酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)與抗結(jié)核抗體平行檢測(cè)菌陰性結(jié)核比較

袁海波竭晶趙丹李丹

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，吉林長(zhǎng)春130021)

摘要〔〕目的比較結(jié)核感染T斑點(diǎn)試驗(yàn)(T SPOT.TB)和結(jié)核抗體試驗(yàn)在菌陰性結(jié)核診斷中的敏感性和特異性以及應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)疑患菌陰性結(jié)核的290例患者進(jìn)行前瞻性研究。收集患者臨床資料，采用T SPOT.TB和結(jié)核抗體試驗(yàn)進(jìn)行結(jié)核病的診斷，比較二者對(duì)結(jié)核病診斷的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(PPV)、陰性預(yù)測(cè)值(NPV)。結(jié)果290例疑患結(jié)核病患者最終確診結(jié)核119例。T SPOT.TB試驗(yàn)在敏感性、特異性、NPV、PPV等方面顯著優(yōu)于抗結(jié)核抗體試驗(yàn)(P<0.05)。結(jié)論T SOPT.TB較結(jié)核抗體有更高的靈敏性和特異性，更適于作為結(jié)核病的篩檢試驗(yàn)。

關(guān)鍵詞〔〕酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)；抗結(jié)核抗體試驗(yàn)；結(jié)核；診斷

中圖分類號(hào)〔〕R446.61〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(81300062)

通訊作者：李丹(1978-)，女，副教授，主要從事呼吸系統(tǒng)疾病研究。

第一作者：袁海波(1976-)，女，主治醫(yī)師，主要從事睡眠呼吸疾病方面的研究。

快速診斷和治療是控制結(jié)核病的關(guān)鍵。結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是在胸水、痰或其他臨床標(biāo)本中找到結(jié)核分枝桿菌。但由于抗酸染色的敏感性和特異性差、結(jié)核菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT)采用的結(jié)核分枝桿菌特異性抗原為早期分泌原靶蛋白6(ESAT-6)或培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP)-10，其編碼基因RDI為卡介苗(BCG)和絕大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌所缺失，避免了結(jié)核菌素試驗(yàn)(PPD)出現(xiàn)的交叉反應(yīng)，這種方法無(wú)論在敏感性還是特異性發(fā)面均得到了極大的認(rèn)可〔2〕。本研究比較ELISPOT與抗結(jié)核抗體試驗(yàn)對(duì)菌陰肺結(jié)核的診斷價(jià)值。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象2011年7月至2012年8月吉林大學(xué)第一醫(yī)院呼吸科疑診或待排除結(jié)核患者290例，年齡55～76〔平均(62.78)〕歲。所有患者均有反復(fù)咳嗽、咳痰伴發(fā)熱等臨床癥狀，有肺部感染的影像學(xué)表現(xiàn)，3次痰涂片未找到抗酸桿菌且二次痰培養(yǎng)均陰性。在其他詳盡檢查基礎(chǔ)上同時(shí)進(jìn)行酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)與抗結(jié)核抗體試驗(yàn)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果綜合判斷分析，對(duì)疑為菌陰患者給予實(shí)驗(yàn)性抗結(jié)核治療。根據(jù)最終治療和隨訪結(jié)果，進(jìn)行最終確診。診斷標(biāo)準(zhǔn)： (1)典型肺結(jié)核臨床癥狀和胸部X線表現(xiàn)；(2)抗結(jié)核治療有效；(3)臨床可排除其他非結(jié)核性肺疾??；(4)PPD強(qiáng)陽(yáng)性，血清抗結(jié)核抗體陽(yáng)性；(5)肺外組織病理證實(shí)結(jié)核病變；(6)BALF檢出抗酸分枝桿菌；(7)支氣管或肺組織病理證實(shí)結(jié)核病變；符合(1)～(5)的三項(xiàng)或(6)、(7)任意一項(xiàng)即可確診。

1.2方法采集疑為菌陰肺結(jié)核的290例患者既往結(jié)合病史和結(jié)核病接觸史的資料；進(jìn)行肺部CT檢查、PPD實(shí)驗(yàn)、抗結(jié)核抗體實(shí)驗(yàn)、痰涂片、痰培養(yǎng)等檢查。結(jié)核感染T斑點(diǎn)試驗(yàn)(T SPOT.TB)，使用肝素抗凝管采集受檢者靜脈血6 ml，加入Ficoll 淋巴細(xì)胞分離液后離心分離單核淋巴細(xì)胞，制備的淋巴細(xì)胞經(jīng)過計(jì)數(shù)后使用T SPOT.TB診斷試劑盒(試劑盒來自英國(guó)Oxford Immunotec Limited公司)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法與結(jié)果判讀嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件行χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1一般情況依據(jù)分組標(biāo)準(zhǔn)，綜合患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查及隨訪結(jié)果最終診斷肺結(jié)核患者119例，其中經(jīng)病理學(xué)證實(shí)伴有其他部位結(jié)核感染者5例，無(wú)細(xì)菌學(xué)或結(jié)核分枝桿菌感染證據(jù)但最終通過診斷性抗結(jié)核治療痊愈的患者114例。最終診斷為非結(jié)核呼吸道疾病171例，其中有其他病理學(xué)診斷證據(jù)者15例；無(wú)其他細(xì)菌學(xué)或病理學(xué)證據(jù)，但通過抗結(jié)核治療以外的其他方法獲得痊愈患者156例，其中慢性支氣管擴(kuò)張37例，間質(zhì)性肺炎4例，慢性阻塞性肺疾病4例，肺炎111例。

2.2T SPOT TB試驗(yàn)與最終診斷結(jié)果的比較最終診斷為結(jié)核的119例患者T SPOT TB試驗(yàn)的靈敏度為93.28%(111/119)，特異度為83.04%(142/171)，假陽(yáng)性率為20.71%(29/140)，假陰性率為5.33%(8/150)。

2.3抗結(jié)核抗體試驗(yàn)與最終診斷結(jié)果的比較血清結(jié)核抗體試驗(yàn)的靈敏度為23.53%(28/119)，特異度為91.2%(151/171)，假陽(yáng)性率為34.89%(15/43)，假陰性率為36.84%(91/247)。

2.4評(píng)價(jià)二種檢測(cè)方法在結(jié)核病中的診斷價(jià)值T SPOT TB試驗(yàn)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為79.28%(111/140),陰性預(yù)測(cè)值為94.67%(142/150)；血清結(jié)核抗體試驗(yàn)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為65.12%(15/43),陰性預(yù)測(cè)值為63.16%(156/247)。T SPOT TB試驗(yàn)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值與抗結(jié)核抗體檢測(cè)方法比較差異顯著(P<0.05)。

3討論

許多結(jié)核病患者沒有特異的臨床表現(xiàn)和影像學(xué)特征，因此，早期的實(shí)驗(yàn)室診斷和早期治療是改善結(jié)核病患者預(yù)后的關(guān)鍵，也是控制結(jié)核病傳播的重要環(huán)節(jié)。細(xì)菌學(xué)檢查是診斷結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于該技術(shù)的敏感性限制，臨床患者中細(xì)菌學(xué)陽(yáng)性不超過40%〔2〕，難以滿足結(jié)核病臨床診斷的要求。目前臨床上應(yīng)用比較廣泛的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有結(jié)核IgG抗體血清檢測(cè)、PPD試驗(yàn)、ELISHOT。由于PPD試驗(yàn)對(duì)曾經(jīng)感染過結(jié)核現(xiàn)已痊愈的人群和接種過BCG的人群仍有陽(yáng)性表現(xiàn)，中國(guó)有近一半的人口曾感染過結(jié)核，故可導(dǎo)致大量人群PPD試驗(yàn)出現(xiàn)假陽(yáng)性〔3,4〕。因此，成年疑似結(jié)核病患者臨床上主要還是采用結(jié)核抗體檢測(cè)試驗(yàn)和ELISPOT。

本實(shí)驗(yàn)T SPOT TB假陽(yáng)性的出現(xiàn)、特異性及陽(yáng)性預(yù)測(cè)值相對(duì)較低，與其不能區(qū)分活動(dòng)性、陳舊性結(jié)核及結(jié)核潛伏感染相關(guān)〔5〕，本研究中的29例T SPOT TB假陽(yáng)性患者，其中有5例曾經(jīng)感染過結(jié)核，2例有結(jié)核病接觸史，考慮與此相關(guān)。

對(duì)痰菌陰性的肺結(jié)核患者研究發(fā)現(xiàn)〔5〕，這類患者運(yùn)用PPD試驗(yàn)以及血清結(jié)核抗體診斷其陽(yáng)性率較低，容易出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室檢查的漏診，其陽(yáng)性率低的主要原因與患者抗體抗原反應(yīng)相對(duì)延緩以及結(jié)核分枝桿菌的抗原具有較為廣泛的交叉反應(yīng)有關(guān)。而且免疫功能較弱或者服用免疫抑制劑的患者抗體含量的水平較低，容易出現(xiàn)漏診。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果同樣顯示結(jié)核抗體試驗(yàn)的靈敏度極低，分析其原因：(1)就診于我院患者平均年齡比較大，老年人免疫系統(tǒng)功能退化，免疫應(yīng)答能力下降；(2)免疫抑制劑廣泛使用，糖尿病、HIV等免疫抑制性疾病的人群數(shù)量不斷增長(zhǎng)。但是ELISPOT的靈敏度顯著高于結(jié)核抗體檢測(cè)試驗(yàn)，表明對(duì)于自身免疫功能退化的中老年人和合并一些自身免疫系統(tǒng)疾病的結(jié)核病患者，ELISPOT的靈敏度明顯優(yōu)于血清結(jié)核抗體實(shí)驗(yàn)。

綜上所述，ELISPOT的陰性預(yù)測(cè)值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均顯著高于結(jié)核抗體檢測(cè)試驗(yàn)，與現(xiàn)有的臨床上常用的診斷方法比較具有明顯的優(yōu)勢(shì)，在結(jié)核病的診斷中有重要的價(jià)值。

4參考文獻(xiàn)

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4Kim HJ,Yoon HI,Park KU,etal.The impact of previous tuberculosis history on T-SPOT.TB(R) interferon-gamma release assay results〔J〕.Int J Tuberc Lung Dis,2011;15(4):510-6.

〔2014-10-11修回〕

(編輯袁左鳴)