黃體酮熱熔膠透皮貼劑皮膚用藥安全性研究

陶 虹，耿文寧，陳雯雯，高曉黎

（1．新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 烏魯木齊 830004； 2．新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830002）

黃體酮熱熔膠透皮貼劑皮膚用藥安全性研究

陶 虹1，2，耿文寧1，陳雯雯2，高曉黎2

（1．新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 烏魯木齊 830004； 2．新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830002）

目的考察黃體酮熱熔壓敏膠透皮貼劑皮膚用藥的安全性。方法通過對(duì)豚鼠的皮膚急性毒性試驗(yàn)、皮膚過敏性試驗(yàn)及家兔的皮膚刺激性試驗(yàn)，觀察黃體酮熱熔膠透皮貼劑對(duì)動(dòng)物經(jīng)皮膚用藥的急性毒性、刺激性和敏感性。結(jié)果黃體酮熱熔膠透皮貼劑對(duì)豚鼠的完整皮膚和破損皮膚均未引起急性毒性反應(yīng)，對(duì)家兔皮膚未產(chǎn)生刺激作用，對(duì)豚鼠皮膚未產(chǎn)生致敏作用。結(jié)論黃體酮熱熔膠透皮貼劑皮膚用藥安全、無毒。

黃體酮；熱熔膠透皮貼劑；急性毒性；皮膚刺激性；皮膚過敏性

黃體酮又名孕酮，為天然甾體激素，臨床常用于口服避孕和各種婦科疾病，如調(diào)整子宮內(nèi)膜增生[1]、功能性子宮出血、閉經(jīng)、絕經(jīng)期綜合征、黃體功能不全和經(jīng)前綜合征等，還可用于激素替代療法。其臨床常用的劑型為注射液和口服制劑，注射劑為油溶劑，常造成注射部位的結(jié)節(jié)和疼痛，口服制劑則會(huì)發(fā)生肝首過效應(yīng)和胃腸吸收。目前，已對(duì)黃體酮的緩釋栓[2]、膜劑、凝膠劑[3]、陰道環(huán)[4]和經(jīng)皮給藥系統(tǒng)[5-6]等劑型進(jìn)行了研究。貼劑作為經(jīng)皮給藥制劑，具有使用方便、避免肝首過效應(yīng)、減少胃腸道不良反應(yīng)等特點(diǎn)。熱熔壓敏膠是一種近年來發(fā)展迅速的壓敏膠材料，用于制備多種藥物貼劑[7-8]，與脂溶性藥物相容性好。因此，筆者制備了黃體酮熱熔壓敏膠透皮貼劑（簡(jiǎn)稱黃體酮熱熔膠貼劑），并考察其動(dòng)物皮膚用藥的安全性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 藥品、試劑與動(dòng)物

黃體酮熱熔膠貼劑（自制，批號(hào)為20140910）；空白熱熔膠貼劑（自制，批號(hào)為K20140910）；2-巰基苯并噻唑（上海將來實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)為JL140419016）。健康家兔12只，雌雄各半，體重（2．5±0．5）kg；健康豚鼠66只，雌雄各半，體重（250±50）g。均購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，許可證號(hào)SCXK(新)2011-0004。

1．2 方法

1．2．1 貼劑制備

精密稱取適量SIS熱塑性彈性體、增塑劑、增粘劑、抗氧劑，置三頸瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至160～165℃，以300 r／min的轉(zhuǎn)速攪拌30 min，觀察體系各成分完全熔融并混合均勻、無塊狀物質(zhì)后停止攪拌，調(diào)整溫度為 110～120℃，保溫 30 min后趁熱出料，冷卻后即得熱熔膠基質(zhì)。制備貼劑時(shí)，將上述基質(zhì)保溫30 min后趁熱出料，在離型紙上涂布成均勻薄層，冷卻后覆蓋無紡布，剪裁成固定尺寸，即為黃體酮熱熔膠貼劑。

1．2．2 安全性試驗(yàn)

皮膚急性毒性試驗(yàn)：取健康豚鼠36只，雌雄各半，分為9組，各4只。給藥前24 h，用剃毛器將豚鼠背部脊柱兩側(cè)毛除凈，面積約5 cm×5 cm，給藥前檢查剃毛部位皮膚，受傷的皮膚不能做完整皮膚的毒性試驗(yàn)。破損皮膚的制作是用砂紙?jiān)谔昝つw處來回擦拭，以皮膚輕微滲血為度[9]。給藥時(shí)將貼劑貼敷于剃毛部位，用無菌紗布纏繞后用膠布固定，每只豚鼠分籠飼養(yǎng)。給藥24 h后，揭去貼劑，并于揭除后1，24，48，72 h至第7天，每天觀察并記錄動(dòng)物的體重、皮毛、眼睛、黏膜、呼吸、飲食、大小便、自主活動(dòng)和行為改變等指標(biāo)，如出現(xiàn)毒性反應(yīng)，需觀察其出現(xiàn)和消失的情況。若有動(dòng)物死亡，及時(shí)行尸檢和肉眼觀察，當(dāng)有肉眼可見病變時(shí)，行病理組織學(xué)檢查。

單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn):取健康家兔8只，隨機(jī)分為完整皮膚組和破損皮膚組，各4只。采用同體左右自身對(duì)比法。試驗(yàn)前24 h將家兔背部脊柱兩側(cè)剃毛，面積約100 cm2。破損皮膚組在左側(cè)剃毛皮膚處用砂紙來回擦拭，以皮膚輕微滲血為度。給藥時(shí)，將3 cm×4 cm藥物貼劑貼敷在兩組左側(cè)剃毛部位，將基質(zhì)貼劑貼敷在右側(cè)作為陰性對(duì)照區(qū)，在保定架保定，保持6 h后揭去貼片，并于揭除后 1，24，48，72 h時(shí)肉眼觀察給藥部位有無紅斑、水腫等情況。給藥前檢查去毛皮膚是否有機(jī)械損傷，有損傷者不宜行完整皮膚的刺激試驗(yàn)。結(jié)果按表1和表2評(píng)價(jià)。

多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)：取健康家兔4只，試驗(yàn)前24 h將家兔背部脊柱兩側(cè)剃毛，面積約100 cm2。給藥時(shí)，將藥物貼劑貼敷在左側(cè)剃毛部位，將基質(zhì)貼劑貼敷在右側(cè)作為陰性對(duì)照區(qū)。在保定架保定，保持6 h后揭除貼劑，并于每次揭除后1 h和再次貼敷前肉眼觀察并記錄貼敷部位有無紅斑和水腫，貼敷部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及發(fā)生時(shí)間和消退時(shí)間，并對(duì)紅斑和水腫進(jìn)行評(píng)分。連續(xù)貼敷1周，于末次貼敷后，在揭除貼片后1，24，48，72 h肉眼觀察并記錄貼敷部位有無紅斑和水腫等情況。貼敷前檢查剃毛部位的皮膚是否有機(jī)械損傷，有損傷者不用于試驗(yàn)。結(jié)果按表1和表2評(píng)價(jià)。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

皮膚過敏性試驗(yàn)：采用豚鼠 Buehler試驗(yàn)(BT)。取健康豚鼠30只，隨機(jī)分為 3組，各 10只。試藥組給予黃體酮熱熔膠貼劑；基質(zhì)組給予基質(zhì)貼劑；陽(yáng)性對(duì)照組給予2-巰基苯并噻唑溶液。于給藥前24 h將豚鼠背部?jī)蓚?cè)毛剃除，去毛區(qū)范圍每側(cè)約5 cm×5 cm。致敏接觸時(shí)，取2 cm×2 cm藥物貼劑貼敷于動(dòng)物左側(cè)脫毛區(qū)，用無菌紗布覆蓋并用膠布固定，每只動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，持續(xù)6 h，揭除貼片；空白對(duì)照組貼敷2 cm×2 cm基質(zhì)貼劑，陽(yáng)性對(duì)照組在左側(cè)剃毛部位約2 cm×2 cm面積涂抹0．3 mL 1%2-巰基苯并噻唑溶液，6 h后用溫水擦去殘留藥物。第7天和第14天，以同樣方法各重復(fù)1次。激發(fā)接觸時(shí)，于末次給藥致敏后14 d，將2 cm×2 cm藥物貼劑和基質(zhì)貼劑分別貼敷于試藥組和基質(zhì)組的豚鼠背部右側(cè)剃毛區(qū)，6 h后揭除貼劑，即刻觀察，于1，24，48，72 h再次觀察豚鼠皮膚過敏反應(yīng)情況；陽(yáng)性藥對(duì)照組在剃毛部位約2 cm×2 cm面積涂抹0．3 mL 0．1%2-巰基苯并噻唑溶液，6 h后用溫水擦去殘留藥物。結(jié)果按表3和表4進(jìn)行評(píng)分并作致敏強(qiáng)度評(píng)價(jià)。同時(shí)，注意觀察豚鼠是否有哮喘、站立不穩(wěn)等全身性過敏反應(yīng)。反應(yīng)平均分值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）／動(dòng)物數(shù)，致敏反應(yīng)發(fā)生率=有過敏反應(yīng)動(dòng)物數(shù)／動(dòng)物總數(shù)×100%。

表3 皮膚致敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表4 皮膚致敏強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2．1 皮膚急性毒性試驗(yàn)

結(jié)果見表5。揭除貼劑后1，24，48，72 h至第7天，與正常組比較，其余各組豚鼠的皮毛、眼睛、黏膜、呼吸、飲食、大小便、自主活動(dòng)、行為等指標(biāo)均未發(fā)現(xiàn)明顯變化(P＞0．05)，未見中毒、死亡情況，各組間豚鼠凈增重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)?？梢?，高、中、低劑量組的黃體酮熱熔膠貼劑經(jīng)豚鼠皮膚給藥均未發(fā)現(xiàn)皮膚急性毒性反應(yīng)。

表5 黃體酮熱熔膠貼劑皮膚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果（，n=4）

表5 黃體酮熱熔膠貼劑皮膚急性毒性試驗(yàn)結(jié)果（，n=4）

劑量(mg)體重(g)組別正常組完整皮 基質(zhì)膚組 低劑量中劑量高劑量破損皮 基質(zhì)膚組 低劑量中劑量高劑量0 0．5 1．0 2．0 0 0．5 1．0 2．0給藥前248．85±8．06 254．40±8．51 255．94±14．19 247．98±10．65 256．47±5．33 244．06±9．70 245．61±9．44 252．56±12．49 248．38±8．72給藥后7 d 271．87±9．35 276．23±9．02 277．66±13．50 271．27±9．51 276．94±5．76 265．99±10．78 268．37±8．07 274．15±13．33 271．95±10．82凈增23．02±1．49 21．83±1．09 21．72±2．47 23．30±2．16 20．47±0．46 21．99±2．02 22．76±1．37 21．59±1．30 23．57±2．76

2．2 皮膚刺激性試驗(yàn)

黃體酮熱熔膠貼劑對(duì)家兔皮膚單次給藥后，1，24，48，72 h至第7天觀察，完整皮膚組家兔皮膚均未出現(xiàn)水腫和紅斑現(xiàn)象，貼敷部位未發(fā)現(xiàn)色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況，表現(xiàn)為無刺激；破損皮膚組個(gè)別動(dòng)物有勉強(qiáng)可見的紅斑，很快自行消失，皮膚刺激程度平均反應(yīng)值為0．25，無刺激性。多次給藥組最后一次給藥后觀察1，24，48，72 h至第7天，個(gè)別動(dòng)物偶有勉強(qiáng)可見的紅斑，很快自行消失；貼敷部位未發(fā)現(xiàn)色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄情況，皮膚刺激程度平均反應(yīng)值為0．25，無刺激性。結(jié)果見表6。

表6 家兔多次給藥皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分結(jié)果（n=4）

2．3 皮膚過敏性試驗(yàn)

基質(zhì)組未見紅斑、水腫等皮膚變態(tài)反應(yīng)情況；試藥組極個(gè)別豚鼠出現(xiàn)勉強(qiáng)可見的水腫和紅斑，很快自行消失；陽(yáng)性對(duì)照組出現(xiàn)明顯的紅斑、水腫等皮膚變態(tài)反應(yīng)情況，評(píng)分值高，致敏率達(dá)100%。3組豚鼠均未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)等嚴(yán)重的全身變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果表明，黃體酮熱熔膠透皮貼劑及基質(zhì)對(duì)豚鼠皮膚基本無致敏反應(yīng)。結(jié)果見表7。

3 討論

姚 等[10]對(duì)以熱熔壓敏膠和橡膠為基質(zhì)的兩種關(guān)節(jié)止痛膏的藥物體外透皮特性、藥效以及皮膚刺激性進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)前者有更好的藥物體外透皮特性和更強(qiáng)的鎮(zhèn)痛抗炎效果，對(duì)皮膚的刺激性也小。黃體酮熱熔膠透皮貼劑使用方便，以無紡布為背襯材料，透氣性好；以熱熔壓敏膠為藥物骨架，緩慢釋放藥物，作用持久，是除肌肉注射和口服外補(bǔ)充孕激素的另一條途徑。

皮膚急性毒性、皮膚刺激性及皮膚過敏性試驗(yàn)是藥物臨床前安全性評(píng)價(jià)的重要組成部分。本試驗(yàn)結(jié)果表明，黃體酮熱熔膠透皮貼劑用于豚鼠完整皮膚和破損皮膚均無急性毒性，外用于家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性，不引起豚鼠完整皮膚的致敏反應(yīng)。因此，在本試驗(yàn)中所用的劑量范圍內(nèi)黃體酮熱熔膠透皮貼劑對(duì)動(dòng)物皮膚無急性毒性、無刺激性、無致敏性，使用安全。

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Enepidermic Reliability of Progesterone Hot-Melt Adhesive Transdermal Patch

Tao Hong1,2,Geng Wenning1,Chen Wenwen2,Gao Xiaoli2
(1．Xinjiang Uygur Autonomous Region Institute for Food and Drug Control,Wulumuqi,Xinjiang,China 830004; 2．Department of Pharmacy,Xinjiang Medical University,Wulumuqi,Xinjiang,China 830002)

Objective To investigate the safety of progesterone hot-melt pressure sensitive adhesive transdermal patch through the skin．Methods The aim of this research was to survey acute toxicity,irritation and hypersensitivity of progesterone hot-melt adhesive transdermal patch on animal skin through skin acute toxicity,skin hypersensitivity in healthy guinea pigs,and skin irritation test in healthy rabbits．Results The result showed that the progesterone hot-melt adhesive transdermal patch had no acute toxicity on integrated and worn skin of guinea pigs,it had no irritation on integrated and worn skin of rabbits,and it had no hypersensitivity on skin of guinea pigs．Conclusion The experiment indicated that it is safe to administrate the progesterone hot-melt adhesive transdermal patch via skin．

progesterone;hot-melt adhesive transdermal patch;acute toxicity;skin irritation;skin hypersensitivity

R965.3；R984

A

1006-4931(2015)21-0076-03

陶虹（1975-），女，漢族，重慶人，在讀博士研究生，副主任藥師，主要從事新藥研究工作，（電子信箱）taohong950＠163．com；高曉黎，女，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樗巹W(xué)，本文通訊作者，（電子信箱）xli_g＠126．com。

2015-01-27)