王 虎 任路路任 瑩 許廣華 司 永 李小偉

安徽省太和縣中醫(yī)院，安徽 太和 236607

HPLC法測(cè)定三拗魚龍合劑中橙皮苷的含量

王 虎 任路路*任 瑩 許廣華 司 永 李小偉

安徽省太和縣中醫(yī)院，安徽 太和 236607

目的：建立三拗魚龍合劑中橙皮苷的含量測(cè)定方法。方法：采用HPLC法測(cè)定，色譜柱為碳十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；流動(dòng)相為乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃。結(jié)果：橙皮苷在13.91～222.6μg／ml范圍呈良好的線性關(guān)系，平均回收率100.11%，RSD＝1.37%（n＝6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，重復(fù)性、穩(wěn)定性良好，精密度高，結(jié)果可靠，可作為三拗魚龍合劑質(zhì)量控制的方法。

三拗魚龍合劑；橙皮苷；HPLC

三拗魚龍合劑由魚腥草、浙貝母、陳皮等藥味組成，為太和縣中醫(yī)院醫(yī)院制劑。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支氣管炎。作為醫(yī)院制劑，原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。為了更好的控制醫(yī)院制劑的質(zhì)量，使本制劑療效穩(wěn)定可控，本文采用高效液相色譜法測(cè)定陳皮中橙皮苷的含量，該法靈敏度高，專屬性好，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可作為三拗魚龍合劑質(zhì)量控制的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫LC－1220型高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；101－1A型數(shù)顯恒溫干燥箱（上海光地儀器設(shè)備有限公司）；AL－120型電子天平（瑞士梅特勒－托利多儀器公司）；HS－180型超聲波清洗機(jī)（寧波海曙金蘭教儀科研究所）。

1.2 試藥 三拗魚龍合劑（批號(hào)：20140417、20140712、20140906，太和中醫(yī)院中藥制劑室）；橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110721－201316，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：依利特Hypersil ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流速：1.0ml／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μl。理論塔板數(shù)以橙皮苷計(jì)應(yīng)不低于4000，分離度大于1.5。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇－0.4%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備［1］密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理（功率100W，頻率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，搖勻，離心（3000r／min，10min），精密移取上清液5m l置10m l量瓶中，用0.4%磷酸稀釋至刻度，搖勻，過(guò)0.45μm濾膜，即得。

2.4 干擾試驗(yàn) 按處方比例及生產(chǎn)工藝制備不含陳皮的三拗魚龍合劑，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液在與橙皮苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，故認(rèn)為無(wú)干擾。見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取橙皮苷對(duì)照品11.13mg，置25m l量瓶中，用甲醇定容，作為儲(chǔ)備液。精密移取儲(chǔ)備液5m l，置10m l量瓶中，用甲醇－0.4%磷酸溶液（1∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為2號(hào)對(duì)照品溶液；同法制成3、4、5號(hào)對(duì)照品溶液。分別精密吸取各對(duì)照品溶液20μl，按上述色譜條件進(jìn)樣。以對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo) （X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程：Y＝1.945×10－9X－0.002225532，R＝0.9996。結(jié)果表明，橙皮苷在13.91～222.6μg／m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.5”項(xiàng)下3號(hào)對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果橙皮苷峰面積RSD為0.92%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20140417）樣品6份，分別按 “2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定其含量。結(jié)果橙皮苷平均含量為0.4856mg／m l，RSD為1.34%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20140417）供試品溶液，室溫下放置，按上述色譜條件，分別于配制后0、2、4、6、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄橙皮苷峰面積。結(jié)果峰面積RSD為1.76%。結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)［2－3］取已知含量的同一批號(hào)（20140417）樣品6份，分別精密加入濃度為0.4452mg／ml橙皮苷對(duì)照品溶液1.0 ml，按“2.3”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定其含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。2.10 樣品含量測(cè)定 取樣品3批，按所述方法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表1 橙皮苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)果與討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 HPLC法測(cè)定橙皮苷含量的文獻(xiàn)［4－7］較多，常采用甲醇－水系統(tǒng)和乙腈－水系統(tǒng)。由于峰形較差，常會(huì)在流動(dòng)相中添加一定比例酸改善峰形。試驗(yàn)考察了甲醇－0.4%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇－0.4%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）等流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）峰形較為滿意，且保留時(shí)間適宜、分離度良好，故選擇此條件作為測(cè)定條件。

3.2 樣品處理 分別對(duì)樣品超聲10、15、20、25min后進(jìn)樣考察，結(jié)果顯示超聲20min含量高于15min，而超聲25min被測(cè)組分含量幾乎不再增加，故確定超聲時(shí)間20min即可。由于定容后樣品過(guò)濾較困難，試驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)，故選擇離心法除去雜質(zhì)。且離心后與直接過(guò)濾樣品的色譜峰面積相比較，無(wú)明顯差異。樣品用甲醇處理后直接進(jìn)樣，色譜峰前沿明顯，分離度差。用0.4%磷酸稀釋后進(jìn)樣，峰形較為滿意。故樣品處理后，故加入適量磷酸以調(diào)整峰形。

采用HPLC法測(cè)定三拗魚龍合劑的含量，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于該品種的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性考察，為三拗魚龍合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù)。

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R284.1

A

1007－8517（2015）01－0044－02

2014.10.12）

王虎（1971－），男，主管中藥師，主要從事中藥炮制與制劑工藝的研究。E－mail：157914824＠qq.com

任路路（1984－），男，主要從事中藥新劑型的研究。E－mail：lubyhui68＠163.com