4種殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌的毒力測定

楊敬輝　陳宏州　肖婷　吳祥　吉沐祥　莊義慶

摘要：為探明不同殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌的室內(nèi)抑菌活性，采用菌絲生長速率法測定4種殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，氟硅唑、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、[2]氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、吡唑醚菌酯、多菌靈、腈菌唑、啶酰菌胺、多抗霉素、嘧菌酯對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的EC50值分別為0258 6、0338 0、0376 4、057 6、0585 2、069 7、76 8、92 3、232 7、249 4、77 3、3065 7、70343 2、22459 7 μg/mL。葡萄炭疽病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性差異較大，其中供試葡萄炭疽病菌對(duì)氟硅唑最敏感。

關(guān)鍵詞：葡萄炭疽病菌；殺菌劑；菌絲生長速率法；EC50；抑菌活性；敏感性；毒力測定

中圖分類號(hào)： S436635文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A[HK]

文章編號(hào)：002-302（204）2-063-03[HS）][HT9SS]

[H4mm]

收稿日期：204-02-8

基金項(xiàng)目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號(hào)：CX（3）3062]。

作者簡介：[3]楊敬輝（973—），男，云南麗江人，博士，副研究員，從事農(nóng)作物病害生物防治及對(duì)殺菌劑抗性研究。E-mail：yjhnn32@26com。

通信作者：莊義慶，博士，研究員，從事植物保護(hù)研究。E-mail：yqzhuang@sinacom。[H]

[ZK）]

葡萄炭疽病（Glomerella cingulata）別稱晚腐病，89年美國首次對(duì)該病進(jìn)行了報(bào)道。在我國大多數(shù)葡萄栽培地區(qū)，由于葡萄連年種植而使病原菌菌源積累，從而造成葡萄炭疽病逐年加重，目前已成為葡萄生產(chǎn)上的主要病害。該病害主要危害果實(shí)，一般可造成產(chǎn)量損失0%～5%，如遇潮濕、多雨年份易造成大流行，病穗率達(dá)50%～70%[2]。該病害的防治以化學(xué)防治為主，由于防治方法單一、防治適期和方法不當(dāng)及病原菌抗藥性等問題，防治效果較差[3]。200—202年，由于特殊高溫、高濕氣候條件，炭疽病原真菌對(duì)常用化學(xué)農(nóng)藥抗性增強(qiáng)，以及藥劑防治適期和方法不當(dāng)?shù)仍颍Ｒ?guī)化學(xué)農(nóng)藥對(duì)炭疽病的防治失敗，造成江蘇省幾乎所有夏黑葡萄品種絕收，農(nóng)戶蒙受巨大的經(jīng)濟(jì)損失，大大打擊了農(nóng)戶的積極性，嚴(yán)重影響了現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)的提升進(jìn)程；因此，急需篩選出防治葡萄炭疽病的新藥劑并推廣應(yīng)用。本研究采用菌絲生長速率法測定4種殺菌劑對(duì)該病菌的室內(nèi)毒力，研究多種新型藥劑和常規(guī)藥劑對(duì)葡萄炭疽病菌的抑菌效果，以期為開發(fā)防治葡萄炭疽病的新藥劑和科學(xué)合理使用殺菌劑提供依據(jù)。

材料與方法

供試菌株

葡萄炭疽病菌由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所植保研究室分離，并保存于4 ℃冰箱中備用。

2供試培養(yǎng)基

馬鈴薯培養(yǎng)基（DA）[4]，用于葡萄炭疽病菌的分離、保存以及毒力測定。

3供試藥劑

9709%多菌靈，上海升聯(lián)化工有限公司；952%咪鮮胺，江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司；92%烯唑醇，江蘇鹽城利民農(nóng)化有限公司；978%腈菌唑，江蘇耘農(nóng)化工有限公司；963%苯醚甲環(huán)唑，江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司；959%己唑醇，江蘇耘農(nóng)化工有限公司；95%氟硅唑，陜西恒潤化學(xué)工業(yè)有限公司；97%氟環(huán)唑，北京綠色農(nóng)華植?？萍加邢薰荆?45%丙環(huán)唑，山東東泰農(nóng)化有限公司；95%戊唑醇，江蘇鹽城利民農(nóng)化有限公司；8439%啶酰菌胺，德國巴斯夫股份有限公司；95%吡唑醚菌酯，德國巴斯夫股份有限公司；966%嘧菌酯，江蘇耘農(nóng)化工有限公司；50%多抗霉素，武漢天惠生物工程有限公司。將9709%多菌靈和50%多抗霉素分別用適量 0 mol/L 鹽酸溶液和無菌水溶解，其他藥劑分別用適量丙酮溶解并加入0%吐溫-80，各藥劑均配制成0 mg/mL母液置于4 ℃冰箱中備用。

4含藥培養(yǎng)基的制備

分別將多菌靈等供試藥劑的母液依次稀釋至一定濃度，再將 mL藥液與9 mL DA培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿內(nèi)混勻，制成含系列梯度濃度藥劑的DA培養(yǎng)基（表），以無菌水作空白對(duì)照（CK），各處理重復(fù)4次。

5毒力測定

采用菌絲生長速率法[5]測定毒力，將保留的葡萄炭疽病菌轉(zhuǎn)接到DA平皿中，25 ℃下活化96 h，然后在近菌落邊緣用打孔器制取直徑為5 mm的菌餅，并轉(zhuǎn)接到“4”節(jié)倍比稀釋配制的含藥和空白對(duì)照的DA平皿中，于 25 ℃下培養(yǎng) 96 h，[2]待對(duì)照中菌落長至約平皿直徑的4/5時(shí)，采用“十”字交叉法量取菌落直徑。計(jì)算菌落直徑平均值，并按照下列公式計(jì)算菌絲生長平均抑制率：菌絲生長平均抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-接種菌餅直徑）×00%。采用DS 30數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出各藥劑對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長抑制的回歸方程、EC50及其95%置信限，并以最敏感藥劑的EC50值為對(duì)照求出相對(duì)毒力指數(shù)。

2結(jié)果與分析

24種殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的影響

[3]苯醚甲環(huán)唑在處理濃度為0039 062 5～5000 000 0 μg/mL時(shí)[CM（25]，對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率為273%～[CM）]

[FK（W5][HT6H][Z]表4種殺菌劑不同濃度對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制效果9227%；氟環(huán)唑、己唑醇、氟硅唑、丙環(huán)唑、烯唑醇、戊唑醇在處理濃度為0078 25～0000 000 μg/mL時(shí)，對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為093%～9727%、645%～8839%、3039%～0000%、243%～954%、56%～8673%、93%～0000%；多菌靈、咪鮮胺、吡唑醚菌酯在處理濃度為056 25～20000 00 μg/mL時(shí)，對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為03%～0000%、2778%～0000%、52%～9463%；腈菌唑、啶酰菌胺在處理濃度為0625～80000 μg/mL時(shí)，對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為859%～9448%、750%～7750%；多抗霉素、嘧菌酯在處理濃度分別為325～200000、625～40000 μg/mL 時(shí)，對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為359%～7578%、869%～5593%（表）。這表明不同殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制活性以及對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的最低抑制濃度（MIC值）有較大差異。

224種殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的毒力測定

室內(nèi)毒力測定結(jié)果（表2）表明，氟硅唑、咪酰胺、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、吡唑醚菌酯、多菌靈、腈菌唑、啶酰菌胺、多抗霉素和嘧菌酯對(duì)葡萄炭疽病菌菌絲生長的EC50值分別為0258 6、0338 0、0376 4、057 6、0585 2、069 7、76 8、92 3、232 7、249 4、77 3、3065 7、70343 2、22459 7 μg/mL。4種供試殺菌劑中，氟硅唑?qū)ζ咸烟烤也【z生長的抑制活性最強(qiáng)，而嘧菌酯的抑制活性最弱，后者的EC50值約為前者的868倍。以氟硅唑的EC50值為對(duì)照得出了不同殺菌劑的相對(duì)毒力指數(shù)，即咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、吡唑醚菌酯、多菌靈的相對(duì)毒力指數(shù)在～5之間，腈菌唑、啶酰菌胺、多抗霉素、嘧菌酯的相對(duì)毒力指數(shù)分別為2773 2、50524 7、27205 5、86822 3。這表明三唑類殺菌劑——氟硅唑和苯醚甲環(huán)唑等藥劑和咪唑類殺菌劑——咪鮮胺對(duì)供試葡萄炭疽病菌具有較強(qiáng)的室內(nèi)抑菌活性，而常規(guī)藥劑多菌靈對(duì)供試葡萄炭疽病菌仍有較好的抑制活性，并且優(yōu)于常規(guī)藥劑——腈菌唑以及新型藥劑啶酰菌胺和嘧菌酯。[FL）]

[FK（W7][HT6H][Z]表24種殺菌劑對(duì)葡萄炭疽病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果[HTSS][STBZ]

[H5][BG（！][BHDFG3，WK7，WK6，WK7。2，WK6，WK7W]殺菌劑毒力回歸方程rEC50（μg/mL）EC50的95%置信限（μg/mL）相對(duì)毒力指數(shù)

[BHDG2，WK7ZQ，WK6，WK7。2，WK6，WK7W]氟硅唑y=5569 40969 2x0998 50258 60242 8～0275 3

3結(jié)論與討論

葡萄栽培面積和產(chǎn)量在世界果樹生產(chǎn)中僅次于柑橘，在國際果樹生產(chǎn)中占有重要地位，但葡萄生長常遭受炭疽病等多種病害危害，因而倍受關(guān)注[6]。雖然各國學(xué)者對(duì)葡萄抗病性進(jìn)行了大量的研究，但至今生產(chǎn)上仍以化學(xué)防治為主[7]。目前，常用的農(nóng)藥主要有代森錳鋅、福美雙、百菌清和多菌靈等，使用頻繁，防效較差[8]。據(jù)報(bào)道，葡萄炭疽病菌對(duì)多菌靈等常規(guī)藥劑已產(chǎn)生抗藥性[9]。葡萄炭疽病的防治及其病原菌的抗藥性等問題，都引起了各級(jí)植保部門的高度關(guān)注。

太一梅等報(bào)道，25%咪鮮胺乳油和0%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑是防治葡萄炭疽病的理想藥劑，具有防效好、持效期長、安全、低毒等特點(diǎn)[0]。陶曉敏等報(bào)道，25%丙環(huán)唑乳油對(duì)葡萄炭疽病具有較好的防治效果。本研究采用菌絲生長速率法測定葡萄炭疽病菌對(duì)苯并咪唑類殺菌劑（多菌靈）、咪唑類殺菌劑（咪鮮胺）、三唑類殺菌劑（氟硅唑、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇和腈菌唑）、甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯和吡唑醚菌酯）、吡啶類殺菌劑（啶酰菌胺）和農(nóng)用抗生素類殺菌劑（多抗霉素）等6類4種殺菌劑的室內(nèi)毒力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這4種殺菌劑的毒力從大到小依次為氟硅唑>咪鮮胺>苯醚甲環(huán)唑>氟環(huán)唑>丙環(huán)唑>戊唑醇>己唑醇>烯唑醇>吡唑醚菌酯>多菌靈>腈菌唑>啶酰菌胺>多抗霉素>嘧菌酯。氟硅唑?qū)ζ咸烟烤也【z生長的抑制活性最強(qiáng)，而嘧菌酯的抑制活性最弱。嘧菌酯是一種呼吸抑制劑，抑制炭疽病菌等多種病原菌孢子萌發(fā)的活性高于抑制菌絲生長[2]，同時(shí)室內(nèi)藥劑篩選的結(jié)果雖可看出藥劑對(duì)菌絲具有抑制作用，但由于受很多因素的影響，室內(nèi)的抑菌活性和在田間使用上的效果不一定完全一致，因此本研究的結(jié)果還有待于在田間進(jìn)一步開展藥劑防治試驗(yàn)。

本研究結(jié)果表明，氟硅唑和苯醚甲環(huán)唑等新一代高效、安全、性價(jià)比高的藥劑在葡萄炭疽病防治中具有較好的推廣潛力，但在沒有明確葡萄炭疽病菌對(duì)新殺菌劑抗性風(fēng)險(xiǎn)情況下，在應(yīng)用中應(yīng)該遵循殺菌劑使用準(zhǔn)則，與其他不同作用機(jī)制的殺[CM（25]菌劑輪換或交替使用，以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生。咪鮮胺[等常規(guī)藥劑對(duì)葡萄炭疽病菌仍具有較強(qiáng)的抑制活性，因而必須科學(xué)合理使用藥劑，延緩常規(guī)藥劑的使用壽命，造福于民。

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