丁明劍，楊文華，白楊，崔國忠，戴殿祿

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061000)

三陰型乳腺癌患者癌組織及血清轉(zhuǎn)化生長因子β1檢測的臨床意義

丁明劍，楊文華，白楊，崔國忠，戴殿祿

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061000)

目的 探討轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)在三陰型乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇三陰型乳腺癌患者80例、非三陰型乳腺癌患者40例，采用ELISA法檢測血清TGF-β1水平，采用免疫組化法檢測乳腺癌組織TGF-β1表達，分析TGF-β1表達與三陰型乳腺癌患者臨床病理參數(shù)及預后的關系。結果 三陰型及非三陰型乳腺癌患者血清TGF-β1水平分別為(108.43±10.55)、(84.09±11.52)ng/L，二者比較P<0.05。三陰型乳腺癌患者中TGF-β1高表達42例、低表達38例，TGF-β1高表達者較低表達者腋下淋巴結轉(zhuǎn)移率高、組織學分級程度低(P均<0.01)，二者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、乳腺癌家族史比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；TGF-β1高表達者5年無瘤生存率為54.76%(23/42)、低表達者為71.05%(27/38)，二者比較P<0.05。結論 三陰型乳腺癌患者TGF-β1高表達，TGF-β1的表達變化與腫瘤組織學分級及腋下淋巴結轉(zhuǎn)移相關，并影響患者預后。

三陰型乳腺癌；轉(zhuǎn)化生長因子β1；無瘤生存率

三陰型乳腺癌是臨床常見的一種惡性腫瘤，患者發(fā)病年齡低、復發(fā)風險高，由于患者雌、孕激素受體及Her-2基因的表達均為陰性，臨床上尚無針對性的內(nèi)分泌治療或靶向藥物治療方法[1]。轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)是一種具有多種生物活性的多肽類細胞因子，在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮雙重作用，在惡性腫瘤早期，TGF-β1誘導上皮細胞凋亡而產(chǎn)生抑癌作用；隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤細胞逃逸TGF-β1的抑制作用，同時分泌大量具有活性的TGF-β1，促進腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移[2～5]。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1高表達與胃癌[6]、肺癌[7]、結腸癌[8]、乳腺癌[9,10]等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關系密切。本研究探討TGF-β1在三陰型乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2003年6月～2008年6月滄州市中心醫(yī)院經(jīng)病理證實的三陰型乳腺癌患者80例，均為女性，年齡26～69歲、平均48.2歲，均無遠處轉(zhuǎn)移，有腋下淋巴結轉(zhuǎn)移49例，有乳腺癌家族史6例，組織學分級Ⅰ～Ⅱ級42例、Ⅲ級38例。80例患者均行乳腺癌改良根治術治療，術后均給予蒽環(huán)類及紫杉醇藥物為主的化療6～8個周期，腋下淋巴結≥3枚者(30例)行局部放射治療。同時選取40例非三陰型乳腺癌患者，均為女性，年齡32～67歲、平均49.2歲，均無遠處轉(zhuǎn)移，治療方法同三陰型乳腺癌患者。兩組年齡、病情及治療方法等均具有可比性。

1.2 血清TGF-β1水平檢測 手術治療前分別取三陰型乳腺癌及非三陰型乳腺癌患者晨起空腹靜脈血5 mL，離心提取血清，采用Germany M5000酶聯(lián)免疫分析儀(ELISA法)檢測血清TGF-β1，通過繪制標準曲線計算血清TGF-β1水平。

1.3 乳腺癌組織TGF-β1表達檢測 兩組術中均留取乳腺癌組織，10%甲醛固定，4 μm厚切片。按照試劑盒說明書進行免疫組化染色。免疫組化試劑盒購自Genzyme公司。組織標本經(jīng)牛奶封閉，4 ℃靜置2 h，加入一抗TGF-β1(1∶2 000)于4 ℃靜置24 h，加入羊抗兔二抗(1∶25)室溫靜置1 h。采用不加一抗的切片作為陰性對照，已知陽性切片作為陽性對照。TGF-β1陽性染色主要定位于細胞質(zhì)，呈棕色彌漫或顆粒狀。無陽性細胞為-，陽性細胞>0～<25%為+、25%～75%為++、>75%為+++。-、+為低表達，++、+++為高表達。比較三陰型乳腺癌TGF-β1低表達者與高表達者臨床病理參數(shù)。

1.4 隨訪 三陰型乳腺癌患者均隨訪至2013年6月，采用電話隨訪與門診復查相結合的方式，統(tǒng)計患者5年無瘤生存率，比較TGF-β1低表達者與高表達者5年無瘤生存率。

2 結果

2.1 血清TGF-β1水平 三陰型乳腺癌患者血清TGF-β1水平為(108.43±10.55)ng/L，非三陰型乳腺癌患者為(84.09 ±11.52)ng/L，二者比較P<0.05。

2.2 三陰型乳腺癌組織TGF-β1表達及其與患者臨床病理參數(shù)間的關系 三陰型乳腺癌組織TGF-β1高表達42例、低表達38例，TGF-β1低表達者與高表達者腋下淋巴結轉(zhuǎn)移、組織學分級比較差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.01)，二者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、乳腺癌家族史比較差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 組織三陰型乳腺癌TGF-β1表達與患者臨床病理參數(shù)的關系(例)

2.3 三陰型乳腺癌TGF-β1高表達者與低表達者5年無瘤生存率 80例三陰型乳腺癌患者均完成為期63～87個月的隨訪，中位隨訪時間為68個月，TGF-β1高表達者5年無瘤生存率為54.76%(23/42)、低表達者為71.05%(27/38)，二者比較P<0.05。

3 討論

三陰型乳腺癌指雌孕激素受體和原癌基因Her-2均為陰性的乳腺癌，占所有乳腺癌病理類型的10.0%～20.8%，具有較高的復發(fā)轉(zhuǎn)移風險，預后較其他類型乳腺癌差，由于其激素受體均陰性，臨床尚無有效的分子靶向治療藥物[1]。TGF-β1是由兩個結構相同或相似的亞單位借二硫鍵連接而形成的雙體結構，屬于調(diào)節(jié)細胞生長和分化的TGF-β超家族。TGF-β1信號通路傳導在組織細胞的生長、分化、免疫調(diào)節(jié)、炎癥和損傷修復等方面發(fā)揮重要作用[11]。TGF-β1信號通路失衡或發(fā)生改變可導致多種癌基因突變，促進腫瘤細胞分泌大量有活性的TGF-β1，改變腫瘤細胞外微環(huán)境，使腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)(如糖蛋白、黏蛋白)相互作用，通過腫瘤相關成纖維細胞改變上皮細胞表型，誘導血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)釋放，促進血管生成，進而促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展；抑制機體內(nèi)樹突狀細胞(DC)、細胞毒性T細胞(CTL)、NK細胞、巨噬細胞等免疫細胞，抑制IL-2受體及其通路，促進腫瘤細胞浸潤、轉(zhuǎn)移[12]。

本研究中三陰型乳腺癌患者血清TGF-β1水平顯著高于非三陰型乳腺癌患者，提示TGF-β1高表達可能是三陰型乳腺癌發(fā)生的促進因素，與Bhola等[13]研究結果一致。本研究中組織學分級Ⅲ級、發(fā)生腋下淋巴結轉(zhuǎn)移的三陰型乳腺癌組織中TGF-β1高表達例數(shù)分別多于組織學分級Ⅰ～Ⅱ級及無腋下淋巴結轉(zhuǎn)移者，與Lang等[10]研究結果一致。Bao等[14]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中TGF-β1陽性表達率愈高，其腋下淋巴結轉(zhuǎn)移的數(shù)目愈多，無瘤生存時間愈短。上述結果提示，TGF-β1表達增加促進腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移。正常組織細胞中依賴于Smad 的TGF-β1信號傳導通路與Smad非依賴性的TGF-β1信號傳導通路處于平衡狀態(tài)，兩者可以相互調(diào)節(jié)，但腫瘤細胞中這種平衡被破壞[12]。Lang等[10]發(fā)現(xiàn)，TGF-β1通過對uPA/PAI-1的活化轉(zhuǎn)移從而參與乳腺癌的復發(fā)與轉(zhuǎn)移；也有研究證實，TGF-β1介導SMAD3/SMAD4信號傳導通路參與腫瘤的復發(fā)及轉(zhuǎn)移[15]。本研究中TGF-β1高表達的三陰型乳腺癌患者5年無瘤生存率低于低表達者，與文獻報道[16,17]一致；提示三陰型乳腺癌組織中TGF-β1表達情況可作為判斷患者預后的指標之一。三陰性乳腺癌組織中TGF-β1表達量越高，其信號通路改變越明顯，腫瘤惡性程度越高，越容易出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移，從而影響患者預后。但是，目前TGF-β1表達上調(diào)在三陰型乳腺癌浸潤、轉(zhuǎn)移過程中的分子作用機制尚不明確。

總之，三陰型乳腺癌組織TGF-β1高表達，TGF-β1的表達變化與腫瘤組織學分級及腋下淋巴結轉(zhuǎn)移相關，并影響患者預后，但其具體作用機制有待進一步探討。

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