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      GP73在胃癌組織中的表達(dá)及意義

      2015-04-03 15:09:11福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院364000林承春林棟黃建青
      首都食品與醫(yī)藥 2015年18期
      關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞分化標(biāo)本

      福建醫(yī)科大學(xué)附屬龍巖第一醫(yī)院(364000)林承春 林棟 黃建青

      福建省龍巖市第二醫(yī)院(364000)邱小輝△

      胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一, 尋找胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)基因,了解胃癌的分子遺傳學(xué)機(jī)制,為胃癌的預(yù)防、診斷、治療提供理論基礎(chǔ)是目前的研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)研究胃癌細(xì)胞中是否存在GP73的差異表達(dá)有助于深入理解GP73的生理病理機(jī)制,并有助于評價(jià)其作為血清腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用前景。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)材料

      1.1.1 病例選擇 選自2012年1月~2013年8月哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)學(xué)院胃癌患者術(shù)后所取組織,年齡27歲~89歲,平均年齡58歲,所有患者均未合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤。經(jīng)病理科所證實(shí)的原發(fā)性胃癌石蠟包埋組織71例, 選取相配對的胃癌旁組織30例作為正常的胃黏膜對照標(biāo)本。

      1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人GP73多克隆抗體:購自北京博奧森生物科技有限公司;辣根過氧化物酶DAB顯色劑,抗體稀釋液:購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

      1.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟 選取所需標(biāo)本-胃癌組織標(biāo)本及胃癌旁組織標(biāo)本;常規(guī)石蠟包埋。連續(xù)切片5μm,每例各備2張,分別作HE染色,GP73免疫組化染色,試劑盒內(nèi)已知陽性片作為陽性對照。

      1.3 陽性結(jié)果的判定 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)細(xì)致棕色顆粒定義為陽性細(xì)胞。GP73主要定位于細(xì)胞質(zhì),參照Carcangiu等半定量評分方法,根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和著色強(qiáng)度計(jì)分,細(xì)胞著色按無色、淡棕色、棕黃色和棕褐色分別評為0、1、2、3分,陽性細(xì)胞數(shù)量按小于5%,5%~35%,36%~70%和大于70%分別記為0、1、2、3分,再根據(jù)兩項(xiàng)評分的積,≤1分為-,2~3分為+,4~5分為++,≥6分為+++。

      1.4 實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料的比較應(yīng)用卡方檢驗(yàn),兩變量相關(guān)性分析應(yīng)用Spearman相關(guān)性分析,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

      2 結(jié)果

      2.1 GP73蛋白在胃癌與癌旁正常組織中的表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示:GP73蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色顆粒狀;GP73蛋白在胃癌組織和癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率分別為26.8%和86.7%,胃癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

      2.2 GP73蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病例因素的關(guān)系 GP73表達(dá)水平與胃癌的TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而與年齡、性別、組織學(xué)分級、腫瘤大小無關(guān)。TNM分期中Ⅲ~Ⅳ期組、浸潤深度(T3+T4)組和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ、浸潤深度(T1+T2)組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。GP73在胃癌組織學(xué)分級低分化組的陽性表達(dá)率(20%)比高、中分化組的表達(dá)率(25%、46.7%)低。

      3 討論

      GP73在人正常結(jié)腸、肺、腎、前列腺等多個(gè)器官組織中均有表達(dá),但表達(dá)水平相差很大,最高可達(dá)20倍。GP73主要表達(dá)于上皮細(xì)胞,本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)研究GP73在胃癌組織中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)GP73在癌旁正常組織中陽性表達(dá)率為:86.7%,進(jìn)一步證實(shí)了GP73蛋白在胃組織中的高水平表達(dá)。

      GP73mRNA在胃、結(jié)腸、氣管、前列腺等組織中表達(dá)水平較高,而在胎盤、脾臟、骨骼肌、淋巴組織、白細(xì)胞、正常肝細(xì)胞等組織中表達(dá)低或沒有表達(dá)。發(fā)現(xiàn)高爾基體的凋亡相關(guān)蛋白在高分化胃癌細(xì)胞中明顯高于低分化胃癌細(xì)胞,而與細(xì)胞增殖分化有關(guān)的蛋白在低分化胃癌細(xì)胞的高爾基體中又明顯增多。首次明確了在胃癌分化程度不同時(shí)高爾基體的蛋白變化情況,但該項(xiàng)研究并未涉及到GP73。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)GP73蛋白胃癌組織中的陽性率為:26.8%,明顯低于癌旁正常組織,兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明GP73的表達(dá)變化與胃癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),提示GP73其可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展,在區(qū)別胃癌的惡性程度中起著重要的作用。

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