謝雷 石欣蕾 任安石 高華春 陳全成

·實驗研究·

茶油常見臨床用藥的藥理藥效基礎(chǔ)研究

謝雷 石欣蕾 任安石 高華春 陳全成

目的 探討茶油多種臨床用藥可能的藥理藥效基礎(chǔ)。方法 將油茶籽經(jīng)兩次95%的乙醇回流提取后濃縮至不含乙醇和水的提取物, 取其中的茶油部分作為試驗藥物；用腫瘤壞死因子-α(TNF-α)處理人乳腺癌細胞系(MCF-7)細胞建立細胞炎癥模型, 進一步用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)觀察藥物處理對細胞炎癥因子IκB-α表達的影響進而評價茶油是否具有抗炎活性。結(jié)果 從油茶籽提取得到的茶油顯著地抑制細胞中TNF-α誘導的IκB-α的降解從而抑制炎癥發(fā)生。結(jié)論 茶油對細胞顯示良好的抗炎作用, 這種特性可能是其臨床應用于治療皮膚過敏、暗瘡、疥癬、小兒紅屁股、以及皮膚燒燙傷等多種與炎癥相關(guān)疾病的藥理基礎(chǔ)之一。

茶油；藥理藥效；抗炎

茶油系山茶科植物油茶(Camellia oleifera Abel)或小葉油茶(C.meiocarpa Hu, ms.)的成熟種子經(jīng)壓榨法得到的脂肪油［1］,茶油的成份以不飽和脂肪酸為主, 包括油酸、亞油酸和亞麻酸, 不飽和脂肪酸含量達90%左右, 其中又以油酸含量最大,占到80%以上。此外, 據(jù)報道茶油中還含有山茶苷、山茶皂苷、茶多酚、角鯊烯等多種次生代謝產(chǎn)物［2］。茶油除了食用外,在《中國藥典》中被作為藥用油脂收錄, 《綱目拾遺》、《農(nóng)政全書》、《中華本草》等中醫(yī)藥典籍中曾記錄其具有清熱解毒、潤燥、殺蟲、息風等作用, 臨床用藥中多以單方或配方用于治療皮膚過敏、暗瘡、疥癬、小兒紅屁股、以及皮膚燒燙傷等多種與炎癥有關(guān)聯(lián)的疾?。?-6］。為了更好地說明茶油在臨床使用中所起的藥效作用, 作者采用體外細胞模型對其存在的抗炎活性進行實驗觀察與評價, 旨在為茶油的臨床用藥提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器、試劑和材料 儀器：電子天平BS224S(賽多利斯科學儀器北京有限公司), 凝膠電泳儀(北京六一)。試劑和材料：試劑主要包括95%市售食用乙醇、含10% FBS與streptomycin/penicillin的DMEM細胞培養(yǎng)液 (Hyclone), TNF-α(PeproTech), Iκ B-α (Abcam)及β-actin (Sigma-Aldrich)蛋白抗體等, MCF-7細胞購自美國ATCC, 油茶籽(福建山寶油茶有限公司提供)來源于福建省龍巖上杭縣。

1.2 方法

1.2.1 茶油的提取 取油茶籽4.5 kg, 粉碎后加入2.5 L 95%的乙醇于回流提取裝置中加熱回流提取2.5 h, 過濾；再加入2.5 L乙醇重復提取一次, 過濾并合并濾液；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮到不含乙醇和水, 最終得到油膏狀乙醇提取物750 g。將提取物放入4℃冰箱中24 h使提取物中的固形物與茶油分層, 用吸管吸出茶油過濾后備用。

1.2.2 細胞培養(yǎng) 將凍存的MCF-7細胞解凍后移至加有DMEM培養(yǎng)基的10 cm培養(yǎng)皿并放于空氣中含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中復蘇及傳代培養(yǎng), 最終取處于對數(shù)生長期的細胞進行活性實驗研究。

1.2.3 藥物處理 取處于對數(shù)生長期的MCF-7細胞接種于六孔板, 密度30%～40%, 培養(yǎng)24 h后細胞貼壁, 吸掉培養(yǎng)基,用1×PBS洗2次, 吸掉PBS后無血清加入2 μl/ml上述提取的茶油樣品處理3 h, 然后再加入10 ng/ml的TNF-α分別處理10、20和30 min后收集細胞。

1.2.4 蛋白質(zhì)印跡檢測 將收集的細胞用NP-40裂解液(含蛋白酶抑制劑混合物和磷酸化酶抑制劑)冰上裂解15 min,裂解液轉(zhuǎn)入1.5 ml離心管, 12000 RPM低溫離心15 min, 吸取上清液加入5×loading, 煮5 min, 10%的SDS變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離, 100 V轉(zhuǎn)膜1 h, 5%牛奶封閉1 h, 一抗孵育過夜, 二抗孵育1 h, 膠片曝光檢測Iκ B-α蛋白, 以β-actin作為內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。實驗中統(tǒng)計方法采用T-test分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 樣品制備 油茶籽通過提取得到金黃色透明的茶油樣品, 有濃重粗榨茶油香氣。

2.2 茶油的抗炎作用 實驗中單獨用TNF-α處理MCF-7細胞可以觀察到隨時間的增加, 細胞中的Iκ B-α的蛋白表達水平逐漸減少, 可見TNF-α處理導致細胞中的Iκ B-α降解(P＜0.05)(見圖1, 第2、6和10道)。而以茶油(CY)預處理MCF-7細胞發(fā)現(xiàn)TNF-α 誘導的Iκ B-α降解作用被明顯阻止(P＜0.05)(見圖1, 第8和12道分別與第6和10道對照)。

以上實驗結(jié)果顯示茶油可以抑制TNF-α誘導的炎癥通路, 初步表明茶油可能具有良好的抗炎作用。

圖1 茶油對乳腺癌細胞MCF-7中TNFα誘導的IκB-α表達的影響

3 討論

TNF-α是一種能與細胞膜上受體特異結(jié)合進而發(fā)揮促進細胞生長、分化、凋亡及誘發(fā)炎癥等廣泛生物學效應的細胞因子。Iκ B-α是核因子κB(免疫球蛋白K輕鏈基因增強子)抑制蛋白的α亞基, IκB從NF-κB復 合體中解離并降解是NF-κ B信號通路激活和參與炎癥應答及基因調(diào)控的必要條件［7］。本實驗結(jié)果初步表明油茶籽中提取的茶油可以有效地抑制TNF-α引起的IκB降解, 因此可能具有潛在的抑制炎癥發(fā)生的功效, 而這種功效可能是茶油臨床應用于治療皮膚過敏、暗瘡、疥癬、小兒紅屁股、以及皮膚燒燙傷等多種與炎癥相關(guān)疾病的藥效基礎(chǔ)之一。這些研究結(jié)果為茶油的臨床用藥提供了一些基礎(chǔ)的實驗依據(jù)。

［1］ 國家藥典委員會.茶油.中國藥典(一部).北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:386-387.

［2］ 謝藍華, 周春靈, 李偉云, 等.熱榨法和冷榨法制取茶油的品質(zhì)差異及其在護膚美容上的應用研究.農(nóng)產(chǎn)品加工(學刊) 2010(7):58-61,65.

［3］ 鄒清容, 禤麗萍.茶油抗炎、抗菌作用的臨床應用進展, 2013, 22(12):12-13.

［4］ 胡鑫.中藥治療牛疥癬.獸醫(yī)科技雜志, 1982(3):29.

［5］ 李金花, 丁明麗.茶油聯(lián)合氫氧化鈣溶解液治療燒傷的療效觀察.中國療養(yǎng)醫(yī)學, 2009, 18(5):469-470.

［6］ 陳鳳珍, 蘇碧霞, 梁美德, 等.茶油預防新生兒紅臀的療效觀察.中國校醫(yī), 2013, 27(11):823, 825.

［7］ 徐潔, 姚紅兵.TNF-α信號傳導通路的研究現(xiàn)狀.瀘州醫(yī)學院學報, 2007, 30(2):156-158.

Research of pharmacological effect basis of usual clinical medications with camellia oil

XIE Lei, SHI Xinlei, REN An-shi, et al.School of Pharmacy, Xiamen University, Xiamen 361102, China

Objective To explore the possible pharmacological effect basis of usual clinical medicationswith camellia oil.Methods After twice 95% ethanol reflux extraction of camellia seed, the solution was concentrated to the extractive without ethanol and water.Camellia oil in the extractive was taken as study drug.Human breast adenocarcinoma cell line (MCF-7) cell was managed by tumor necrosis factor (TNF)-α to build a cell inflammation model.Influence of drug treatment on cell inflammatory cytokines IκB-α was observed by Western blot, in order to make evaluation on whether camellia oil possesses anti-inflammatory activity.Results Camellia oil extracted from camellia seed had significantly inhibiting effect on degradation of IκB-α induced by TNF-α, so as to suppress occurrence of inflammation.Conclusion Camellia oil has precise anti-inflammation effect on cells, and this effect may be one of its pharmacological basis for treating inflammation related diseases as skin allergy, pimples, scabies, pediatric bunda vermelha, skin burn and scald.

Camellia oil; Pharmacological effect; anti-inflammation

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.210

2015-01-15］

廈門市科技計劃項目(項目編號：3502Z20123015)；國家自然科學基金(項目編號：81102332)

361102 廈門大學藥學院

陳全成