楊 波，周承志，胡有志，張道亮，肖金鳳

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院(湖北省中醫(yī)院)心血管內(nèi)科 430064)

麝香保心丸抑制炎性反應(yīng)對(duì)模型大鼠急性心肌梗死后心室重構(gòu)的影響及相關(guān)機(jī)制研究

楊 波，周承志△，胡有志，張道亮，肖金鳳

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院(湖北省中醫(yī)院)心血管內(nèi)科 430064)

目的:探討麝香保心丸抑制炎性反應(yīng)對(duì)模型大鼠急性心肌梗死后心室重構(gòu)的影響及相關(guān)機(jī)制研究。方法:對(duì)80只SD雄性大鼠左冠狀動(dòng)脈降支進(jìn)行結(jié)扎以建立AMI大鼠模型。將大鼠分為空白對(duì)照組、模型組、假手術(shù)組、辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組，給藥2周后測(cè)定大鼠血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)及大鼠血漿和梗死心肌中TNF-α、IL-6的含量。結(jié)果:麝香保心丸等劑量和大劑量組與模型組比較，心肌細(xì)胞被膠原纖維取代的部分明顯減少;麝香保心丸等劑量組和大劑量組與模型組比較，LVESP、LV+dp/ dtmax、LV-dp/dtmax有顯著增加，而LVEDP顯著下降，血漿和梗死心肌中TNF-α、IL-6水平顯著降低。結(jié)論:麝香保心丸可以改善大鼠急性心肌梗死后的血流動(dòng)力，能顯著抑制梗死心肌中炎性因子的釋放，這可能與其改善心室重構(gòu)機(jī)制有關(guān)。

麝香保心丸;急性心肌梗死;心室重構(gòu);機(jī)制;炎性反應(yīng)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)繼發(fā)的心室重構(gòu)會(huì)導(dǎo)致梗死區(qū)的心肌擴(kuò)張變薄，而非梗死區(qū)心肌則出現(xiàn)拉長(zhǎng)肥厚，使得心室腔擴(kuò)大變性，降低了心臟的收縮功能［1］。心室重構(gòu)的影響因素主要包括梗死的面積、與梗死相關(guān)血管的開(kāi)通程度、心肌負(fù)荷狀況、循環(huán)和局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAAS)激活等［2］。研究表明［3］，中藥對(duì)于改善AMI繼發(fā)的心室重構(gòu)具有一定的療效。麝香保心丸是由蟾酥、人工麝香、蘇合香脂、人生提取物、人工牛黃、冰片、肉桂組成的中成藥，具有改善心肌缺血及緩解心絞痛癥狀的作用［4］。AMI繼發(fā)心室重構(gòu)的患者多屬于本虛標(biāo)實(shí)，多見(jiàn)氣虛血瘀，這與麝香保心丸的芳香溫通、益氣養(yǎng)心方證相合［5］，為麝香保心丸治療AMI繼發(fā)的心室重構(gòu)提供了一種思路。本文探討麝香保心丸抑制炎性反應(yīng)對(duì)模型大鼠急性AMI后心室重構(gòu)的影響，并對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD雄性大鼠80只，體質(zhì)量(320±19)g，對(duì)大鼠左冠狀動(dòng)脈降支進(jìn)行結(jié)扎以建立AMI大鼠模型［6］，對(duì)其中70只大鼠進(jìn)行造模成功58只，未造模10只作為空白對(duì)照。

1.2 藥品和試劑

麝香保心丸(上海和黃藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z31020068);辛伐他汀片(北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H20058534);大鼠血清 TNF-αELISA試劑盒(上海富眾生物科技發(fā)展有限公司);IL-6 ELASA試劑盒(上海富眾生物科技發(fā)展有限公司)。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

ECG-101G VET動(dòng)物心電圖儀(上海天呈醫(yī)流科技股份有限公司);RM6240生物信號(hào)處理系統(tǒng)(四川成都儀器廠);ALC-V8動(dòng)物呼吸機(jī)(上海奧爾特生物科技有限公司);Leica RM2135型石蠟脫水機(jī)(德國(guó)徠卡公司);Leica TP1020自動(dòng)脫水機(jī)(德國(guó)徠卡公司);WD-9417B酶標(biāo)儀(北京六一)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

將SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組(未造模)、模型組、假手術(shù)組、辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組、麝香保心丸大劑量組各10只?？瞻讓?duì)照組大鼠只進(jìn)行正常飼養(yǎng)，模型組大鼠每日用生理鹽水進(jìn)行灌胃1次1 ml/100 g，辛伐他汀組大鼠每日給予辛伐他汀0.2 mg/100 g，麝香保心丸等劑量組每日給予麝香保心丸1.4 mg/100 g，麝香保心丸大劑量組每日給予麝香保心丸2.8 mg/100 g，假手術(shù)組不進(jìn)行冠脈結(jié)扎，其余操作與模型組相同。所有大鼠的給藥方式均為灌胃，給藥時(shí)間為2周。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 大鼠血流動(dòng)力學(xué)的測(cè)定 2周后將大鼠進(jìn)行麻醉，分離其右頸總動(dòng)脈進(jìn)行插管，將充滿(mǎn)肝素的生理鹽水導(dǎo)管插入大鼠左心室內(nèi)，與壓力換能器進(jìn)行連接，通過(guò)載波放大器對(duì)LVESP、LVEDP、LV +dp/dtmax進(jìn)行測(cè)定，再通過(guò)微分器對(duì) LV-dp/ dtmax進(jìn)行測(cè)定。

1.5.2 大鼠梗死組織中TNF-α、IL-6的含量測(cè)定 血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定結(jié)束后，將大鼠左心室缺血的心肌組織部分切除并稱(chēng)取其質(zhì)量，后用生理鹽水制成10%的組織勻漿，勻漿在3000rpm離心后取上清液，用ELISA試劑盒(上海藍(lán)基生物科技有限公司)對(duì)大鼠血漿和梗死心肌中TNF-α、IL-6的含量進(jìn)行測(cè)定。ELISA具體方法參考相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.5.3 心室質(zhì)量和心室質(zhì)量指數(shù)測(cè)定 大鼠完成經(jīng)頸靜脈取血后立即打開(kāi)胸腔進(jìn)行心臟摘取，生理鹽水洗凈后用濾紙吸干，稱(chēng)取全心質(zhì)量。然后去除大鼠心房、右心室和周?chē)M織，稱(chēng)取左心室質(zhì)量(HW)。左心室質(zhì)量指數(shù)(VWI)=HW/體質(zhì)量。

1.5.4 Masson染色 稱(chēng)取心臟質(zhì)量后，用甲醛固定標(biāo)本，24 h后取出心臟進(jìn)行切片，后進(jìn)行Masson復(fù)合染色5 min后清洗。在顯微鏡下觀察，細(xì)胞漿呈朱紅色，膠原纖維呈藍(lán)色，肌纖維呈紅色。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 梗死心肌病理學(xué)形態(tài)分析

空白對(duì)照組(圖A)的心肌細(xì)胞排列整齊、間質(zhì)膠原纖維無(wú)明顯增生;模型組(圖B)觀察到大量膠原纖維取代心肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，形態(tài)肥大;麝香保心丸等劑量組(圖C)和大劑量組(圖D)觀察到有部分心肌細(xì)胞被膠原纖維取代，心肌細(xì)胞和膠原纖維相間;辛伐他汀組(圖E)心肌細(xì)胞改變情況與麝香保心丸2組相似。

圖1 各組大鼠心肌細(xì)胞Masson染色(倒置顯微鏡 ×40)

2.2 各組左心室質(zhì)量指數(shù)比較

模型組、辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組的左心室質(zhì)量指數(shù)(LVWI)與空白對(duì)照組比較均有明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)。3組藥物組和模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，3組藥物組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組LVW、LVWI比較(±s)

表1 各組LVW、LVWI比較(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:●P＜0.05，●●P＜0.01;與模型組比較:◇P＜0.05，◇◇P＜0.01

組 別 例數(shù) 計(jì)量(mg/100 g) LVW(mg) LWVI(mg/g)空白對(duì)照組 10 —506.43±15.49 1.47±0.08 模 型 組 10 — 579.34±16.01 1.73±0.10●●假 手 術(shù) 組 10 — 510.41±19.04 1.47±0.09辛伐他汀組 10 0.2 533.18±9.33 1.58±0.03●◇◇麝香等劑量組 10 1.4 548.31±15.90 1.62±0.11●●◇麝香大劑量組 10 2.8 544.01±18.41 1.61±0.06●◇

2.3 各組血流動(dòng)力學(xué)情況

表2顯示，觀察各組左室收縮末壓(LVESP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(LV +dp/dtmax)和左室內(nèi)壓最大下降速率(LV-dp/ dtmax)后發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組比較，模型組、辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組的LVESP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax有顯著增加，而LVEDP顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組與模型組比較，各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著改善(P＜0.05，P＜0.01)。麝香保心丸大劑量組與麝香保心丸等劑量組以及辛伐他汀組比較，LVESP和LV+dp/dtmax 2項(xiàng)指標(biāo)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。

表2 各組血流動(dòng)力學(xué)情況比較(±s)

表2 各組血流動(dòng)力學(xué)情況比較(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:●P＜0.05，●●P＜0.01;與模型組比較:◇P＜0.05，◇◇P＜0.01;與辛伐他汀組比較:▲P＜0.05

組別 LVESP(mmHg) LVEDP(mmHg) LV+dp/dtmax(mmHg/s) LV-dp/dtmax(mmHg/s) 空 白 對(duì) 照 組 133.34±11．90 5.38±0.93 5608.3±801.23 4746.1±675.41 模 型 組 90.71±7．12●●7.58±3.49●●3051.6±552.21●●2844.7±531.39●●假 手 術(shù) 組 134.60±8．94 5.26±0.81 5389.8±378.81 4767.2±568.02 辛 伐 他 汀 組 100.12±5．19●●◇6.89±0.31●◇3961.2±354.81●●◇◇3733.8±395.31●●◇◇麝香等劑量組 101.34±6．69●●◇6.96±0.22●◇4258.2±408.21●●◇◇3759.1±336.21●●◇◇麝香大劑量組 110.13±5．09●●◇◇▲6.82±0.41●◇4800.1±434.78●●◇◇4174.7±369.2●●◇◇

2.4 各組血漿和梗死心肌中TNF-α、IL-6水平

表3顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組、辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組的TNF-α、IL-6水平顯著升高(P＜0.05，P＜0.01);辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組與模型組比較，TNF-α、IL-6水平顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)，麝香保心丸等劑量組與其他2組藥物組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表3 各組血漿和梗死心肌中TNF-α、IL-6情況比較(±s)

表3 各組血漿和梗死心肌中TNF-α、IL-6情況比較(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:●●P＜0.01;與模型組比較:◇P＜0.05，◇◇P＜0.01;與辛伐他汀組比較:▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組ng/mL空白對(duì)照組別 組織IL-6ng/L 組織TNF-αng/mL 血漿IL-6ng/L 血漿TNF-α 5.44±0.62 5.61±2.99 40.92±9.14 0.72±0.31 模 型 組 8.40±0.63●●28.44±7.34●●122.58±16.02●●1.62±0.34●●假 手 術(shù) 組 5.49±0.66 6.16±3.59 42.36±8.92 0.73±0.21 辛 伐 他 汀 組 6.70±0.62●●◇◇▲12.86±5.34●◇◇▲60.58±14.15●●◇◇0.97±0.23●●◇◇麝香等劑量組 7.62±0.79●●◇20.34±8.33●●◇91.32±19.19●●◇◇▲▲1.32±0.35●●◇◇▲▲麝 香大劑量組 6.93±0.77●●◇◇▲▲13.89±6.95●●◇◇▲▲71.86± 9.02●●◇◇1.08±0.18●●◇◇

3 討論

急性心肌梗死(AMI)繼發(fā)的心室重構(gòu)主要指心肌梗死后心室的形態(tài)、大小、結(jié)構(gòu)、功能出現(xiàn)變化，主要包括心肌壞死膨脹、間質(zhì)纖維化、心室壁擴(kuò)張變厚導(dǎo)致心室的擴(kuò)張以及心功能的降低［7］。麝香保心丸是基于中醫(yī)藥理論來(lái)研制的中藥制劑，方中麝香味辛性溫，辛散溫通，芳香走竄，開(kāi)竅提神;人參益氣扶正、蘇合辛散溫通，加強(qiáng)芳香開(kāi)竅之效，兩藥相輔;蟾酥止痛開(kāi)竅，牛黃清心開(kāi)竅，肉桂溫振心陽(yáng)，三藥共為佐;加之冰片辛散走竅，加強(qiáng)止痛開(kāi)竅之效為使藥;各藥配伍共奏活血通絡(luò)、芳香溫通、益氣保心、祛痰止痛之效。麝香保心丸的現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其具有強(qiáng)心、鎮(zhèn)痛、擴(kuò)張血管、抗凝集、減輕炎性反應(yīng)的作用。

炎性細(xì)胞因子如TNF-α及IL-6等可降低患者心肌收縮力，引發(fā)心肌自發(fā)性功能障礙和皮內(nèi)損傷等而導(dǎo)致心室重構(gòu)的發(fā)生。研究表明，TNF-α及IL-6所介導(dǎo)的炎性反應(yīng)是AMI后心室重構(gòu)的重要誘發(fā)因素，因此抑制TNF-α及IL-6的釋放可阻抑心室重構(gòu)的發(fā)生［8］。辛伐他汀已證明，可以抑制TNF-α及IL-6的釋放而抑制AMI后心室重構(gòu)的發(fā)生［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸與辛伐他汀部分作用相似，均能改善AMI大鼠的血流動(dòng)力學(xué)，降低血漿和梗死組織中TNF-α和IL-6含量，抑制炎性反應(yīng)發(fā)生，提示可能為麝香保心丸改善AMI后心室重構(gòu)的作用機(jī)制。本研究中，模型組和3組藥物組在AMI后均出現(xiàn)程度不同的心肌間質(zhì)纖維化和心室擴(kuò)張心功能降低等。Masson染色對(duì)比進(jìn)一步說(shuō)明，AMI出現(xiàn)明顯的心室重構(gòu)以及心功能損害。LVWI水平的升高、LVESP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax的增加以及LVEDP的下降，也說(shuō)明AMI后出現(xiàn)了明顯的心肌梗死肥大、心室擴(kuò)張、梗死區(qū)膨脹、心室腔變大以及心功能降低。炎性因子等會(huì)使心肌收縮力降低，引起心肌自發(fā)性功能障礙以及對(duì)內(nèi)皮造成損傷，從而引發(fā)心室重構(gòu)。研究結(jié)果顯示，辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組與模型組比較，LVESP、LV +dp/dtmax、LV-dp/dtmax有顯著增加。辛伐他汀組、麝香保心丸等劑量組和大劑量組與模型組比較，TNF-α、IL-6水平顯著降低。部分研究結(jié)果還說(shuō)明，大劑量麝香保心丸的效果明顯優(yōu)于小劑量，說(shuō)明麝香保心丸在一定程度上改善AMI大鼠的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，從而改善大鼠的心功能。大部分與辛伐他汀對(duì)照組有相同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，大劑量組優(yōu)于辛伐他汀組，這可能與麝香保心丸自身獨(dú)有的益氣保心功效有關(guān)。3組藥物干預(yù)后Masson染色結(jié)果表明，麝香保心丸可以在一定程度上通過(guò)改善大鼠的心肌細(xì)胞、減少膠原纖維以及左心室的質(zhì)量指數(shù)對(duì)AMI后的心室重構(gòu)產(chǎn)生一定的抑制作用。

綜上，麝香保心丸對(duì)大鼠急性心肌梗死后的血流動(dòng)力有明顯改善作用，能顯著抑制梗死心肌炎性因子的釋放，這可能與其改善心室重構(gòu)機(jī)制有關(guān)。但是AMI繼發(fā)心室重構(gòu)的機(jī)制和影響因素較為復(fù)雜，且中藥的作用靶點(diǎn)較多，本文僅從抑制炎性反應(yīng)方面進(jìn)行了觀察，麝香保心丸對(duì)心室重構(gòu)改善作用的其他機(jī)制還需后續(xù)更為詳細(xì)深入的研究。

［1］ 張全軍，殷躍輝，呂瑾，等．血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2過(guò)表達(dá)對(duì)大鼠急性心肌梗死后心室重構(gòu)的影響及其分子機(jī)制［J］．中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2013，26(10):1418-1425．

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Effects and related mechanisms study on heart protecting musk pill to the inhibition of inflammatory reaction of ventricular remodeling with acute myocardial infarction model in rats

YANG Bo，ZHOU Cheng-zhi△，HU You-zhi，ZHANG Dao-liang，XIAO Jin-feng
(The afficiated Hospital of Hubei University of TCM，Wuhan 430064，China)

Objective:To explore the nfluence and mechanism of Heart-Protection Musk Pill(HMP)on inhibiting the inflammatory factors on myocardial tissue re-construction in rats with acute myocardial infarction(AMI)．Methods:Left anterior desecending coronary arteries of rats were ligated to make AMI model，eighty SD male rats were divided into control group，AMI model group，sham operation group，simvastatin group，high HMP and low HMP group．Hemodynamic parameters，TNF-α、IL-6 concentration of 6 groups were measured after 2 weeks．Results:Compared with AMI model group，the part of the myocardial cell replaced by the collagen fiber in simvastatin group，high HMP and low HMP group decreased significantly，LVESP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax increased significantly(P＜0.05，P＜0.01)and LVEDP decreased significantly(P＜0.05，P＜0.01)，TNF-α、IL-6 in plasma and infarction myocardial decreased significantly(P ＜0.05，P＜0.01)．Conclusion:HMP can improve hemodynamic parameters in model rats with AMI and reduce the release of inflammatory factor in myocardial tissue．This may be the mechanism of HMP for improving ventricular remodeling．

Heart-Protection Musk Pill;Acute myocardial infarction;Ventricular remodeling;Mechanism; Inflammatory response

R285．5

B

1006-3250(2015)03-0285-03

2014-12-09