★ 石薇 董雪蓮 邱智東 賈艾玲 (長春中醫(yī)藥大學(xué) 長春130117)

降脂保肝顆粒由人參、水飛薊等多味中藥材經(jīng)提取制成，水飛薊入肝經(jīng)，味苦性微寒，苦以清火，寒以除熱，協(xié)助人參共奏清肝熱、補(bǔ)肝血之效。水飛薊為菊科植物水飛薊Silybum marianum(L．)Gaertn．的干燥成熟果實(shí)，是研究較全面的治療肝病的藥用植物［1］，其種子的提取物中水飛薊賓的含量最多，生物活性最高，具有抗纖維化的作用，保護(hù)肝細(xì)胞膜，抗肝炎的活性最強(qiáng)［2］，降脂保肝處方中水飛薊以乙醇加熱回流提取，藥渣與人參等藥材水煎提取。本文針對(duì)醇提部分工藝中水飛薊賓的含量進(jìn)行測定研究。

水飛薊賓存在于水飛薊的殼中，果仁中基本沒有，為了使水飛薊藥材在降脂保肝顆粒中高效利用，在已有水飛薊殼仁分離技術(shù)基礎(chǔ)上［3］，本實(shí)驗(yàn)以水飛薊殼和水飛薊粕分別為原料提取醇提浸膏，得到出膏率與水飛薊賓的含量，以研究水飛薊殼仁分離的必要性，為制藥行業(yè)中提取含水飛薊藥材中藥復(fù)方提供參考。

1 材料、儀器與試劑

1．1 降脂保肝顆粒醇提浸膏的制備 以水飛薊殼為原料:水飛薊藥材由長春宏檢藥材公司提供，以水飛薊脫殼機(jī)制備的水飛薊殼，除去雜質(zhì)，按照降脂保肝顆粒工藝要求，制成浸膏，作為試驗(yàn)原料，備用。

以水飛薊粕為原料:水飛薊藥材由長春宏檢藥材公司提供，以水飛薊粕，除去雜質(zhì)，按照降脂保肝顆粒工藝要求，制成浸膏，作為試驗(yàn)原料，備用［4－6］。1．2 儀器與試藥 R－205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi)、Agilent1260高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)、EL－204型電子分析天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司)、真空干燥箱(上海一恒實(shí)驗(yàn)儀器總廠)、TP－150超聲波清洗機(jī)(天鵬電子新技術(shù)有限公司)、電動(dòng)恒溫水浴鍋(江蘇常熟醫(yī)療器械廠)。水飛薊賓對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110856－200604，供含量測定用);甲醇(色譜純，美國飛世爾公司)，純凈水(娃哈哈)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 水飛薊賓分析條件 水飛薊賓用HPLC－UV測定;使用Agilent1260高效液相色譜儀，采用以下色譜條件測定:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(DiamonsilTM C18，5μL，250mm×4．6mm);以甲醇－水－冰醋酸溶液(48∶52∶1)為流動(dòng)相;檢測波長為287nm;流速1．0mL/min;柱溫25℃［7］。

2．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取濃度為0.1196mg/mL的水飛薊賓對(duì)照品溶液1，2，3，4，5，6μL，依法測定，注入液相色譜儀，以水飛薊賓進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為:Y=303．37X－4．8467，r=0．9999。水飛薊賓進(jìn)樣量在0．1196～0．7176μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2．3 精密度試驗(yàn) 取濃度為0．1196mg/mL的水飛薊賓對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為5μL，按照分析條件，測定其峰面積，計(jì)算精密度試驗(yàn)的RSD值為0．50%。

2．4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取濃度為0．1196mg/mL的水飛薊賓對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別于0，2，8，12，24h注入高效液相色譜儀，按照分析條件結(jié)果表明，水飛薊賓對(duì)照品溶液RSD值為0．89%，供試品溶液RSD值為2．80%，二者在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。2．5 重復(fù)性試驗(yàn) 取降脂保肝顆粒醇提浸膏，精密稱量，平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀按照分析條件，其相應(yīng)的RSD值為1．73%。

2．6 加樣回收率試驗(yàn) 取6份降脂保肝顆粒醇提浸膏，精密稱定，分別精密加入的水飛薊賓對(duì)照品粉末適量，按分析方法進(jìn)行操作，依法測定，計(jì)算其加樣回收率，平均回收率是100．67%，其RSD值為2.79%。

2．7 水飛薊賓的含量 分別稱取由水飛薊殼與水飛薊粕為原料藥制成的醇提浸膏粉末(過三號(hào)篩)約2g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0．45μm微孔濾膜濾過，續(xù)濾液供HPLC法分析測定，求出分別以水飛薊殼和水飛薊粕原料中水飛薊賓的含量以及出膏率，結(jié)果見表1。

表1 浸膏中水飛薊賓的含量

3 討論

目前藥材市場上銷售的水飛薊質(zhì)量參差不齊，且有部分在放置期間含量下降過多，因此以水飛薊粕作為提取降脂保肝顆粒的原料時(shí)，在相應(yīng)工藝條件下，水飛薊賓的含量為0．22%，而以水飛薊殼作為提取降脂保肝顆粒的原料時(shí)，在相應(yīng)工藝條件下，水飛薊賓的含量為0．96%，提高率為336．36%，可知以水飛薊殼為原料時(shí)水飛薊賓的含量及其在浸膏中的出膏量均高于以水飛薊粕作為提取原料時(shí)的對(duì)應(yīng)結(jié)果，可以證明以水飛薊殼為原料能夠有效的提高水飛薊賓在降脂保肝顆粒中的含量，以提高降脂保肝顆粒的療效，并為制藥工業(yè)中水飛薊賓提取工藝的改進(jìn)提供參考［8］。

［1］陳毓荃，王春梅．水飛薊綜合利用基礎(chǔ)研究I有效成分提取工藝［J］．西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1997，6(4):91－93．

［2］楊晉，劉雅敏，劉延澤．水飛薊素藥學(xué)研究進(jìn)展［J］．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16(2):185－187．

［3］陳鈞．一種水飛薊籽脫殼機(jī):中國，CN201010154670．0［P］．2010－03－01．

［4］鞋華閣，張興德，謝輝，等．保肝降脂顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(8):44－47．

［5］游旭彪．HPLC法測定水飛薊賓膠囊中水飛薊賓的含量［J］．海峽藥學(xué)，2011，23(6):64－66．

［6］張淑麗，張?zhí)熘瑮钍篮＃w薊發(fā)狀根培養(yǎng)體系的建立及其水飛薊賓含量的測定［J］．中國中藥雜志，2014，39(11):2005－2 010．

［7］趙迎英，王進(jìn)旗，楊彬彬，等．高效液相色譜法測定水飛薊提取物中水飛薊賓的含量［J］．西北藥學(xué)雜志，2005，20(2):63－64．

［8］姚水寶，楊水新，施紅敏．梯度高效液相色譜法分離測定利加隆片中水飛薊賓的含量［J］．中國藥業(yè)，2001，10(8):13．