬莊養(yǎng)雞場的40日齡京紅蛋雞群，第1雞群11200只、第2雞群10200只、第3雞群11000只，雞群健康、生長良好，均為重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）非免疫雞群。

1.1.2 檢測試劑

重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株），由乾元浩生物股份鄭州生物藥廠提供，批準(zhǔn)文號：獸藥生字（2014）160132228，批號：2014068；禽流感病毒H5亞型HI抗原，血凝效價(jià)≥7log2，批號：2013002，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)；SPF雞感染禽流感H5亞型高免血清，HI≥7log2，批號：2013001，哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.1.3 主要試劑

0.01mol/L的PBS液（pH7.2）、生理鹽水、1%紅細(xì)胞懸液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2 方法

1.2.1 疫苗接種

將試驗(yàn)用疫苗恢復(fù)到常溫后，雞頸部皮下注射，每只0.5ml，免疫1次。

1.2.2 采血

第1、2、3群疫苗免疫之前及免疫后15、25、35、45、55、65d各采血1次。翅下靜脈采血，1～2ml/只，分離血清，冷藏或冷凍備用。

1.2.3 抗體效價(jià)測定

按照《高致病性禽流感免疫技術(shù)規(guī)范》（NYT769-2004）[2]血凝抑制（HI）試驗(yàn)操作進(jìn)行，HI效價(jià)≥4log2判定為陽性，HI效價(jià)＜4log2判定為陰性，以陽性數(shù)占檢測數(shù)的比例計(jì)算抗體合格率。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 安全性試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)注射疫苗后，連續(xù)觀察2周，雞的精神狀態(tài)、采食量、糞便，以及雞群的死亡率，按照說明注射劑量注射的3個(gè)雞群均無異常情況發(fā)生，疫苗對蛋雞雛雞群免疫都是安全的，而且疫苗引起的副反應(yīng)較小。

2.2 母源抗體測定結(jié)果

經(jīng)對3群京紅蛋雞在重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）免疫前采血進(jìn)行抗體檢測，結(jié)果顯示禽流感抗體合格率均為0，表明3個(gè)雞群為重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）非免疫雞群，而且無母源抗體。

2.3 免疫效果測定結(jié)果

通過對3個(gè)雞群疫苗注射前后采血進(jìn)行抗體測定，發(fā)現(xiàn)疫苗免疫前禽流感抗體合格率為0，第1群疫苗免疫后第15、25、35、45、55、65d的免疫抗體合格率分別為20.83%、51.67%、87.5%、95.83%、99.16%、88.33%，平均抗體滴度分別為 2.01log2、3.52log2、5.35log2、6.75log2、8.02log2、5.3log2； 第2群疫苗免疫后15、 25、35、45、 55、65d的免疫抗體合格率分別為20%、60%、90.83%、98.33%、100%、90.83%，平均抗體滴度分別為2.22log2、4.64log2、6.45log2、7.05log2、7.92log2、6.24log2；第3群疫苗免疫后15、25、35、45、55、65d的免疫抗體合格率分別為23.33%、58.33%、91.67%、100%、100%、92.5%，平均抗體滴 度 分 別 為 2.41log2、 4.14log2、 6.25log2、 7.33log2、7.58log2、6.11log2。免疫后35d抗體合格率分別為87.5%、90.83%、91.67%，平均為90%，監(jiān)測到免疫后65d，抗體合格率仍分別為88.33%、90.83%、92.5%，平均為90.55%，從免疫后35d起至65d，兩期試驗(yàn)的抗體合格率均超過農(nóng)業(yè)部重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫抗體合格率應(yīng)保持在80%以上的要求。免疫后65d的抗體滴度仍分別為5.30log2、6.24log2、6.11log2，說明疫苗免疫后抗體滴度上升快，維持時(shí)間長，并且在蛋雞養(yǎng)殖中，40日齡時(shí)使用該疫苗免疫，120日齡再次免疫該疫苗，以后，每4～6個(gè)月肌注1次。

3 結(jié)論與討論

本次免疫試驗(yàn)的3個(gè)雞群共32400只，均未出現(xiàn)免疫副反應(yīng)，說明重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6株+Re-7株）安全性高、副反應(yīng)小，在寶應(yīng)縣基層推廣具有可行性。本次試驗(yàn)由于時(shí)間關(guān)系，僅對免疫1次的小范圍雞群進(jìn)行免疫效果測定，要更全面、更準(zhǔn)確判定該疫苗的免疫效果，筆者將對這3家雞群在120日齡再次免疫和每4～6個(gè)月免疫1次后及時(shí)采集血樣進(jìn)行更多次檢測，同時(shí)進(jìn)行更多批次疫苗和試驗(yàn)雞重復(fù)試驗(yàn)，得出更全面、更科學(xué)、更能指導(dǎo)防疫工作的結(jié)論。

江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程（SXGC[2014]213）。