陳雙龍，高德宏，歐陽忠，楊清默

（廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院乳腺外科，福建廈門 361003）

雄激素受體和NF-κB在人乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

陳雙龍，高德宏，歐陽忠*，楊清默

（廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院乳腺外科，福建廈門 361003）

*通信作者（corresponding author）:oyzh_ouyang@163.com

雄激素受體（androgen receptor，AR）可在70%以上的乳腺癌中表達(dá)，與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1］。核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，其主要生物功能是通過調(diào)控一系列基因表達(dá)參與炎性反應(yīng)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)。NF-κB在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著一定的作用［2］。在不同乳腺癌分子亞型中AR與NF-κB的表達(dá)是否有差異，該差異是否可作為不同乳腺癌分子亞型的預(yù)后指標(biāo)或治療靶點仍不清楚。

本研究檢測人乳腺癌組織中AR和NF-κB的表達(dá)，探討AR和NF-κB與乳腺癌臨床病理特征、分型與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，揭示AR、NF-κB與乳腺癌不同分子分型的關(guān)系，為不同乳腺癌分子亞型預(yù)后和治療靶點的選擇提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源及病例分組:收集廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2010年1月至2012年2月的乳腺癌手術(shù)標(biāo)本204例，女性，發(fā)病年齡34～74歲。其中101例三陰型乳腺癌及103例非三陰型乳腺癌，所有標(biāo)本均經(jīng)病理鑒定證實。

1.1.2 試劑:兔抗人AR單克隆抗體、兔抗人NF-κB磷酸化P65（p-P65）單克隆抗體、兔抗人β-actin單克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG以及Western blot發(fā)光試劑（Santa Cruz公司）。

1.2 方法

1.2.1 病理組織學(xué)觀察:乳腺癌及癌周組織均經(jīng)病理學(xué)診斷證實為浸潤性導(dǎo)管癌，采用WHO（2002版）診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行乳腺癌組織學(xué)分級，常規(guī)病理切片，HE染色，觀察組織學(xué)情況。

1.2.2 Western blot檢測AR和NF-κB蛋白表達(dá)情況:提取組織總蛋白，Bradford法檢測蛋白濃度。經(jīng)SDS-PAGE電泳后，電轉(zhuǎn)至PVDF膜，分別用兔抗人AR和NF-κB P65單克隆抗體進(jìn)行雜交，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG反應(yīng)后，顯色后凝膠成像系統(tǒng)檢測蛋白熒光。β-actin作為內(nèi)參，目的蛋白表達(dá)水平用目的蛋白/內(nèi)參吸光度比值進(jìn)行表示。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)分析:應(yīng)用SPSS 13.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，采用χ2檢驗，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間對比采用t檢驗;相關(guān)性分析采用Spearman檢驗和直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 AR蛋白在乳腺癌中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系:101例三陰乳腺癌細(xì)胞中有28例AR呈陽性表達(dá)（圖1），表達(dá)量為2.76±0.43;而103例非三陰乳腺癌中有76例呈陽性表達(dá)，表達(dá)量為4.24±1.03。在三陰型乳腺癌中，組織分級高的患者AR表達(dá)明顯低于組織分級低的患者（P＜0.05），腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯低于無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.01）（表1）。

2.2 NF-κB P65蛋白在乳腺癌中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系:101例三陰乳腺癌細(xì)胞中有76例NF-κB P65呈陽性表達(dá)（圖2），表達(dá)量為2.23±0.64，而103例非三陰乳腺癌中僅有49例呈陽性表達(dá)，表達(dá)量為1.32±0.31。在三陰乳腺癌中，組織分級低（P＜0.05）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）的患者NF-κB P65陽性率高;在非三陰乳腺癌中，僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）相關(guān)（表2）。

圖1 乳腺癌及癌旁乳腺組織AR的表達(dá)Fig 1 Expression of AR in or around mammary cancer tissue

表1 AR與三陰性和非三陰性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Table 1 Analysis of AR in triple-negative and nontriplenegative breast cancer

圖2 乳腺癌及癌旁乳腺組織NF-κB P65的表達(dá)Fig 2 Expression of NF-κB P65 in or around mammary cancer tissue

3 討論

最新研究表明AR和NF-κB在乳腺癌的生長和發(fā)展中具有重要作用［3］。雄激素通過降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)促使細(xì)胞凋亡或降低細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白cyclin D1的表達(dá)，影響細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖，AR表達(dá)與組織分級明顯相關(guān)［4］。在乳腺癌中NF-κB的表達(dá)也異?；钴S，其在乳腺癌中的差異表達(dá)及其對乳腺癌預(yù)后意義，目前國內(nèi)鮮見報道。本研究表明NF-κB P65在三陰型和非三陰型乳腺癌表達(dá)率存在顯著差異。NF-κB P65的表達(dá)水平與三陰型乳腺癌的組織分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。而在非三陰型乳腺癌中NF-κB的表達(dá)僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在一定的相關(guān)。在三陰和非三陰乳腺癌中NF-κB與臨床病理特征不盡相同，說明NF-κB在三陰和非三陰乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后中所起作用也有差異，NF-κB在三陰乳腺癌高表達(dá)預(yù)示其可能與三陰乳腺癌發(fā)病有關(guān)。提示AR和NF-κB可望作為三陰乳腺癌的重要預(yù)后指標(biāo)，成為三陰型乳腺癌亞群治療靶點。

表2 NF-κB P65與三陰性和非三陰性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Table 2 Analysis of NF-κB P65 in triple-negative and nontriple-negative breast cancer

［1］劉曉珍，牛昀.雄激素受體與乳腺癌分子分型的研究進(jìn)展［J］.中華病理學(xué)雜志，2014，43:498-500.

［2］陳學(xué)東，錢立元，易剪梅，等.三陰乳腺癌雄激素受體表達(dá)與瘤體大小、淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系［J］.中國普通外科雜志，2014，23:695-697.

［3］Song L，Lin C，Gong H，et al.miR-486 sustains NF-κB activity by disrupting multiple NF-κB-negative feedback loops［J］.Cell Res，2012，23:274-289.

［4］劉敏，李琳，劉峰，等.人乳腺癌 MCF-7細(xì)胞中TRIM22下調(diào)NF-κB的表達(dá)［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2013，30:972-976.

R3

A

10.16352/j.issn.1001-6325.2015.09.024

1001-6325（2015）09-1259-02

2015-03-19

2015-05-28

福建省衛(wèi)生廳青年科研課題（2012-2-77）