痤瘡靈顆粒及其拆方對(duì)金黃地鼠皮脂腺斑的影響研究

朱萍萍 陳 力

（1.江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院皮膚科，江蘇南京210028；2.江蘇省中醫(yī)院皮膚科，江蘇南京210029）

痤瘡靈顆粒是江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，是以清解肺胃熱毒、涼血活血消癰為治法，用于治療尋常痤瘡的中成藥，經(jīng)證實(shí)有確切臨床療效[1]。為明確其組方中主要作用藥物，本研究將痤瘡靈顆粒進(jìn)行合理的拆方，分為清熱解毒組（蒲公英30g、白花蛇舌草20g、葛根 10g）、涼血活血組（丹參10g、制大黃10g）和辛溫散結(jié)組（橘葉10g、補(bǔ)骨脂10g、覆盆子10g）。我們以金黃地鼠腹部皮脂腺斑為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究痤瘡靈顆粒及其拆方對(duì)金黃地鼠側(cè)腹部皮脂腺斑大小及組織學(xué)的影響，闡明其組方的合理性，并得出其主要作用藥味，以更好地指導(dǎo)臨床治療。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性金黃地鼠62只，重120~150g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK（京）2006 0009。實(shí)驗(yàn)條件：受試動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，飼全價(jià)營養(yǎng)顆粒飼料，自由飲水，室溫（20±2）℃，濕度 55%～65%。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 痤瘡靈顆粒，藥物組成：蒲公英30g、白花蛇舌草 20g、葛根10g、補(bǔ)骨脂10g、橘葉 10g、覆盆子10g、制大黃10g、丹參10g，江蘇省中醫(yī)院制劑室提供。蒲公英顆粒、蛇舌草顆粒、葛根顆粒、制大黃顆粒等，由江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。安體舒通（螺內(nèi)酯），杭州民生藥業(yè)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 游標(biāo)卡尺（精確到0.01mm），由上海量具刃具廠提供；電子秤（精確到0.0001g），由梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司制造。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物配制 全方組：痤瘡靈顆粒100g，相當(dāng)于生藥110g，加100mL蒸餾水即含生藥1.1g/mL。清熱解毒組：蒲公英顆粒4g（相當(dāng)于生藥30g），白花蛇舌草顆粒1.3333g（相當(dāng)于生藥20g），葛根顆粒1g（相當(dāng)于生藥10g），加100mL蒸餾水即含生藥0.6g/mL。涼血活血組：制大黃顆粒1.6667g（相當(dāng)于生藥10g），紫丹參顆粒 2g（相當(dāng)于生藥 10g），加 100mL蒸餾水即含生藥0.2g/mL。辛溫散結(jié)組：橘葉顆粒1.5g（相當(dāng)于生藥10g），補(bǔ)骨脂顆粒 1g（相當(dāng)于生藥 10g），覆盆子顆粒 1g（相當(dāng)于生藥 10g），加100mL蒸餾水即含生藥0.3g/mL。陽性藥物組：螺內(nèi)酯片100mg加100mL蒸餾水配成1mg/mL的混懸液。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組 雄性金黃地鼠飼養(yǎng)1周，無不良反應(yīng)，飲食、飲水、活動(dòng)正常者納入實(shí)驗(yàn)。將動(dòng)物隨機(jī)分成6組：空白組12只，予等量生理鹽水；全方組10只，予痤瘡靈顆粒10g/kg，相當(dāng)于生藥11g/kg；清熱解毒組，予清熱解毒組藥物，6g/kg生藥量；涼血活血組10只，予涼血活血組藥物，2g/kg生藥量；辛溫散結(jié)組10只，予辛溫散結(jié)組藥物，3g/kg生藥量；陽性藥物組10只，予螺內(nèi)酯混懸液10mg/kg。給藥4周。

2.3 觀察指標(biāo)

2.3.1 皮脂腺斑大小 實(shí)驗(yàn)開始時(shí)先用電動(dòng)剃須刀剃盡金黃地鼠雙側(cè)背部毛，充分暴露皮脂腺斑，在強(qiáng)光照射下，用游標(biāo)卡尺測(cè)量雙側(cè)斑塊的最大橫徑（DT）和最大縱徑（DL）。給藥 4 周后，再次剃毛測(cè)量雙側(cè)斑塊的DT和DL。

2.3.2 觀察皮脂腺斑的顯微結(jié)構(gòu) 將10%甲醛中的皮脂腺斑固定脫水，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，于光鏡下觀察皮脂腺斑的顯微結(jié)構(gòu)。此檢測(cè)由江蘇省中醫(yī)院病理科協(xié)助完成。皮脂腺厚度計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)：（+++）重疊腺葉數(shù)≥4 葉，（++）重疊腺葉數(shù) 2～3葉，（＋）重疊腺葉數(shù)1葉，（－）重疊腺葉數(shù)0。皮脂腺松散程度計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)：密，一個(gè)視野內(nèi)接連分布腺葉數(shù)約≥3葉；松，一個(gè)視野內(nèi)接連分布腺葉數(shù)約＜3葉。每張切片隨機(jī)觀察4個(gè)視野。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以（±s）表示，治療前后比較用配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，計(jì)量資料組間比較用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料組間比較用χ2檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組給藥后皮脂腺斑大?。―T×DL）變化情況 各給藥組金黃地鼠側(cè)腹部皮脂腺斑與給藥前比較均明顯縮?。≒＜0.05，P＜0.01），全方組、清熱解毒組、涼血活血組及陽性藥物組地鼠側(cè)腹部皮脂腺斑面積明顯小于空白組（P＜0.05，P＜0.01），辛溫散結(jié)組與空白組比較無顯著性差異（P＞0.05）。全方組、各拆方組與陽性藥物組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組實(shí)驗(yàn)前后兩側(cè)皮脂腺斑DT×DL值變化比較（±s） mm2

表1 各組實(shí)驗(yàn)前后兩側(cè)皮脂腺斑DT×DL值變化比較（±s） mm2

注：給藥前空白組意外死亡1只，實(shí)驗(yàn)中因灌胃失誤，涼血活血組、陽性藥物組各死亡1只，均從樣本中剔除。與本組治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與空白組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)（只）時(shí)間空白組11全方組 22.29±7.4756**##24.45±8.2225**##用藥后10用藥前用藥后用藥前左面積 右面積43.27±8.0456 42.32±9.5383 45.74±13.1298 44.67±12.0516 38.72±8.8840 39.16±8.1634清熱解毒組 10 用藥后 29.74±7.0967**##28.47±4.9721**##涼血活血組 9 用藥前 38.85±4.0960 40.27±3.5687用藥后 21.38±9.1525**##23.39±10.3521**##用藥前 39.11±8.9422 38.82±11.1529用藥前 42.24±4.6479 43.58±6.0865辛溫散結(jié)組 10 用藥后 33.24±8.0806* 31.85±11.3039*陽性藥物組 9 用藥前 42.55±5.3874 39.94±5.8118用藥后 28.89±8.7773**##29.57±7.3836**#

3.2 各組金黃地鼠腹部皮脂腺斑組織學(xué)改變情況

見圖1。空白組地鼠表皮下皮脂腺呈分葉狀分布，排列緊密而厚，部分腺葉較大；辛溫散結(jié)組地鼠表皮下皮脂腺分布較空白組稍變薄，排列較空白組略顯松散，腺葉較空白組??；陽性藥物組、清熱解毒組地鼠表皮下皮脂腺厚度較空白組稍變薄，重疊腺葉數(shù)減少，排列比較松散，腺葉比空白組??；全方組、涼血活血組地鼠皮脂腺厚度較空白組明顯變薄，重疊腺葉數(shù)明顯減少，排列比較松散，腺葉變小且數(shù)目較少。

圖1 各組金黃地鼠皮脂腺斑顯微結(jié)構(gòu)（光鏡，10×10）

4 討論

痤瘡是一種青春期常見的毛囊皮脂腺慢性炎癥性疾病，表現(xiàn)為粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)和瘢痕，好發(fā)于面背胸等富含皮脂腺的部位[2]。西醫(yī)認(rèn)為痤瘡的發(fā)病機(jī)制主要包括雄激素介導(dǎo)下皮脂腺分泌皮脂過剩，毛囊皮脂腺導(dǎo)管的異常角化導(dǎo)致毛囊口堵塞并形成粉刺，痤瘡丙酸桿菌的繁殖，毛囊及周圍真皮的炎癥等[3]，其中皮脂分泌被認(rèn)為是最主要因素，而皮脂腺的發(fā)育和分泌受雄性激素的支配[4-5]。針對(duì)痤瘡的病因及發(fā)病機(jī)制，西醫(yī)主要采用抗雄激素及抑制皮脂分泌的藥物治療，但是長(zhǎng)期應(yīng)用此類藥物有較大的副作用，其中性激素類藥物可引起女性患者月經(jīng)紊亂，如己烯雌酚、達(dá)因－35、西咪替丁等；而維A酸類藥物雖然能有效抑制皮脂分泌，但會(huì)引起皮膚黏膜干燥，對(duì)肝、腎也有損害。痤瘡靈顆粒作為治療尋常痤瘡的中成藥，其臨床及實(shí)驗(yàn)研究均表明其具有調(diào)節(jié)性激素水平，抑制皮脂分泌的作用[1，6]，但我們無法明確該復(fù)方中具體某種治法或某味藥在痤瘡治療中發(fā)揮作用，因此我們通過拆方研究以闡明中藥復(fù)方痤瘡靈顆粒組方的合理性，找出復(fù)方中有效的功能團(tuán)，為其在治療痤瘡中對(duì)性激素影響的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)理研究做好更進(jìn)一步的基礎(chǔ)工作。

雄激素介導(dǎo)下的皮脂分泌過多在痤瘡發(fā)病中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。金黃地鼠側(cè)腹部皮脂腺斑可以提供雄激素控制的皮脂腺系統(tǒng)，被認(rèn)為是研究藥物抗雄激素及對(duì)皮脂腺影響的理想動(dòng)物模型[7]。金黃地鼠背部?jī)蓚?cè)皮脂腺斑厚度面積和體內(nèi)雄激素含量相關(guān)，此器官中三類結(jié)構(gòu)對(duì)雄激素敏感：皮脂腺細(xì)胞、色素性粗毛、真皮中的黑色素細(xì)胞。金黃地鼠背部?jī)蓚?cè)皮脂腺斑厚度面積和體內(nèi)雄激素含量相關(guān)，目前多用于研究藥物的抗雄激素作用[8]。直接測(cè)定最大橫徑（DT）×最大縱徑（DL）其數(shù)值變化與皮脂腺斑的真實(shí)體積大小變化呈正相關(guān)，亦與藥物的作用強(qiáng)弱呈較好的相關(guān)性[9]。

安體舒通（螺內(nèi)酯）是臨床常用的抗雄激素藥物之一，具有阻止雄性激素與受體結(jié)合、抑制性腺和腎上腺產(chǎn)生雄激素以及直接抑制5α-R的作用，可用于雄激素過高引起的痤瘡。螺內(nèi)酯治療痤瘡在臨床上使用普遍，療效確切，比較有說服力。因此，本實(shí)驗(yàn)將其作為陽性對(duì)照藥物。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，痤瘡靈全方及各拆方、陽性藥物均能調(diào)節(jié)激素水平，抑制皮脂腺斑增生。雖然陽性藥物組、全方組與拆方各組組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但各組治療前后顯著性水平比較陽性藥物組＞全方組＞涼血活血組＞清熱解毒組＞辛溫散結(jié)組，且各組雙側(cè)皮脂腺斑面積與空白組比較，顯著性水平全方組、清熱解毒組、涼血活血組＞陽性組＞辛溫散結(jié)組。由此可以推測(cè)，痤瘡靈顆粒與安體舒通療效相當(dāng)，痤瘡靈全方功效大于拆方各組，其中涼血活血組發(fā)揮主要作用，其次為清熱解毒組，辛溫散結(jié)組亦可縮小皮脂腺斑，但療效相對(duì)較弱。痤瘡靈全方功效優(yōu)于拆方各組，體現(xiàn)了痤瘡靈顆粒配伍的合理性。中藥復(fù)方是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下按照一定的配伍規(guī)律組成，并不是單味藥的簡(jiǎn)單疊加。方中丹參、制大黃發(fā)揮主要作用，為尋找痤瘡靈治療痤瘡的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了依據(jù)?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參、制大黃均具有抗炎作用；丹參具有明顯的雌激素樣作用，制大黃還兼有一定的免疫調(diào)節(jié)功能；蒲公英、蛇舌草主要發(fā)揮抗炎作用，葛根具有雌激素樣作用；補(bǔ)骨脂、覆盆子具有雌激素樣作用，可能作用相對(duì)較弱。由此我們可以推測(cè)，痤瘡靈全方中調(diào)節(jié)性激素水平的主要藥物為丹參和葛根，補(bǔ)骨脂、覆盆子雌激素樣作用可能較弱。

目前報(bào)道的治療痤瘡的有效藥物層出不窮，這就要求我們?cè)谂R床研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)甚至從細(xì)胞水平研究以提供藥物的作用機(jī)制。本研究從抑制金黃地鼠皮脂腺斑增生的角度，探討了痤瘡靈全方及其拆方各組對(duì)皮脂腺斑增生的抑制作用，但由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，對(duì)于復(fù)方中有效藥味主要從哪些方面影響性激素水平還需要我們進(jìn)一步地從分子生物學(xué)角度來闡釋。

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