董永軍，曹永孝

(1.慶陽市婦幼保健院， 甘肅 慶陽745000； 2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系，陜西 西安 710061)

·實(shí)驗(yàn)研究·

消石膠囊對(duì)泌尿系結(jié)石干預(yù)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究*

董永軍1，曹永孝2

(1.慶陽市婦幼保健院， 甘肅 慶陽745000； 2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系，陜西 西安 710061)

目的：觀察消石膠囊對(duì)泌尿系結(jié)石干預(yù)的機(jī)制。方法：用乙二醇法復(fù)制大鼠腎結(jié)石模型，研究消石膠囊對(duì)腎結(jié)石形成的抑制作用；用代謝籠集尿法研究其利尿作用；用扭體法研究其鎮(zhèn)痛作用；用伊文斯藍(lán)法研究其對(duì)腹腔毛細(xì)血管通透性的作用。結(jié)果：消石膠囊大、中、小劑量均有抑制結(jié)石形成作用； 此外，消石膠囊大劑量有利尿作用，大、中劑量有鎮(zhèn)痛作用。結(jié)論：消石膠囊對(duì)泌尿系結(jié)石干預(yù)可能是通過抑制結(jié)石形成及利尿作用來實(shí)現(xiàn)的。

消石膠囊/藥效學(xué)；泌尿系結(jié)石/藥物作用；動(dòng)物模型；大鼠；小鼠

消石膠囊是甘肅省慶陽市婦幼保健院董永軍主任醫(yī)師等研制的中藥復(fù)方制劑，主要由廣金錢草、石韋、威靈仙等組成，有清熱利濕、活血止痛、補(bǔ)腎化氣、溶石排石的功能，主治腎、輸尿管、膀胱等泌尿系結(jié)石。為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，本課題組設(shè)立實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠泌尿系結(jié)石的干預(yù)機(jī)制進(jìn)行了研究。

1 材 料

1.1 動(dòng) 物

SD雄性大鼠，體質(zhì)量(180±20)g，合格證號(hào)為陜動(dòng)證字08-004號(hào)；ICR小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，雌雄兼用，合格證號(hào)為陜動(dòng)證字08-003號(hào)。

1.2 藥品、試劑與儀器

消石膠囊由甘肅省慶陽市中醫(yī)醫(yī)院提供，批號(hào)050410；玉林消石片，廣西玉林制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，批號(hào) 438029；氫氯噻嗪，山西臨汾云鵬藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20050401。HH-S112型電熱恒溫水浴鍋，江蘇醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；721-分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠產(chǎn)品；AnalyTech-738半自動(dòng)生化分析儀，上海安泰分析儀器公司產(chǎn)品；80-2B型離心機(jī)，無錫瑞江分析儀器公司產(chǎn)品；BS1103型電子天平，北京賽多利斯天平有限公司產(chǎn)品；BF202型生物顯微鏡，重慶麥克光電儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 模型的建立

將78只大鼠禁食、給水1d，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、玉林消石片組和消石膠囊大、中、小劑量組。大鼠自由飲用含1.4mL/L乙二醇和0.7g/L氯化銨的水溶液[1-2]，連續(xù)30d；用10mL/L的乙二醇和10g/L的氯化銨繼續(xù)喂養(yǎng)10d[3]，同時(shí)各組每天以相應(yīng)藥物灌胃給藥。40d后處死動(dòng)物, 縱向剖開腎臟, 在解剖顯微鏡下觀察結(jié)晶沉淀物及游離結(jié)石或鈣化斑，作為判斷結(jié)石的標(biāo)準(zhǔn)。見表1。

表1 結(jié)石形成及對(duì)腎臟損傷程度的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.3 對(duì)大鼠腎臟結(jié)石形成的抑制作用

腎臟常規(guī)石臘包埋，切片，HE染色，顯微鏡下觀察病理變化。正常對(duì)照組：大鼠腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)分界清楚，皮質(zhì)內(nèi)腎小球分布、結(jié)構(gòu)如常，腎皮質(zhì)、髓質(zhì)及腎乳頭均無可見的結(jié)石和結(jié)晶沉淀物, 腎外形無異常，腎小囊內(nèi)未見滲出、增生，腎小管上皮未見變性、壞死及脫落，腎小管管腔內(nèi)未見管型(見圖1)。模型對(duì)照組：大鼠腎小管內(nèi)可見大量結(jié)晶，有游離結(jié)石形成(見圖2)。玉林消石片組：大鼠腎髓質(zhì)的腎小管內(nèi)可見少量的結(jié)晶沉淀物(見圖3)。消石膠囊大劑量組：大鼠腎小管內(nèi)僅見少量的結(jié)晶沉淀物(見圖4)。消石膠囊中劑量組：腎皮質(zhì)的腎小管內(nèi)可見結(jié)晶沉淀物或有小的游離結(jié)晶，以遠(yuǎn)曲小管更為多見，但明顯少于模型對(duì)照組(見圖5)。消石膠囊小劑量組：腎皮質(zhì)深部腎小管內(nèi)可見結(jié)晶沉淀物或有小的游離結(jié)晶，但仍少于模型對(duì)照組(見圖6)。

圖1 正常對(duì)照組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖2 模型對(duì)照組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖3 玉林消石片組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖4 消石膠囊大劑量組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖5 消石膠囊中劑量組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

圖6 消石膠囊小劑量組大鼠腎臟光鏡照片(HE)

消石膠囊大劑量組和中劑量組腎臟的結(jié)石形成率明顯低于模型對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。模型對(duì)照組大鼠腎臟有明顯的結(jié)石形成并對(duì)腎臟造成損傷，消石膠囊3個(gè)劑量組大鼠腎臟結(jié)石形成及對(duì)腎臟損傷程度均明顯較模型對(duì)照組輕，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 各組大鼠腎臟損傷對(duì)比 n=13

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，* P<0.05，** P<0.01。

2.4 對(duì)大鼠尿量的干預(yù)

取大鼠50只，輕壓下腹部使膀胱排空后灌胃生理鹽水20μL/g，將大鼠置于代謝籠中，1只鼠放1個(gè)代謝籠，測(cè)24h尿量。隨機(jī)將大鼠分為正常對(duì)照組、氫氯噻嗪組和消石膠囊大、中、小劑量組5組，每組10只。各組均灌胃給相應(yīng)藥物(正常對(duì)照組給以生理鹽水)，容積20μL/g，1d1次，連續(xù)4d。末次給藥后，再測(cè)大鼠24h尿量[4]。結(jié)果：消石膠囊大劑量組較正常對(duì)照組尿量增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 各組大鼠尿量和尿量增加值對(duì)比

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，** P<0.01。

2.5 對(duì)小鼠痛覺的干預(yù)

取雄性小鼠100只，體質(zhì)量(20±2)g，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、阿司匹林組和消石膠囊大、中、小劑量組5組，每組20只。各組均灌胃相應(yīng)藥物(模型對(duì)照組給以生理鹽水)20μL/g,1d1次，連續(xù)4d。于末次給藥后40min，腹腔注射 6g/L醋酸溶液，記錄各組小鼠15min內(nèi)的扭體次數(shù)。結(jié)果：阿司匹林組和消石膠囊大、中劑量組小鼠扭體次數(shù)減少，與模型對(duì)照組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表4。

表4 各組小鼠扭體數(shù)對(duì)比

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，* P<0.05，** P<0.01。

2.6 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的干預(yù)

取雄性小鼠50只隨機(jī)分為模型對(duì)照組、阿斯匹林組和消石膠囊大、中、小劑量組5組，每組10只。各組均灌胃相應(yīng)藥物(模型對(duì)照組給以生理鹽水)20μL/g,1d1次，連續(xù)4d。末次給藥后1h，腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)6g/L醋酸0.3mL；30min后，尾靜脈注射6g/L的 伊文斯藍(lán)生理鹽水溶液10μL/g；20min后，脫頸椎處死小鼠；切開腹腔，用6mL生理鹽水洗滌腹腔,吸管吸出洗滌液4mL，加生理鹽水稀釋至10mL;3 000r/min離心15min;取上清液于578nm比色測(cè)定，讀取吸光度值。結(jié)果：消石膠囊大、中、小劑量組吸光度值與模型對(duì)照組對(duì)比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表5。

表5 各組小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性對(duì)比

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，** P<0.01。

3 討 論

消石膠囊由廣金錢草、石韋、威靈仙、懷牛膝、延胡索等藥物經(jīng)有效成分提取而制成[5]。方中廣金錢草、海金砂味甘，性寒，入膀胱經(jīng)，具有清熱、利尿、通淋之功。金錢草兼咸味，可軟堅(jiān)、清熱、排石，是排石專藥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，金錢草可引起輸尿管上段腔內(nèi)壓力增高，輸尿管蠕動(dòng)增強(qiáng)，尿量增加，促使結(jié)石排出；此外，口服金錢草可使尿液變?yōu)樗嵝裕艽偈乖趬A性環(huán)境中才能存在的結(jié)石溶解[6]。海金砂利尿通淋，善于治療上尿道疼痛，亦是治諸淋澀痛的要藥；其煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、福氏桿菌均有抑制作用。石韋長于清熱利濕通淋，還能抑制草酸鹽結(jié)晶沉淀，具有防治結(jié)石形成的作用。威靈仙其性猛急，善走而不守，可宣通十二經(jīng)脈，具有緩解平滑肌痙攣的作用，故有溶石和促進(jìn)排石之功效；配合延胡索，既可行血中之氣滯，又可散氣中之血瘀，為治療結(jié)石誘發(fā)腎絞痛之要藥。懷牛膝味酸苦，性平，歸肝腎二經(jīng)，其性滑利，善下行，能活血祛瘀、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、利尿通淋。配肉桂，溫腎助陽化氣，為標(biāo)本兼顧之法?？v觀全方，主次分明，標(biāo)本兼顧，相輔相成，共奏清熱利濕、補(bǔ)腎化氣、排石溶石之功效。

本研究結(jié)果顯示：①消石膠囊各劑量均對(duì)大鼠腎臟結(jié)石形成有抑制作用；②消石膠囊大劑量明顯增加大鼠日尿量；③消石膠囊大、中劑量有鎮(zhèn)痛作用。由此可推斷：消石膠囊對(duì)大鼠泌尿系結(jié)石的干預(yù)機(jī)制可能是通過其對(duì)結(jié)石形成過程的抑制及利尿作用來完成的。

[1]曹正國，劉繼紅，段永芳，等. 幾種實(shí)驗(yàn)性大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型的比較研究[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2002, 31(5): 93-96.

[2]陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：389-391.

[3]鐘玲，熊愛華，楊延秀，等. 乙二醇法復(fù)制腎結(jié)石模型給藥途徑和方法的比較[J]. 中國病理生理雜志，2000，16(4):381-382.

[4]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 2版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,1994：1052.

[5]董永軍，景秀珍，楊楠，等.消石膠囊治療泌尿系結(jié)石的臨床觀察[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008：350-352.

[6]田代華.實(shí)用中藥詞典[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2002：1178.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)02-0064-04

R

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.02.30

甘肅省慶陽市科技攻關(guān)項(xiàng)目(GDK022-1-17)

2014-09-22；

2014-11-13