朱發(fā)偉孫乙銘王彬輝王海英沈曉霞王志安俞旭平

·藥學園地·

不同產(chǎn)地烏藥質(zhì)量研究

朱發(fā)偉1孫乙銘2王彬輝1王海英1沈曉霞2王志安2俞旭平2

烏藥；有效成分；產(chǎn)地；含量

烏藥為樟科植物烏藥Lindera aggregate（Sims）Kosterm.的干燥塊根，具有行氣止痛，溫腎散寒。用于寒凝氣滯，胸腹脹痛，氣逆喘急，膀胱虛冷，遺尿，尿頻，疝氣疼痛，經(jīng)寒腹痛[1]。烏藥在國內(nèi)許多地區(qū)均有分布，其中以浙江天臺所產(chǎn)的品質(zhì)最佳，故稱為臺烏藥，被認為是烏藥的道地產(chǎn)區(qū)。藥理研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性，其主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜。本實驗采用高效液相測定不同產(chǎn)區(qū)烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥內(nèi)酯及去甲異波爾定的含量，以探討不同產(chǎn)地烏藥藥效成分的差異，以評價不同產(chǎn)地烏藥質(zhì)量，并為浙產(chǎn)烏藥的開發(fā)利用提供科學依據(jù)，也為烏藥的質(zhì)量評價奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

1.1 儀 器[2]安捷倫Agilent1100高效液相色譜儀及Agilent化學工作站，DAD檢測器；伊利特公司Hypersil ODS2 Cl8分析柱（4.6mm×250mm×5μm）；去離子水。

1.2 試 藥[3]烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥內(nèi)酯、去甲異波爾定標準品（批號分別為：12061303、12061302、12021704，四川成都曼思特生物科技有限公司）；烏藥藥材采集于浙江、江西、湖南等地，經(jīng)浙江省中藥研究所藥材室鑒定為樟科植物烏藥 Lindera aggregate（Sims）Kosterm.的干燥塊根；乙腈、甲醇均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法

2.1 烏藥醚內(nèi)酯與異烏藥醚內(nèi)酯含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：伊利特公司Hypersil ODS2 C18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈（A）-水（B）；流速：1.0mL/min；檢測波長：235nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。采用梯度洗脫，分時流動相比例A為0～5min：35%（A）；25～30min:55～75%（A）；30～45min：75～100%（A）。理論板數(shù)按烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯計算不低于3000。烏藥醚內(nèi)酯對照品、異烏藥醚內(nèi)酯對照品和烏藥樣品色譜圖見圖1。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱定烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯標準樣品適量，用甲醇溶解并稀釋，配成每1mL含0.11mg的烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯的標準品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約1.5g，精密稱定，置索氏回流提取器中，加入乙醚溶液70mL，加熱回流4h，提取液揮干，殘渣用甲醇分次溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 方法學考察

2.2.1 線性關(guān)系的考察 精密吸取該對照品溶液2、4、6、8、10、12μL，按上述色譜條件測定峰面積，分別以峰面積為縱座標（Y），對照品進樣量為橫座標（X）。繪制標準曲線，并計算回歸方程，烏藥醚內(nèi)酯的回歸方程為：Y=122.87X+7.33，r=0.9999，線性范圍：0.11～1.32μg。異烏藥醚內(nèi)酯回歸方程為Y=84.969X+ 4.22，r=1.0，線性范圍：0.11～1.32g。

圖1 HPLC圖譜（a烏藥醚內(nèi)酯對照品色譜圖；b異烏藥醚內(nèi)酯對照品色譜圖；c烏藥樣品的HPLC色譜圖，1峰為烏藥醚內(nèi)酯，2峰為異烏藥醚內(nèi)酯）

2.2.2 精密度試驗 精密吸取含烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯的標準品溶液，重復(fù)進樣5次，每次10μL，考察測定的精密度，烏藥醚內(nèi)酯面積相對標準偏差為0.97%，烏藥醚內(nèi)酯面積相對標準偏差為0.59%。2.2.3 穩(wěn)定性試驗 取同一標準品溶液，室溫下放置，分別在0、4、8、12、24h進樣10μL測定，烏藥醚內(nèi)酯峰面積RSD為0.58%，異烏藥醚內(nèi)酯峰面積相對標準偏差為0.73%，表明標準品溶液在室溫下比較穩(wěn)定。

2.2.4 重復(fù)性試驗 取同一烏藥樣品6份，依“2.1.1.1 色譜條件”條件測定烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯含量，樣品烏藥醚內(nèi)酯含量，相對標準偏差RSD為2.95%；異烏藥醚內(nèi)酯含量相對標準偏差RSD為3.35%，表明該方法的重復(fù)性較好。

2.2.5 加樣回收率試驗 取已知含量的烏藥樣品，分別添加烏藥醚內(nèi)酯和異烏藥醚內(nèi)酯對照品后，同上述條件，進行測定，見表1～2。

表1 烏藥醚內(nèi)酯加樣回收率

表2 異烏藥醚內(nèi)酯加樣回收率

2.3 去甲異波爾定的含量測定 取烏藥粉末0.5g，精密稱定，按照2010年版《中國藥典》一部[1]烏藥含量測定項下進行含量測定。去甲異波爾定對照品、烏藥樣品色譜圖見圖2。

3 結(jié)果

圖2 HPLC圖譜（a.去甲異波爾定對照品色譜圖；b.烏藥樣品的HPLC色譜圖，3峰為去甲異波爾定）

天臺烏藥中烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥醚內(nèi)脂、去甲異波爾定3種成分含量均較高，質(zhì)量最好，作為烏藥的道地產(chǎn)區(qū)具有一定的科學性。見表3，圖3。

表3 不同產(chǎn)地烏藥樣品檢測結(jié)果（mg/g）

圖3 不同產(chǎn)地烏藥三種有效成分含量比較圖

4 結(jié) 語

不同產(chǎn)地烏藥的烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥醚內(nèi)脂、去甲異波爾定含量差異較大，說明市場上烏藥藥材內(nèi)在質(zhì)量參差不齊，因此應(yīng)盡快制定或完善烏藥飲片的質(zhì)量控制標準，同時還需對不同產(chǎn)地的栽培條件進行考察，建立烏藥的GAP基地，從源頭上保證烏藥的質(zhì)量。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：71-72.

［2］徐建中，俞旭平，孫乙銘，等.元胡飲片初加工實驗研究［J］.中藥材，2011，34（7）：1040-1043.

［3］康立，徐建中，俞旭平，等.鮮白術(shù)一體化加工與炮制工藝研究初探［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，24（4）：361-363.

（收稿：2015-06-29 修回：2015-07-23）

1臺州學院醫(yī)學院附屬市立醫(yī)院中藥房（臺州318000）；2浙江省中藥研究所有限公司（杭州 310000）

朱發(fā)偉，Tel：13626666266；E-mail：zhufawei88@126.com