丁勝，趙湜，王中京，張旭艷

(武漢市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，武漢 430014)

·藥物與臨床·

硫辛酸對糖尿病下肢周圍動脈病患者內(nèi)皮微粒的影響*

丁勝，趙湜，王中京，張旭艷

(武漢市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，武漢 430014)

目的 評價硫辛酸注射液對糖尿病下肢周圍動脈病(PAD)患者循環(huán)血中內(nèi)皮微粒(EMP)的影響。方法 48例2型糖尿病下肢周圍動脈病患者隨機(jī)分為兩組，對照組24例僅給予內(nèi)科綜合治療，治療組24例在內(nèi)科綜合治療基礎(chǔ)上，給予硫辛酸注射液600 mg加入0.9%氯化鈉注射液250 mL，靜脈滴注，每天1次，療程均為3周。兩組患者在治療前后均采集靜脈血，采用流式細(xì)胞術(shù)測定患者血漿EMP水平，并記錄踝動脈-肱動脈血壓比值(ABI)。 結(jié)果 治療組治療后EMP為(1 032.4±117.2)個·μL-1，較治療前顯著降低(P<0.01)，明顯低于對照組治療后(1 179.8±120.1)個·μL-1(P<0.01)；治療組治療后ABI指數(shù)為(0.68±0.10)，較治療前明顯增加(P<0.01)，且明顯高于對照組治療后(0.58±0.11)(P<0.01)。 結(jié)論 硫辛酸注射液可明顯降低糖尿病下肢PAD患者循環(huán)血中EMP水平，對糖尿病下肢PAD有顯著療效。

硫辛酸；內(nèi)皮微粒；糖尿病；周圍動脈病

近年來，我國糖尿病患病率持續(xù)攀升，糖尿病截肢患者中因并發(fā)糖尿病足截肢者高達(dá)28.2%[1]。2型糖尿病下肢周圍動脈病(peripheral artery disease，PAD)患者中，血管內(nèi)皮功能障礙是其病理生理基礎(chǔ)。內(nèi)皮細(xì)胞在激活或凋亡過程中能釋放內(nèi)皮微粒(endothelial microparticles，EMP)[2]。研究提示EMP在糖尿病尤其是糖尿病并發(fā)PAD患者血漿中數(shù)量增多，它參與內(nèi)皮損傷、血管炎癥，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙，可直接特異的反映內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)，同時對血管網(wǎng)的形成起負(fù)面作用[3-4]。氧化應(yīng)激是2型糖尿病下肢PAD患者內(nèi)皮損傷的主要機(jī)制之一，高血糖可通過多種途徑介導(dǎo)產(chǎn)生過多的自由基，導(dǎo)致氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)失衡[5]。硫辛酸是一種強(qiáng)效天然抗氧劑，可清除活性氧和自由基，糾正高血糖引起的內(nèi)皮衍生物超極化因子和一氧化氮異常，調(diào)節(jié)一氧化氮介導(dǎo)內(nèi)皮依賴性血管舒張[6]。已有研究顯示硫辛酸對糖尿病足具有一定的療效[7]，但未見硫辛酸用于治療PAD對EMP的影響的研究報道。2013年6月—2014年6月筆者應(yīng)用硫辛酸治療2型糖尿病下肢PAD，觀察其療效及降低血漿EMP水平的情況。報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 48例武漢市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科住院患者，按世界衛(wèi)生組織(WHO)1999年標(biāo)準(zhǔn)診斷為2型糖尿病，入選患者均符合糖尿病下肢PAD診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]：踝動脈-肱動脈血壓比值(ankle-brachial index，ABI)≤0.9；所有入選對象均排除糖尿病足并發(fā)活動性潰瘍或濕性壞疽、嚴(yán)重感染、高血壓病、冠心病、心肌病及心肌炎、惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全、妊娠、結(jié)締組織疾病及自身免疫性疾病。48例患者中男27例，女21例，年齡38～78歲，平均57.5歲，糖尿病史5～20年，平均12.5年。患者按入院先后隨機(jī)分為治療組和對照組。兩組患者性別、年齡、糖尿病病程、HbA1c、ABI 等方面比較均差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

1.2 治療方法 患者均給予內(nèi)科綜合治療，包括飲食控制、口服降糖藥或胰島素控制血糖、抗凝(口服阿司匹林腸溶片0.1 g，qd)、調(diào)脂(口服阿托伐他汀鈣片10 mg，qd)、改善循環(huán)(丹參注射液400 mg加入0.9%氯化鈉注射液250 mL，靜脈滴注，qd)。治療組在內(nèi)科綜合治療基礎(chǔ)上給予硫辛酸注射液[商品名：奧力寶，衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司，藥品注冊證號：H20110104]600 mg加入0.9%氯化鈉注射液250 mL，靜脈滴注，qd，共3周。

1.3 評估項目

1.3.1 ABI測定 治療前后測定ABI，于標(biāo)準(zhǔn)仰臥位采用5 MHz多普勒超聲探頭測量上臂和踝部(脛后動脈或足背動脈)的收縮壓，分別使用上臂和踝部的收縮壓的最高值，ABI的計算為足背動脈或脛后動脈收縮壓的最高值與兩上臂收縮壓的最高值之比。

1.3.2 血漿EMP測定 治療前后檢測血漿EMP計數(shù)。清晨空腹抽取靜脈血3 mL置于真空枸櫞酸鹽抗凝試管中，采血后標(biāo)本立即處理。以150×g離心10 min獲血小板豐富血漿，繼之以1 000×g離心2 min獲血小板貧瘠血漿。取血小板貧瘠血漿50 μL，加入特異性熒光標(biāo)記抗體(anti-CD144-PE，購自eBioscience，Inc.)0.5 μg或同等數(shù)量的同型對照抗體(流式專用抗體購自法國Beckman Coulter Immunotech公司)。在室溫下孵育30 min后加磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)1 mL即上流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。以1 μm 微球設(shè)門(購自Sigma-aldrich公司)，EMP定義為<1.0 μm CD144陽性的微粒。每支檢測的樣本流式管中加入已知數(shù)量的絕對計數(shù)3 μm微球(購自Sigma-aldrich公司)。當(dāng)收集500 000個絕對計數(shù)微球后停止計數(shù)，依據(jù)絕對計數(shù)微球的濃度計算出EMP濃度。

2 結(jié)果

兩組患者治療前EMP比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.401，P>0.05)，治療組治療后EMP水平顯著降低(t=6.333，P<0.01)，對照組治療后EMP水平無顯著降低(t=1.730，P>0.05)；治療組治療后EMP水平明顯低于對照組(t=4.303，P<0.01)。治療組治療前ABI在0.23～0.81，治療后ABI明顯升高(t=5.281，P<0.01)；對照組治療前ABI在0.25～0.80，治療后ABI無明顯升高(t=1.506，P>0.05)，治療組治療后ABI明顯高于對照組(t=3.300，P<0.01)。見表2。

3 討論

1990年，HAMILTON等[9]第一次檢測出一種直徑為<1 μm的微粒并命名為EMP。研究證實冠心病、高血壓病、糖尿病等一系列疾病中EMP升高[4，10-11]。EMP與2型糖尿病下肢PAD的發(fā)生密切相關(guān)，增多的EMP能獨立預(yù)測內(nèi)皮依賴性血管舒張功能的受損情況[2，4]；它能與白細(xì)胞相互作用促使靜脈血栓的形成和炎性反應(yīng)而導(dǎo)致血管損傷[12]；它還可通過減少毛細(xì)血管的長度、減少血管網(wǎng)的數(shù)量、減少分支點影響血管網(wǎng)形成[13]。本研究中治療組治療后EMP水平顯著降低，治療后EMP水平明顯低于對照組，同時ABI的改善也與EMP水平改善相匹配；提示硫辛酸注射液聯(lián)合內(nèi)科常規(guī)綜合治療能有效降低糖尿病并發(fā)下肢血管病變者循環(huán)血中的EMP水平，可能通過減輕EMP對于PAD患者在血管網(wǎng)形成、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮損傷等方面的負(fù)面效應(yīng)，帶來內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙改善。

表1 兩組患者基線資料比較

表2 兩組治療前后血漿 EMP 水平與ABI比較

Tab.2 Comparison of EMP and ABI values between two groups of patients before and after treatment

與同組治療前比較，*1P<0.01；與對照組治療后比較，*2P<0.01

Compared with the same group before treatment,*1P<0.01；Compared with control group after treatment,*2P<0.01

我國糖尿病患者治療達(dá)標(biāo)率僅25%[14]。長期持續(xù)高血糖作用導(dǎo)致超氧自由基(ROS)持續(xù)生成，過多的ROS參與氧化應(yīng)激，并導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙及神經(jīng)微循環(huán)障礙[15-16]。氧自由基能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，激活 NF-κB 核轉(zhuǎn)錄因子，加強(qiáng)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用而促進(jìn)血管內(nèi)皮功能損傷的發(fā)生和發(fā)展[17]。硫辛酸注射液作為抗氧化應(yīng)激的代表性藥物可以有效阻斷這一不良過程，改善微循環(huán)、保護(hù)血管內(nèi)皮功能。此外，研究顯示氧化應(yīng)激可以使細(xì)胞對胰島素產(chǎn)生抵抗，硫辛酸注射液則可以增加胰島素刺激的葡萄糖代謝能力，提高胰島素的敏感性，有益于控制血糖，進(jìn)一步減少ROS生成[18]。

ABI指數(shù)用于篩查糖尿病并發(fā)PAD具有良好的診斷價值[19]。本研究觀察到治療組治療后ABI指數(shù)較治療前明顯增加，且明顯高于對照組。其原因考慮有硫辛酸提高胰島素敏感性，輔助控制血糖帶來的獲益；更重要的是硫辛酸作用于線粒體，阻斷氧化應(yīng)激通路，保護(hù)血管內(nèi)皮功能。硫辛酸注射液一直被用作糖尿病周圍神經(jīng)病變的經(jīng)典藥物，本研究提示將其應(yīng)用于糖尿病下肢PAD患者尤其是ABI值在約0.5患者有較大的治療潛力。對照組采用內(nèi)科綜合治療后ABI指數(shù)僅略有升高，原因可能是常規(guī)內(nèi)科綜合治療2型糖尿病下肢PAD患者獲得顯效過程緩慢，適當(dāng)延長治療時間，仍可能觀察到ABI指數(shù)的顯著升高。

硫辛酸注射液降低2型糖尿病下肢PAD患者EMP水平，且治療糖尿病下肢PAD患者的近期療效肯定。但本研究樣本量有限，隨訪觀察時間較短，后續(xù)更大樣本的多中心、分層、分組研究可望進(jìn)一步明確硫辛酸注射液應(yīng)用于糖尿病下肢PAD的療效與可行性，并觀察分析不同程度PAD患者的循環(huán)血中的EMP水平變化情況，獲得更為充分的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

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DOI 10.3870/yydb.2015.06.017

Effect of Lipoic Acid Treatment on Endothelial Microparticles in Patients with Diabetic Peripheral Artery Disease in Lower Limbs

DING Sheng, ZHAO Shi, WANG Zhongjing， ZHANG Xuyan

(DepartmentofEndocrinology,WuhanCentralHospital,Wuhan430014China)

Objective To evaluate the effect of lipoic acid on endothelial microparticles (EMP) in diabetic patients with peripheral artery disease (PAD) of the lower limbs. Methods Forty eight diabetic patients with PAD of the lower limbs were randomly divided into two groups: the therapeutic group and control group (each group has 24 cases).Patients of control group only

internal comprehensive medicine therapies for 3 weeks.Patients of therapeutic group were treated with both lipoic acid (600 mg lipoic acid injection in normal saline solution for intravenous drip, once daily for 3 weeks) and internal comprehensive medicine therapies at the same time.The levels of EMP in venous blood and Ankle-brachial index (ABI) were estimated before and after treatment by flow cytometry. Results Compared to the control group after treatment [(1 179.8±120.1) per μL], EMP value showed a significant reduction in therapeutic group [(1 032.4±117.2) per μL] (P<0.01).The levels of ABI of therapeutic group (0.68±0.10) was increased obviously as compared that before lipoic acid treatment (P<0.01).Patients treated with lipoic acid showed the higher levels of ABI than the control group after treatment (0.58±0.11) (P<0.01). Conclusion Lipoic acid injection significantly decreased the level of EMP in diabetic patients with PAD of lower limbs.Lipoic acid might be an effective drug for diabetic patients with PAD.

Lipoic acid； Endothelial microparticles； Diabetes mellitus； Peripheral artery disease

2014-08-10

2014-11-19

*武漢市衛(wèi)生局臨床醫(yī)學(xué)科研基金資助項目(WX12C24)

丁勝(1979-)，男，湖北天門人，主治醫(yī)師，碩士，研究方向：內(nèi)分泌及代謝性疾病。電話：027-65699893，E-mail：doctordingsheng@163.com。

趙湜(1954-)，女，遼寧大連人，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：內(nèi)分泌及代謝性疾病。電話：027-82211474，E-mail：zhaoshiwuhan@126.com。

R977.15；R587.1

B

1004-0781(2015)06-0762-04