賈燕花，高 磊，王曉青

HPLC法測定復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因含量

賈燕花，高 磊，王曉青

目的 采用HPLC法測定復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因的含量。方法 采用Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-0.02%三乙胺水溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.0)(60∶40)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：290 nm。對(duì)照品和供試品均以水為溶劑。記錄色譜圖，外標(biāo)法進(jìn)行含量測定。結(jié)果 鹽酸普魯卡因在0.008～0.040 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；精密度(n=6)為0.79%；平均回收率(n=9)為100.9%。結(jié)論 本樣品制備方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可作為復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因含量測定的樣品制備方法。

高效液相色譜法；鹽酸普魯卡因；搽劑；含量測定

0 引言

復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑具有消炎、抗免疫、止癢和止痛的作用，臨床上主要用于治療神經(jīng)性皮炎、脂溢性皮炎、濕疹等皮膚病。該復(fù)方制劑的主要成分為醋酸曲安奈德和鹽酸普魯卡因。其中醋酸曲安奈德的含量測定方法采用HPLC方法[1]，筆者同時(shí)進(jìn)行了醋酸曲安奈德和鹽酸普魯卡因的雙組分含量測定的HPLC方法的摸索，發(fā)現(xiàn)兩組分的保留行為差別大，無法滿足同時(shí)測定的要求。醋酸曲安奈德在水中不溶[2]，鹽酸普魯卡因在水中易溶[3]，本研究利用被測物質(zhì)溶解性的差異對(duì)供試品進(jìn)行處理，建立高效液相色譜法檢測復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國，安捷倫科技有限公司)；HITACHI U3000型紫外分光光度儀，AE204型十萬分之一電子分析天平(瑞士、梅特勒托利多科技公司)。

對(duì)照品：鹽酸普魯卡因(100424-201102)由中國食品藥品檢定研究院提供；復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院提供(批號(hào)：130109、130130、130218)。實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水；甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 精密稱取鹽酸普魯卡因?qū)φ掌?.05 g，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取1 mL，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得鹽酸普魯卡因?qū)φ掌啡芤?。精密量取?fù)方醋酸曲安奈德搽劑1 mL，轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，濾過，作為供試品儲(chǔ)備液；將供試品儲(chǔ)備液濾過，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻即可，即得供試品溶液。按照復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑的配方制備不含普魯卡因的陰性樣品，再按照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 色譜條件[4-10]色譜柱為Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.02%三乙胺水溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.0)(60∶40)；檢測波長：290 nm；流速：1.0 mL/min。精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，被測組分及雜質(zhì)之間的分離度應(yīng)符合要求，陰性對(duì)照溶液的色譜圖中無干擾色譜峰。見圖1。

2.3 線性關(guān)系考察 按“2.2”項(xiàng)色譜條件，精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.4、0.6、0.8、1.0、1.6、2.0 mL，分別置于50 mL的量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過；分別取上述溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)、濃度(C，mg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。獲得的鹽酸普魯卡因的回歸方程為：A=38 541 C-3.914 1 (r=0.999 9)。結(jié)果表明，在進(jìn)樣量為10 μL時(shí)，鹽酸普魯卡因進(jìn)樣濃度在0.008～0.040 mg/mL范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件，精密量取對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，連續(xù)進(jìn)樣5次，以鹽酸普魯卡因峰面積計(jì)算RSD值(RSD=0.15%)。結(jié)果表明，該試驗(yàn)方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的樣品，按照“2.1”項(xiàng)下供試品溶液配制方法，依次制備6份供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析，測定鹽酸普魯卡因的含量，RSD為0.79%。表明該樣品制備方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，制備后分別在0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測定鹽酸普魯卡因的峰面積。鹽酸普魯卡因峰面積的RSD為0.15%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 分別精密加入已準(zhǔn)確測定含量的供試品儲(chǔ)備液2.5 mL，置50 mL容量瓶中，共9份；依次精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液1.5、2.5、3.5 mL，每個(gè)濃度3份，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過。按“2.2”項(xiàng)色譜條件，分別量取10 μL進(jìn)樣測定。見表1。由表1可見，醋酸曲安奈德的平均回收率為100.9%，RSD為0.37% (n=9)。結(jié)果表明，該方法適用于復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因的含量測定。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品的含量測定 精密量取本品適量，用水定量稀釋制成每1 mL中含鹽酸普魯卡因約0.02 mg的溶液，搖勻，濾過，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取對(duì)照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.02 mg的溶液，搖勻，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。見表2。

表2 含量測定結(jié)果

3 討論

復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因采用容量分析法進(jìn)行含量測定，由于滴定液的配制、標(biāo)定以及貯存時(shí)間等的限制，本研究采用外標(biāo)法，利用高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行制劑的含量檢測。本研究嘗試建立醋酸曲安奈德和鹽酸普魯卡因同時(shí)測定的高效液相色譜方法，但是由于醋酸曲安奈德在水中不溶，而鹽酸普魯卡因在水中易溶，同時(shí)兩者在液相中的保留行為差別迥異，因此，建立鹽酸普魯卡因的單組分高效液相色譜方法。從高效液相色譜樣品制備的簡便快捷和環(huán)保等方面考慮，在制備供試品溶液時(shí)，先將供試品溶解于水中，混勻后濾過，再進(jìn)一步用水稀釋。筆者對(duì)該供試品制備方法進(jìn)行了重復(fù)性考察，結(jié)果良好。

該供試品制備方法簡便準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中鹽酸普魯卡因的含量測定，同時(shí)為兩種溶解性相反的復(fù)方制劑含量測定時(shí)供試品的制備提供參考。

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Content determination of procaine hydrochloride in compound triamcinolone acetonide acetate liniment by HPLC

JIA Yan-hua,GAO Lei,WANG Xiao-qing

(Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method to determine the content of procaine hydrochloride in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.Methods HPLC was used with Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm) as chromatographic column with a mobile phase of methanol-0.02% trimethylamine (60∶40).The detection wavelength was 290 nm,the flow rate was 1.0 mL/min.Both test and references substances took water as the solvent.The chromatogram was recorded,and the content was determined by external standard method.Results There was a good linear relationship of procaine hydrochloride in 0.008～0.040 mg/mL(r=0.999 9).The precisionRSD(n=6) was 0.79%,and the average recovery rate (n=9) was 100.9%.Conclusion The method is simple,rapid,accurate and reproducible.It is suitable for the content determination of procaine hydrochloride in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.

HPLC; Procaine hydrochloride; Liniment; Content determination

2014-08-04

解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京100048

10.14053/j.cnki.ppcr.201504017