劉 釗，曾智勇，王偉丞，代振江

（1.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省動物疫病研究室，貴州 貴陽 550025）

冬春兩季應(yīng)加強(qiáng)豬流行性腹瀉的綜合防控

劉 釗1，曾智勇2*，王偉丞2，代振江2

（1.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省動物疫病研究室，貴州 貴陽 550025）

冬春兩季常是“冬痢”的高發(fā)季節(jié)，近2年來該病呈現(xiàn)出僅以豬流行性腹瀉病毒（PEDV）感染為主，而非之前的傳染性胃腸炎病毒（TGEV）或TGEV和PEDV共感染為主，臨床上主要表現(xiàn)為嚴(yán)重腹瀉、脫水和急劇消瘦死亡為主要特征，現(xiàn)已給中國、美國、日本等國家的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失，歐盟目前也已責(zé)令嚴(yán)防PEDV的傳入。盡管該病在我國主要于2012前后呈現(xiàn)暴發(fā)流行，現(xiàn)多為散發(fā)，但入冬后仍需引起重視，采取積極措施予以綜合防控。

豬流行性腹瀉；冬??；綜合防控

冬春兩季常是“冬痢”的高發(fā)季節(jié)，造成“冬痢”的主要原因是由傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和輪狀病毒(RV)等單獨(dú)或混合感染引起的，但目前主要是由豬流行性腹瀉病毒引起[1]。豬流行性腹瀉在世界范圍內(nèi)流行極為廣泛，如韓國、泰國、越南、日本等均有本病發(fā)生的報(bào)道。2010—2013年P(guān)EDV在中國各地呈暴發(fā)流行，造成大量哺乳仔豬的死亡，嚴(yán)重影響了我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展?；艚鹨热藢Σ杉诤幽稀⑸轿?、安徽和河北4個(gè)省份的82家豬場的糞樣進(jìn)行雙重RT-PCR檢測，結(jié)果表明PEDV陽性率高達(dá)62.2%[2]。2010—2012年，采自華中地區(qū)11個(gè)城市的182家豬場的腹瀉糞樣，經(jīng)RT-PCR檢測，PEDV陽性率高達(dá)60.44%[3]；截至2014年6月16日，豬流行性腹瀉（PED）疫情在日本已擴(kuò)散至38個(gè)道縣的766家農(nóng)場，共暴發(fā)766起疫情，98萬多頭豬感染，28萬多頭豬死亡；該病自2013年4月在美國首次發(fā)現(xiàn)以來，截至 2014 年6月11日，美國已有30個(gè)州的實(shí)驗(yàn)室在7 250個(gè)豬群中檢測到PEDV陽性病例，僅2013年因PED就造成約300萬頭仔豬死亡，持續(xù)到2014年預(yù)計(jì)可造成700萬頭仔豬的死亡[4]。目前，美國及歐盟相關(guān)國家正在積極應(yīng)對PEDV擴(kuò)散，并對PEDV進(jìn)行了大量的研究。冬春季節(jié)正值該病的高發(fā)期，盡管該病在我國主要于2012年前后呈現(xiàn)暴發(fā)流行，現(xiàn)多為散發(fā)，但仍需引起重視，采取積極措施予以綜合防控。

1??病原學(xué)特征

PEDV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，為球形囊膜病毒(95～190 nm)。該病毒基因組是單股正鏈RNA，基因組長為27 000～33 000個(gè)核苷酸(nt)，靠近3′端5 kb區(qū)域內(nèi)有5個(gè)主要的開放閱讀框(ORF)，可編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白，即S蛋白(spike protein)、E蛋白(Envelope protein)、M蛋白(membrane protein)和N蛋 白(nucleo protein)。PEDV引起的嚴(yán)重腹瀉脫水是導(dǎo)致病豬死亡的主要原因。仔豬在感染PEDV時(shí)，PEDV在仔豬空腸中后段、回腸、盲腸黏膜絨毛柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、增殖，由于病毒增殖首先造成細(xì)胞器的損傷，繼而出現(xiàn)細(xì)胞功能障礙，破壞腸黏膜柱狀上皮細(xì)胞，引起腸絨毛裸露、斷裂、融合及腸上皮細(xì)胞內(nèi)各種酶類活性降低或失活，導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)吸收障礙、呈現(xiàn)滲透性腹瀉，造成豬只脫水、腹瀉，甚至衰竭、死亡[5]。

2??診斷方法

豬流行性腹瀉常發(fā)于寒濕較重的季節(jié)，近年來多呈地方性流行。不同年齡段的豬對該病毒均易感，病毒感染后對初生仔豬的危害最大，常致其整窩發(fā)病，病死率極高。由于PEDV、TGEV以及RV感染所致的臨床癥狀、流行特點(diǎn)和病理變化極其相似，難以根據(jù)臨床表現(xiàn)予以準(zhǔn)確區(qū)分，所以應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室手段對“冬痢”病原，尤其對PEDV進(jìn)行快速準(zhǔn)確的確診，對于目前該類疫病的防控具有重要意義。

目前，針對上述病原有多種檢測方法，如病毒的分離鑒定、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、熒光定量RT-PCR和膠體金免疫技術(shù)等。其中，反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法已成為應(yīng)用最為廣泛的方法之一。

王偉丞等[6]根據(jù)分離到的GZ-ZY株的M基因序列建立了PEDV的RTPCR檢測方法，根據(jù)GenBank中登錄的PEDV參考毒株M基因序列，利用PrimePremier 6.0設(shè)計(jì)1對特異性引物，擴(kuò)增目的片段大小約為681 bp。上游引物：5’-TCGGAATTCATGTCTA ACGGTTCT-3’，下游引物：5’-ACGC TCGAGTTAGACTAAATGAAG-3’，用所設(shè)計(jì)的特異性引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系為50μL，其中2 ×1Step Buffer25μL，總RNA 5μ L，PrimeScriptTMOne Step Enzyme Mix 2μL，PEDV上下游引物各1μ L，RNase Free H2O 16μL。反應(yīng)條件：50 ℃ 40 min；94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。此法可有效檢出糞樣及細(xì)胞中的PEDV。此 外，D.S.Song等建 立的PEDV、TGEV、RV的多重RT-PCR方法檢測157份仔豬臨床腹瀉病料，PEDV、TGEV、RV陽性率分別為26.3%、2.7%和13.2%，該方法敏感性高、特異性強(qiáng)，具有較高的臨床實(shí)用價(jià)值[7]。

盡管病毒分離鑒定是疫病確診的經(jīng)典方法，但由于PEDV的分離培養(yǎng)敏感細(xì)胞主要系Vero傳代細(xì)胞，且培養(yǎng)條件較為苛刻，難以實(shí)現(xiàn)臨床樣品的快速準(zhǔn)確診斷。

3??綜合防控

該病的發(fā)生主要是冬春交替之際，寒濕困于脾胃，機(jī)體抵抗力下降，病毒侵入機(jī)體而引起，因仔豬脾胃發(fā)育不全故最易發(fā)病[8]。當(dāng)前豬流行性腹瀉的防治仍無特效方法，所以加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，加強(qiáng)防疫和對癥治療顯得尤為重要。

3．1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

3.1.1 完善消毒措施

加強(qiáng)常規(guī)清洗與消毒。若豬場暴發(fā)豬流行性腹瀉，應(yīng)首先迅速隔離發(fā)病豬只，并嚴(yán)密觀察對癥治療防止脫水；對豬舍進(jìn)行徹底的清洗和消毒。病死豬需經(jīng)深埋、潑灑燒堿或生石灰等進(jìn)行無害化處理。

3.1.2 注意氣候變化

該病多發(fā)于冬春季節(jié)。原因是冬春季節(jié)氣溫變化頻繁、氣溫比較低，如果此時(shí)豬舍保溫措施不夠，導(dǎo)致仔豬機(jī)體抵抗力下降，很容易誘發(fā)仔豬的流行性腹瀉，因此一定要注意豬舍保溫。

3.1.3 防止交叉感染

應(yīng)嚴(yán)格控制豬場內(nèi)外的豬和人員流動，進(jìn)出車輛要進(jìn)行嚴(yán)格消毒。禁止生產(chǎn)區(qū)工作人外出，嚴(yán)禁飼養(yǎng)員之間串舍。新引進(jìn)的種豬，必須隔離飼養(yǎng)30 d以上，確認(rèn)健康后才能入群飼養(yǎng)，最好是實(shí)行“全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)方式。

3.1.4 提高豬群的營養(yǎng)水平

飼喂優(yōu)質(zhì)飼料，適當(dāng)提高豬群日糧的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和微量元素等水平；給仔豬飼料添加檸檬酸，改善仔豬腸道微生態(tài)平衡，保證仔豬充足的飲水，可以在一定程度上降低PED的發(fā)生率[9]。

3．2 免疫預(yù)防

3.2.1 疫苗免疫

告別了依賴國外高價(jià)疫苗的時(shí)代，目前國內(nèi)有很多生物制品公司都已經(jīng)研制出免疫豬流行性腹瀉病毒的疫苗，多為基于CV777株的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗。一般主動免疫接種后7 d產(chǎn)生免疫力，免疫期為6個(gè)月。仔豬被動免疫的免疫期至斷奶后7 d。使用方法為按說明書上的頭份、劑量配制好疫苗后，后海穴位注射，進(jìn)針時(shí)保持與直腸平行或稍偏上。妊娠母豬于產(chǎn)仔前20～30 d每頭注射1.5 mL；其所生仔豬于斷奶后7～10 d每頭注射0.5 mL。未免疫母豬所產(chǎn)3日齡以內(nèi)仔豬每頭注射0.2 mL。體重25～50 kg育成豬每頭注射1 mL，體重50 kg以上成豬每頭注射1.5 mL。進(jìn)針深度：3日齡仔豬0.5 cm，隨豬齡增大而加深，成豬4 cm。

3.2.2 關(guān)于免疫預(yù)防的一點(diǎn)思考

1）返飼的問題。很多學(xué)者在暴發(fā) PED 后主張采用返飼的方法，但很多人并沒有掌握正確的方法。返飼只是個(gè)緊急應(yīng)對措施，必須在短期內(nèi)集中進(jìn)行，使種豬群盡快度過帶毒和排毒期，千萬不能把返飼當(dāng)作一種免疫方法應(yīng)用[10]。鑒于其危險(xiǎn)度，目前筆者不建議使用返飼進(jìn)行PEDV的免疫。

2）疫苗免疫效果的檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦使用的檢測病毒的標(biāo)準(zhǔn)方法。此法具有敏感性強(qiáng)、特異性強(qiáng)、簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，每次可測多個(gè)樣品，特別適于基層豬場大批豬血清樣品抗體水平的普查。但是目前市面上還沒有商業(yè)化的豬流行性腹瀉的ELISA試劑盒以供使用，亟待研究開發(fā)。

3．3 治療與保健

本病無特效藥，主要是對癥治療。豬只被感染后，如果不予以相應(yīng)能量物質(zhì)的補(bǔ)充，會導(dǎo)致豬只消耗自體營養(yǎng)儲備，加劇機(jī)體免疫水平下降，因此，應(yīng)當(dāng)對有癥狀和無癥狀的豬都進(jìn)行補(bǔ)液，補(bǔ)充易消化、適口性好的飼料，增加營養(yǎng)，增強(qiáng)體質(zhì)。

4??“血漿蛋白粉”傳播源的不確定性

2011年起至今，豬流行性腹瀉并未離開我們的視野，它暴發(fā)在大洋彼岸。2013年5月，豬流行性腹瀉在美國、加拿大先后暴發(fā)。加拿大食品檢驗(yàn)局(CFIA)發(fā)布公告稱，血漿蛋白粉有可能是引發(fā)豬流行性腹瀉的罪魁禍?zhǔn)?。血漿蛋白粉營養(yǎng)全價(jià)、平衡，富含多種功能性蛋白和未知促生長因子，能提高消化酶的分泌量和活性，提高飼料利用率，并且可以在一定程度上緩解應(yīng)激。但是也有學(xué)者認(rèn)為：飼料中的蛋白質(zhì)含量已經(jīng)足夠，如果再添加血漿蛋白粉，會造成機(jī)體蛋白質(zhì)攝入量過多，蛋白質(zhì)在體內(nèi)的分解產(chǎn)物聚積也會影響正常的肝腎功能，增加肝腎負(fù)擔(dān)，同時(shí)還會造成免疫力低下；過多還容易造成仔豬腹瀉；血漿蛋白粉如果滅活不徹底，很有可能帶有某些病毒，造成疾病傳播。因此，為了規(guī)范使用血漿蛋白粉，中國農(nóng)業(yè)部制定了《飼料原料目錄》并于2013年1月1日起施行，其中明確規(guī)定：以屠宰食用動物得到的新鮮血液分離出的血漿為原料，經(jīng)滅菌、噴霧干燥獲得的產(chǎn)品。原料應(yīng)來源于同一動物種類，不得使用發(fā)生疫病和變質(zhì)的動物血液。

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2014-11-21）

劉釗（1989-），男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail:491486510@qq.com

曾智勇（1978-），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動物傳染病病原分子生物學(xué)研究。