王桂梅 聶美楠 王彩霞 呂淑慧 刁為英 郭夢(mèng)凡 江清林

宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宮頸癌的癌前病變。盡管CIN有明確的診斷標(biāo)準(zhǔn)，但是在具體工作中還會(huì)遇到很多難以鑒別的情況，如反應(yīng)性鱗狀上皮增生、基底細(xì)胞增生、不成熟鱗狀上皮化生及老年性萎縮等。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)宮頸組織中p16和Ki-67的表達(dá)，探討其在宮頸炎和CIN診斷中聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院病理科2013年1月-2015年3月間慢性宮頸炎及CIN患者的資料及蠟塊，由2位高年資病理醫(yī)師復(fù)查HE切片并證實(shí)。患者年齡18~65歲，平均42.5歲。其中低級(jí)別組（CINI組）65例，高級(jí)別組（CINⅡ、CINⅢ組）47例，慢性宮頸炎組（陰性對(duì)照組）15例，兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法及試劑 采用免疫組化EnVision法。切片常規(guī)脫蠟、脫水，剩余步驟在自動(dòng)免疫組化儀上進(jìn)行。染色具體步驟按照儀器操作說(shuō)明書進(jìn)行。所用抗體p16及Ki-67均購(gòu)自上海羅氏公司。

1.3 結(jié)果判定 p16以宮頸鱗狀上皮基底和副基底層細(xì)胞的連續(xù)性染色，有或沒有表面細(xì)胞染色，判斷為（+）；孤立細(xì)胞或小的細(xì)胞簇染色，即非連續(xù)的著色，特別是基底和副基底層的鱗狀細(xì)胞沒有著色，判斷為（-）。Ki-67陽(yáng)性為胞核著色，陽(yáng)性細(xì)胞僅位于基底層及副基底層或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%者為（-）；Ki-67陽(yáng)性患者中，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為6%~25%者為（+）；26%~50%者為（++）；>50%者為（+++）[1]。本文將陽(yáng)性強(qiáng)度在（+）以上者列為陽(yáng)性細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組p16及Ki-67陽(yáng)性率比較 慢性宮頸炎中p16為陰性，在CIN中p16大部分呈陽(yáng)性（88/112），低、高級(jí)別CIN組與宮頸炎組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。高級(jí)別CIN組p16陽(yáng)性率顯著高于低級(jí)別CIN組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。Ki-67在慢性宮頸炎組僅見少量表達(dá)，在CIN組表達(dá)增加（106/112），低、高級(jí)別CIN組與宮頸炎組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。低級(jí)別CIN組與高級(jí)別CIN組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 三組p16、Ki-67表達(dá)的比較

2.2 病理結(jié)果比較 在慢性宮頸炎中p16為陰性，鱗狀上皮Ki-67基底細(xì)胞（+）；低級(jí)別CIN中p16陽(yáng)性細(xì)胞局限于宮頸鱗狀上皮的下1/3，在高級(jí)別CIN中陽(yáng)性細(xì)胞累及甚至超過(guò)上皮下2/3層或全層彌漫陽(yáng)性。隨著病變程度的加重，Ki-67表達(dá)范圍及陽(yáng)性強(qiáng)度都有所提高，低級(jí)別CIN主要為鱗狀上皮層下1/3的細(xì)胞核著色，呈黃褐色；高級(jí)別CIN主要為鱗狀上皮層下2/3至全層細(xì)胞核著黃褐色，呈強(qiáng)陽(yáng)性（圖 1~3）。

圖1 慢性宮頸炎注：a與b均為EnVision法（10×10）；b：鱗狀上皮Ki-67基底細(xì)胞（+）

圖2 低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變注：a：HE染色法（10×10）；b：EnVision法（10×10），鱗狀上皮p16（+），陽(yáng)性部位為鱗狀上皮下1/3；c：EnVision法（10×10），鱗狀上皮Ki-67（+），鱗狀上皮下1/3層細(xì)胞核著黃褐色

圖3 高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變注：a：HE染色法（10×10）；b：EnVision法（10×10），鱗狀上皮p16全層（+）；c：EnVision法（10×10），Ki-67全層（+）

3 討論

宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）根據(jù)鱗狀上皮異型增生的程度分為三級(jí)：CINⅠ級(jí)相當(dāng)于輕度非典型增生，CINⅡ級(jí)相當(dāng)于中度非典型增生，CINⅢ級(jí)相當(dāng)于重度非典型增生和原位癌[2]。發(fā)生CIN主要的危險(xiǎn)因素是HPV感染。宮頸病變中HPV16、18感染與p16的過(guò)度表達(dá)呈正相關(guān)[3]。

p16基因又稱多腫瘤抑制基因，為細(xì)胞周期依賴性激酶（CDK）抑制蛋白，直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂，當(dāng)p16基因突變致結(jié)構(gòu)和功能缺失時(shí)，可刺激細(xì)胞分裂，引起細(xì)胞的非典型增生，甚至癌變[4]。本研究發(fā)現(xiàn)p16在慢性宮頸炎不表達(dá)或呈不連續(xù)的點(diǎn)灶狀的表達(dá)，在CIN病變中表達(dá)增加。p16表達(dá)在低級(jí)別到高級(jí)別CIN中呈逐漸增高的趨勢(shì)，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。p16的陽(yáng)性部位位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，呈現(xiàn)彌漫陽(yáng)性的表達(dá)方式，棕黃色，在低級(jí)別CIN中彌漫表達(dá)于鱗狀上皮的下1/3層，高級(jí)別CIN中表達(dá)于鱗狀上皮的下2/3層甚至全層，彌漫性強(qiáng)陽(yáng)性。對(duì)于炎癥背景較重而CIN病變范圍較小的宮頸活檢標(biāo)本，p16陽(yáng)性標(biāo)記可以檢出部分漏診的病例，p16陽(yáng)性的范圍可以幫助判斷CIN的級(jí)別。

Ki-67是一種反映細(xì)胞增殖程度的核抗原，在細(xì)胞增殖周期的G1、S、G2及M期表達(dá)，細(xì)胞有絲分裂后該蛋白含量迅速減少，在G0期不表達(dá)[5]。本研究結(jié)果顯示Ki-67在慢性宮頸炎、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變中的陽(yáng)性率分別為13%、90%和100%，慢性宮頸炎陰性表達(dá)或僅表達(dá)于基底層細(xì)胞，在鱗狀上皮乳頭狀增生區(qū)域其表達(dá)有所增加，此時(shí)聯(lián)合應(yīng)用p16對(duì)于鑒別低級(jí)別CIN有一定的幫助。低、高級(jí)別CIN組Ki-67陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），故聯(lián)合應(yīng)用p16對(duì)于CIN的分級(jí)尤為重要。

綜上所述，聯(lián)合檢測(cè)p16和Ki-67可以幫助病理醫(yī)師鑒別慢性宮頸炎及CIN，提高CIN診斷準(zhǔn)確性，降低誤診率。

[1]史健，鄭軍生，尹方，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變p16、p53、Ki-67的表達(dá)與高危型HPV感染及其臨床意義[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27（4）：515－ 517.

[2]陳樂真.婦產(chǎn)科診斷病理學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2010：117.

[3]鄒先進(jìn)，蔡蘭，劉穎，等.子宮頸癌前病變與子宮頸癌組織中p16INK4A蛋白檢測(cè)及其與人乳頭狀瘤病毒感染的關(guān)系[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2004，39（9）：625-626.

[4]旦慧文，戴淑真.p53、p16、PTEN基因在宮頸癌中的作用[J].中國(guó)誤診學(xué)雜志，2005，5（7）：1226-1228.

[5]王巖，劉曉霞.上皮內(nèi)瘤樣病變及宮頸癌組織中Ki67、p16的異常表達(dá)[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2002，24（11）：649-651.