魏國(guó)棟，馬思緹，王蘇麗

(山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，山東 煙臺(tái) 264199)

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瓜蔞皮藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

魏國(guó)棟，馬思緹，王蘇麗

(山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺(tái) 264199)

目的：完善瓜蔞皮藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)瓜蔞皮藥材的質(zhì)量進(jìn)行有效控制。方法：采用顯微法觀察瓜蔞皮粉末特征；參考中國(guó)藥典2010年版附錄相關(guān)方法，對(duì)瓜蔞皮的水分、總灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物進(jìn)行測(cè)定；采用HPLC法建立瓜蔞皮中3，29-二苯甲?；闃侨嗜己康臏y(cè)定方法。結(jié)果：確定瓜蔞藥材顯微特征；不同產(chǎn)地瓜蔞皮藥材水分測(cè)定結(jié)果為9.65%～12.15%，總灰分為3.16%～4.99%，酸不溶性灰分為0.24%～0.46%，浸出物為32.19%～44.01%；建立HPLC法測(cè)定瓜蔞皮中3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇含量的方法，藥材含量測(cè)定結(jié)果為0.033%～0.045%。結(jié)論：本研究建立的方法準(zhǔn)確可靠，可用于瓜蔞皮藥材的質(zhì)量控制。

瓜蔞皮；3，29-二苯甲?；闃侨嗜?；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法；顯微

瓜蔞皮，又名栝樓皮，為葫蘆科植物栝樓TrichosantheskirilowiiMaxim.或雙邊栝樓TrichosanthesrosthorniiHarms.的干燥成熟果皮，產(chǎn)于山東、安徽、河南、四川等地。瓜蔞皮性寒，味甘，歸肺、胃經(jīng)，可清熱化痰、利氣寬胸，用于治療痰熱咳嗽，胸悶脅痛[1]。現(xiàn)代研究表明，瓜蔞皮及其制劑具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、抗心律失常、增強(qiáng)免疫、抑制血小板聚集、降低膽固醇、抗菌、消炎和抗癌等多種作用[2-6]。瓜蔞皮注射液已經(jīng)在臨床上治療心血管系統(tǒng)疾病特別是心絞痛、腦梗死等方面得到廣泛的應(yīng)用[7,8]。隨著瓜蔞皮藥材和制劑在臨床上的廣泛應(yīng)用，人們對(duì)瓜蔞皮的質(zhì)量更加關(guān)注。市售相關(guān)瓜蔞皮藥材的混淆品較多，難辨真?zhèn)??！吨袊?guó)藥典》2010版一部已經(jīng)收載有瓜蔞皮，但只有性狀鑒別和薄層色譜鑒別項(xiàng)。本研究進(jìn)一步完善了瓜蔞皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括顯微鑒定、水分、總灰分、酸不溶性灰分的檢查，水溶性浸出物及3，29-二苯甲?；闃侨嗜己康臏y(cè)定，并對(duì)10批不同產(chǎn)地的瓜蔞皮藥材樣品進(jìn)行了檢測(cè)，制定了合理的限度，為瓜蔞皮藥材的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 儀器與材料

高效液相分析儀(LC-10AT 輸液泵，SPD-10Avp紫外檢測(cè)器，浙大N2000色譜工作站)；純水機(jī)(Sartorius，arium 611VF)；數(shù)控超聲波清洗器(KQ2200DB，江蘇昆山)；電熱恒溫干燥箱KH-35A型(天津泰斯特儀器有限公司)；馬弗爐(XL-3，天津瑪福爾科技有限公司)。

甲醇(色譜純，天津四友)；重蒸水(自制)；3，29-二苯甲?；闃侨嗜紝?duì)照品(批號(hào)：130913；四川維奇克生物科技有限公司)。10批瓜蔞皮藥材購(gòu)自中藥材市場(chǎng)(2013年秋季收集)，經(jīng)山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中藥鑒定教研室王蘇麗教授鑒定為葫蘆科植物栝樓TrichosantheskirilowiiMaxim.或雙邊栝樓TrichosanthesrosthorniiHarms.的干燥成熟果皮。樣品收集信息詳見表1。

表1 樣品收集情況

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

取10批供試品，分別粉碎，按照2010年版中國(guó)藥典(一部)附錄ⅡC中顯微鑒別法，觀察瓜蔞皮藥材粉末的顯微特征。本品粉末呈淺橙黃色。果皮表皮細(xì)胞，表面觀類方形或類多角形，垂周壁厚度不一。石細(xì)胞較多，數(shù)個(gè)成群或單個(gè)散在，黃綠色或淡黃色，呈類方形、圓多角形，紋孔細(xì)密，孔溝細(xì)而明顯。導(dǎo)管主要為網(wǎng)紋導(dǎo)管和螺紋導(dǎo)管。粉末顯微圖像見圖1。

2.2 檢查

2.2.1 水分測(cè)定 取瓜蔞皮藥材，按照中國(guó)藥典2010年

版一部附錄Ⅸ H水分測(cè)定法第一法進(jìn)行測(cè)定。每份樣品平行測(cè)定2份，結(jié)果見表2。

1.果皮表皮細(xì)胞；2.石細(xì)胞；3.導(dǎo)管

2.2.2 總灰分、酸不溶性灰分測(cè)定 取瓜蔞皮藥材，按中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅸ K總灰分、酸不溶性灰分測(cè)定法測(cè)定。每份樣品平行測(cè)定2份，結(jié)果見表2。

2.3 浸出物測(cè)定

需要留意的是，啤酒行業(yè)目前集中度很高，巨頭持續(xù)吞并中小啤酒廠的可能性很大，燕京啤酒在中高端市場(chǎng)缺乏競(jìng)爭(zhēng)力，未來有被并購(gòu)的預(yù)期。

取瓜蔞皮藥材，按照中國(guó)藥典2010年版一部附錄X A水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定。每份樣品平行測(cè)定2份，結(jié)果見表2。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件 Phenomenex Luna C18色譜柱(250mm×4.60mm，5μm)；以甲醇—水(93∶7)為流動(dòng)相；流速為1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣量為20μL。理論塔板數(shù)按3，29-二苯甲?；闃侨嗜挤逵?jì)算應(yīng)不低于2 000。在本色譜條件下，3，29-二苯甲?；闃侨嗜挤逍瘟己?，在供試液中與其他色譜峰分離度良好。對(duì)照品溶液及供試品溶液色譜見圖2。

2.4.2 對(duì)照品溶液制備 取3，29-二苯甲?；闃侨嗜紝?duì)照品適量，精密稱定，加二氯甲烷制成每1mL含50μg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液制備 取本品粉末(過60目篩，40℃干燥6h)約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入二氯甲烷10mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)30min，放冷，再稱定重量。用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。續(xù)濾液以流動(dòng)相適當(dāng)稀釋后，即得。

2.4.4 線性關(guān)系考察 精密稱定3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇對(duì)照品適量，加二氯甲烷制成濃度為800μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL置于10mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，作為1號(hào)對(duì)照品溶液。再精密量取1號(hào)混合對(duì)照品溶液5mL置于10mL量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，作為2號(hào)對(duì)照品溶液。依次采取對(duì)半稀釋的方法得到3～5號(hào)對(duì)照品溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣20μL測(cè)定，以峰面積(Y)與進(jìn)樣濃度(X)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為：Y = 3 791.99X-798.09，R2=0.999 5，結(jié)果表明,3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇在25～400μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖2 對(duì)照品溶液(A)及供試品溶液(B)色譜

2.4.5 精密度試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算3，29-二苯甲?；闃侨嗜挤迕娣e的RSD為1.17%，表明日內(nèi)精密度良好，符合分析方法的要求。取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣3天，每天連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇峰面積的RSD為1.65%，表明日間精密度良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取瓜蔞皮藥材5粉末6份，各約0.5g，精密稱定，按照“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，計(jì)算含量。6份供試品中3，29-二苯甲?；闃侨嗜挤迕娣eRSD為1.56%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品5份，每份約0.5g，精密稱定，加入相同量的3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇，分別按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇平均回收率為100.77%，RSD為1.02%，表明該方法回收率良好。

表3 3，29-二苯甲?；闃侨嗜蓟厥章式Y(jié)果 (n=5)

2.4.9 樣品含量測(cè)定 取10批瓜蔞皮藥材，每批平行3份，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按上述方法進(jìn)樣測(cè)定。以干燥品計(jì)算3，29-二苯甲酰基栝樓仁三醇的含量，結(jié)果見表2。10批瓜蔞皮藥材中3，29-二苯甲?；闃侨嗜嫉暮繛?.033%～0.058%。

3 討論

本文從顯微鑒別、檢查、浸出物、含量測(cè)定等方面對(duì)10批瓜蔞藥材進(jìn)行分析，考察相關(guān)指標(biāo)，為瓜蔞皮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

在進(jìn)行瓜蔞皮的粉末顯微觀察時(shí)，還發(fā)現(xiàn)存在草酸鈣簇晶，因草酸鈣簇晶在其他藥材中也普遍存在，故未作為主要顯微特征。瓜蔞皮來自栝樓或雙邊栝樓的干燥成熟果皮，而兩者的干燥成熟果實(shí)做瓜蔞藥材使用。藥典中采用水溶性浸出物的熱浸法測(cè)定瓜蔞浸出物的含量?？紤]到瓜蔞皮是瓜蔞果實(shí)的果皮，其中所含有的油脂性成分較瓜蔞少，因此也以水為浸出溶劑測(cè)定瓜蔞皮浸出物含量。在分別采用冷浸法和熱浸法測(cè)定浸出物時(shí)發(fā)現(xiàn)，采用兩種方法得到的浸出物含量差別不大，考慮到省時(shí)及節(jié)省溶劑的原則，采用熱浸法?！吨袊?guó)藥典》2010版中瓜蔞項(xiàng)下的含量測(cè)定以3,29-二苯甲?；闃侨嗜紴榭刂瞥煞?，本研究參考藥典中瓜蔞項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，考察采用HPLC法測(cè)定瓜蔞皮藥材中3，29-二苯甲?；闃侨嗜嫉倪m應(yīng)性和準(zhǔn)確性，并對(duì)瓜蔞皮藥材進(jìn)行測(cè)定。另有文獻(xiàn)采用和本文不同的色譜條件，得到了瓜蔞皮藥材的HPLC指紋圖譜，為瓜蔞皮的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)[9]。

根據(jù)不同產(chǎn)地瓜蔞皮測(cè)定結(jié)果，并結(jié)合藥典中已有同類藥材的標(biāo)準(zhǔn)，建議規(guī)定瓜蔞皮藥材的含水量不得高于14.0%，總灰分不得多于6.0%，酸不溶性灰分不得多于0.6%，以干燥品計(jì)算水溶性浸出物不得少于30.0%，以干燥品計(jì)算含3，29-二苯甲?；闃侨嗜疾坏蒙儆?.030%。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典[S]．一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：105.

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(責(zé)任編輯：魏 曉)

Quality Standard Study on Trichosanthis Pericarpium

Wei Guodong, Ma Siti，Wang Suli

(Shandong College of Traditional Chinese Medicine, Yantai 264199,China)

Objective:To establish quality standard of Trichosanthis pericarpium in order to control its quality.Methods:The characteristics of the powder of Trichosanthis pericarpium was observed by microscopic identification. The tests of water content, ash, acid-insoluble ash and water-soluble extractives of Trichosanthis pericarpium were carried out according to the methods recorded in appendix of Chinese Pharmacopeia ( 2010 edition，volume 1). The HPLC method was established to determine the content of 3,29-didenzoyl-karounitriol.Results:The microscopic characteristic of Trichosanthis pericarpium powder was identified. The results of water content, ash, acid-insoluble ash and water-soluble extractives of Trichosanthis pericarpium were 9.65%～12.15%, 3.16%～4.99%, 0.24%～0.46% and 32.19%～44.01% respectively. The content of 3,29-didenzoyl-karounitriol of Trichosanthis pericarpium was 0.033%～0.045% by HPLC methods.Conclusion:The established qualitative and quantitative methods in this study were accurate and reliable, which could be used for the quality control of Trichosanthis pericarpium.

Trichosanthis Pericarpium; 3,29-didenzoyl-karounitriol; quality standard; HPLC; microscopic

2014-12-08

魏國(guó)棟(1988-)，男，山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校助教，研究方向?yàn)橹兴幖庸ず退幱弥参镔Y源。E-mail：wgdong2008@126.com

R284

A

1673-2197(2015)13-0029-03

10.11954/ytctyy.201513012