劉慧

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州市中醫(yī)院中藥房，湖州 313000)

止咳片的質(zhì)量控制

劉慧

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬湖州市中醫(yī)院中藥房，湖州 313000)

目的 制定止咳片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 對(duì)止咳片中苦杏仁進(jìn)行薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。色譜柱為C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-水(75：25)系統(tǒng)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為321 nm，流速1 mL·min-1。結(jié)果 薄層色譜鑒別中，供試品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性未見干擾。白花前胡甲素在61.98～619.84 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程Y=1.156 5X+13.452 7，r=0.999 8；白花前胡乙素在32.11～321.13 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程Y=1.438 6X-0.305 4，r=0.999 8。白花前胡甲素低、中、高加樣回收率分別為96.19%，98.87%，97.60%，RSD分別為2.13%，1.52%，0.73%(n=3)；白花前胡乙素低、中、高加樣回收率分別為96.97%，99.60%，96.74%，RSD分別為1.55%，2.28%，0.47%(n=3)。結(jié)論 該方法結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，能有效控制止咳片的質(zhì)量。

止咳片；白花前胡甲素；白花前胡乙素；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；色譜法，薄層；色譜法，高效液相

止咳片為百部、前胡、苦杏仁3味藥材組成的復(fù)方中藥制劑，具有潤肺定喘、祛痰止咳的功效。臨床上一般用于治療咳嗽、痰多、氣喘、小兒百日咳、急慢性氣管炎等[1]。該制劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》(第四冊(cè))，標(biāo)準(zhǔn)僅包括性狀、百部的化學(xué)鑒別項(xiàng)、前胡的薄層鑒別項(xiàng)與常規(guī)檢查項(xiàng)，缺少對(duì)苦杏仁的質(zhì)控項(xiàng)目并缺少含量測(cè)定項(xiàng)。因此，筆者采用薄層色譜(TLC)法對(duì)苦杏仁進(jìn)行鑒別，采用高效液相色譜法測(cè)定止咳片中的白花前胡甲素和白花前胡乙素兩種成分。結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，完善質(zhì)控指標(biāo)，對(duì)全面控制本品的質(zhì)量具有重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260系列高效液相色譜儀，包括四元泵(DEAB704165)，自動(dòng)進(jìn)樣器(DEAEC09523)、柱溫箱(DEACN12074)、DAD檢測(cè)器(DEAA302930)；色譜儀工作站采用Chemistation工作站；4020P超聲儀(JAC公司)；CPA225D天平(METTLER TOLEDO公司，感量：0.01 mg)。

1.2 試藥 白花前胡甲素對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111711-200602，含量測(cè)定用)；白花前胡乙素對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111904-201203，含量98.0%)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他均為分析純。止咳片(批號(hào)：1127262，1127263，1127264)均購自北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，取批號(hào)1127264止咳片進(jìn)行方法學(xué)實(shí)驗(yàn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別 取本品10片，除去糖衣，研細(xì)，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15：40：22：10)10 ℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，噴以含1%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品與對(duì)照品相對(duì)應(yīng)的色譜位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾，見圖1。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Agilent XDB C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(75：25)；流速1 mL·min-1；檢測(cè)波長321 nm；進(jìn)樣體積10 μL；理論板數(shù)以白花前胡甲素峰計(jì)不低于3 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取白花前胡甲素和白花前胡乙素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含白花前胡甲素30.99 μg、白花前胡乙素16.06 μg的混合溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 按處方量配制不含前胡的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備，即得。

2.2.5 系統(tǒng)適用性與專屬性實(shí)驗(yàn) 按上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果待測(cè)峰與鄰近峰分離度符合要求，陰性供試品溶液在白花前胡甲素和白花前胡乙素對(duì)照品出峰位置均無干擾見圖2。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2，5，10，15，20 μL，分別注入液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到白花前胡甲素回歸方程，Y=1.156 5X+13.452 7，r=0.999 8；白花前胡乙素回歸方程，Y=1.438 6X-0.305 4，r=0.999 8。結(jié)果表明白花前胡甲素進(jìn)樣量在61.98～619.84 ng 范圍內(nèi)，白花前胡乙素進(jìn)樣量在32.11～321.13 ng 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面積RSD分別為1.52%，1.39%，精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的平均含量分別為6.02，3.23 mg·g-1，RSD分別為1.89%，2.07%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，在0，4，8，12，24 h注入液相色譜儀，測(cè)定白花前胡甲素和白花前胡乙素峰面積，結(jié)果RSD分別為1.78%，1.81%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取樣品9份，每份0.25 g，精密稱定，每3份為一組，分別精密加入低、中、高3個(gè)梯度水平對(duì)照品(相當(dāng)于含量的50%，100%，150%)，按“2.2.3”項(xiàng)供試品溶液制備方法進(jìn)行制備并測(cè)定，結(jié)果見表1。從表1中可見，回收率符合要求。

2.2.11 樣品含量測(cè)定 用上述方法對(duì)收集的3批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 質(zhì)量控制指標(biāo)的選擇 百部、前胡、苦杏仁三者均具有化痰、降氣、止咳的療效。君藥百部尚未尋找到合適的薄層、液相質(zhì)量控制方法，故保留原標(biāo)準(zhǔn)中的化學(xué)鑒別方法對(duì)百部進(jìn)行質(zhì)量控制。原標(biāo)準(zhǔn)中缺少苦杏仁的質(zhì)量控制項(xiàng)目，故選擇薄層鑒別方法對(duì)苦杏仁進(jìn)行質(zhì)量控制。原標(biāo)準(zhǔn)中已有前胡的薄層鑒別方法，故另選擇前胡中的指標(biāo)性成分白花前胡甲素與白花前胡乙素進(jìn)行定量測(cè)定，控制產(chǎn)品質(zhì)量。

3.2 苦杏仁的鑒別 苦杏仁的薄層鑒別方法在許多研究文獻(xiàn)中需要脫脂步驟[2-4]。經(jīng)考察，本品供試品溶液的制備過程是否采用脫脂步驟對(duì)斑點(diǎn)的影響不大，原因可能為苦杏仁為提取后進(jìn)行制劑，直接采用甲醇超聲已能對(duì)樣品中的苦杏仁苷滲透、提取完全，故采用甲醇超聲提取制備供試品，操作簡(jiǎn)便，縮短操作時(shí)間。方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)清晰，分離度好。

表2 3批止咳片中白花前胡甲素和白花前胡乙素含量

3.3 前胡的含量測(cè)定 2010年版《中華人民共和國藥典》等[5-6]采用三氯甲烷提取，用甲醇轉(zhuǎn)溶的方法制備供試品，方法稍嫌繁瑣。筆者在比較提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間的基礎(chǔ)上，選擇本研究確定的供試品溶液制備方法，優(yōu)化提取溶劑，增大提取溶劑的體積比，取消蒸干、轉(zhuǎn)溶等步驟，在簡(jiǎn)化操作的基礎(chǔ)上又保證提取完全。

實(shí)驗(yàn)另比較甲醇-水系統(tǒng)[5-6]、乙腈-水梯度系統(tǒng)[7]和甲醇-0.5%磷酸系統(tǒng)，認(rèn)為甲醇-水系統(tǒng)已完全能滿足分析要求，操作簡(jiǎn)單，故選擇甲醇-水系統(tǒng)。

本方法完善了止咳片的質(zhì)量控制項(xiàng)目，為更全面地控制本品的質(zhì)量提供了可靠、有效的方法保證。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊(cè)[S].WS3-B-0776-90.

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DOI 10.3870/yydb.2015.06.030

2014-02-28

2014-05-20

劉慧(1986 -)，女，浙江湖州人，主管中藥師，在讀碩士，研究方向：臨床中藥學(xué)。電話：(0)13757281873，E-mail：109353194@qq.com。

R286；R927.2

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1004-0781(2015)06-0811-03