夏利寧，夏緒進(jìn)，程偉華，帕力達(dá)·亞森，蔡建星

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052）

豬大腸桿菌病是造成規(guī)?；i場(chǎng)經(jīng)濟(jì)損失的主要疾病之一。由于大腸埃希菌血清型多且復(fù)雜，目前沒(méi)有理想疫苗來(lái)預(yù)防大腸桿菌病，對(duì)其治療多采用抗菌藥物；加之大腸埃希菌是革蘭陰性菌中最易產(chǎn)生耐藥性的細(xì)菌，導(dǎo)致耐藥大腸埃希菌越來(lái)越普遍［1］，不但消弱臨床療效，造成大量藥物殘留和毒副作用，而且耐藥細(xì)菌有在動(dòng)物和人之間傳播的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)人類(lèi)健康造成潛在威脅，已引起全球關(guān)注［2］。目前，國(guó)內(nèi)很多省市如廣東［3］、安徽［4］、西南地區(qū)［5］、新疆［6-7］等地對(duì)不同來(lái)源如禽源［3，8-10］、豬 源［4］、牛源［6］、羊源［7］大腸埃希菌的耐藥情況進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果顯示不同地區(qū)不同來(lái)源大腸埃希菌對(duì)抗菌藥物的耐藥情況不同，且多數(shù)研究表明大腸埃希菌的耐藥率呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)。盡管耐藥性研究很多，但鮮見(jiàn)對(duì)不同生長(zhǎng)期動(dòng)物源大腸埃希菌耐藥趨勢(shì)研究的相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)以2013年新疆某規(guī)模化豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行臨床常用抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)。獲取的數(shù)據(jù)與2010年本實(shí)驗(yàn)室在該養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)應(yīng)生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，分析新疆不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌年度耐藥規(guī)律，找出治療細(xì)菌病的有效途徑，從而為有效控制細(xì)菌耐藥提供可能。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來(lái)源 2013年5月在新疆烏魯木齊某規(guī)?；i場(chǎng)位于昌吉市、呼圖壁縣和瑪納斯縣的3個(gè)分場(chǎng)采集豬糞樣，其中哺乳仔豬糞樣240份，保育豬糞樣237份，妊娠豬糞樣150份，從中分離大腸埃希菌；大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌（ATCC25922）為杭州天和微生物試劑有限公司提供。

1.1.2 試劑和藥品 Mueller-Hinton（MH）培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和普通肉湯培養(yǎng)基為北京奧博星生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；β-內(nèi)酰胺類(lèi)：頭孢噻呋（含量100%）、氨芐西林（含量86.5%）和阿莫西林（含量86.6%）／克拉維酸（含量100%）；氨基糖苷類(lèi)：慶大霉素（含量99.5%）、安普霉素（含量55.8%）和阿米卡星（含量65.5%）；喹諾酮類(lèi)：環(huán)丙沙星（含量100%）、諾氟沙星（含量99.6%）和恩諾沙星（含量100%）。上述藥品均為標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2 方法

1.2.1 藥物敏感性試驗(yàn) 按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推薦的微量肉湯稀釋法進(jìn)行，對(duì)分離的大腸埃希菌進(jìn)行上述9種抗菌藥物最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）值測(cè)定，結(jié)果判定參照CLSI（2010；2012）標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)分析 耐藥率差異統(tǒng)計(jì)采用SPSS 20軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

1.2.3 對(duì)比分析 采用SPSS 20軟件對(duì)本試驗(yàn)?zāi)退幗Y(jié)果和2010年［11］本實(shí)驗(yàn)室對(duì)該養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)的耐藥結(jié)果進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果

2.1 大腸埃希菌的分離率

本試驗(yàn)中各生長(zhǎng)期豬糞源大腸埃希菌的分離率均為100%。

2.2 不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌藥耐藥結(jié)果及耐藥性比較

從表1可知，哺乳仔豬源菌主要對(duì)阿莫西林／克拉維酸、慶大霉素、氨芐西林、恩諾沙星和環(huán)丙沙星具有較高的耐藥率，耐藥率分別為90.8%、87.9%、84.6%、82.9%和81.3%，對(duì)頭孢噻呋（25.8%）和安普霉素（20.0%）耐藥率較低；保育豬源菌對(duì)恩諾沙星、環(huán)丙沙星、阿莫西林-克拉維酸、慶大霉素、諾氟沙星、氨芐西林明顯耐藥，耐藥率分別為95.8%、92.8%、82.7%、80.2%、78.0%和76.8%，對(duì)安普霉素、阿米卡星和頭孢噻呋敏感性較高，耐藥率分別為21.1%、12.7%、5.0%；妊娠豬源菌對(duì)阿莫西林／克拉維酸、氨芐西林、恩諾沙星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、諾氟沙星的耐藥率分別為90.7%、75.3%、74.0%、66.0%、53.3%、50.1%；而對(duì)阿米卡星、安普霉素、頭孢噻呋較敏感，耐藥率分別為23.3%、10.7%、8.7%。

采用SPSS 20對(duì)不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌的耐藥率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)，哺乳仔豬源菌和保育豬源菌除對(duì)諾氟沙星和安普霉素外，對(duì)其他藥物耐藥性均存在顯著差異（P＜0.05）；哺乳仔豬源菌和妊娠豬源菌除對(duì)阿莫西林／克拉維酸外，對(duì)其他藥物耐藥性均存在顯著差異（P＜0.05）；妊娠豬源菌和保育豬源菌除對(duì)頭孢噻呋和氨芐西林外，對(duì)其他藥物耐藥性均存在顯著性差異（P＜0.05）。

表1 不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌對(duì)被檢藥物的耐藥率比較Table 1 Comparison of resistance rate of E.coli from the pigs at different growth stages to detected drugs

2.3 不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌多藥耐藥結(jié)果

哺乳仔豬源菌多藥耐藥以7耐（28.3%）、6耐（17.9%）和 5 耐（13.8%）為主，占 60.4%（145／627），5耐及5耐以上達(dá)77.5%；保育豬源菌多藥耐藥以6耐（41.4%）、5耐（20.7%）和7耐（11.4%）為主，占73.4%（174／627），5耐及5耐以上達(dá)78.5%；妊娠豬源菌以6耐（21.3%）、4耐（20.67）和3耐（14.0%）為主，占56.0%（84／627），5耐及5耐以上達(dá)49.3%。多耐具體數(shù)值參見(jiàn)表5中2013年多耐數(shù)據(jù)。

2.4 2010年和2013年不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌耐藥趨勢(shì)比較

采用SPSS 20對(duì)不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌耐藥趨勢(shì)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析，詳見(jiàn)表2、表3和表4。

由表2可知，2010年和2013年哺乳仔豬源菌對(duì)環(huán)丙沙星、阿米卡星和阿莫西林／克拉維酸等3種抗菌藥物的耐藥率極顯著升高（P＜0.01）；而對(duì)諾氟沙星、恩諾沙星、頭孢噻呋和氨芐西林無(wú)顯著性變化（P＞0.05）；僅對(duì)安普霉素的耐藥率極顯著降低（P＜0.01）。

由表3可知，2010年和2013年保育豬源菌對(duì)環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星的耐藥率極顯著升高（P＜0.01）；對(duì)阿莫西林／克拉維酸和氨芐西林的耐藥率無(wú)顯著性變化（P＞0.05）；而對(duì)安普霉素、阿米卡星和頭孢噻呋的耐藥率極顯著降低（P＜0.01）。

由表4可知，2010年和2013年妊娠豬源菌對(duì)環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、阿米卡星、阿莫西林／克拉維酸和安普霉素的耐藥率極顯著升高（P＜0.01）；僅對(duì)安普霉素和頭孢噻呋的耐藥率無(wú)顯著性變化（P＞0.05）。

2.5 2010年和2013年不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌多藥耐藥結(jié)果

不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌多藥耐藥結(jié)果詳見(jiàn)表5。由表5可知，2010年和2013年不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌多藥耐藥呈上升趨勢(shì)。哺乳仔豬由5耐（23／83，27.7%）上升為以7耐（65／240，27.1%）為主，保育豬由5耐（25／80，31.3%）上升為以6耐（101／237，42.6%）為 主，妊 娠 豬 由 0 耐（30／83，36.1%）上升為以6耐（32／150，21.3%）為主。

3 討論

3.1 不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥耐藥結(jié)果分析及趨勢(shì)比較

不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥物均有不同程度的耐藥，其中哺乳仔豬大腸埃希菌的耐藥問(wèn)題最為嚴(yán)重，尤其對(duì)目前應(yīng)用時(shí)間較長(zhǎng)的抗菌藥物，如阿莫西林／克拉維酸、慶大霉素、氨芐西林、恩諾沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率都超過(guò)80.0%，而對(duì)頭孢噻呋和安普霉素的耐藥率僅為20.0%。結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)室2010年對(duì)該養(yǎng)殖場(chǎng)的調(diào)查結(jié)果相比，均表現(xiàn)為哺乳仔豬源菌耐藥最嚴(yán)重，其次為保育豬源菌，妊娠豬源菌耐藥率最低；比較發(fā)現(xiàn)，妊娠豬源菌對(duì)被檢抗菌藥物的耐藥率上升最為明顯，對(duì)6種抗菌藥物的耐藥率極顯著上升（P＜0.01）。哺乳仔豬主要對(duì)3種抗菌藥物的耐藥率極顯著上升（P＜0.01），僅對(duì)安普霉素的耐藥率極顯著下降（P＜0.01）。保育豬對(duì)3種喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥率極顯著性上升（P＜0.01），對(duì)2種氨基糖苷類(lèi)藥物的耐藥率顯著下降（P＜0.01）。

表2 2010年和2013年哺乳仔豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥耐藥率比較Table 2 Comparison of resistance rate of E.coli from the sucking piglets to detected drugs in 2013and 2010 %

表3 2010年和2013年保育豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥耐藥率比較Table 3 Comparison of resistance rate of E.coli from the nursery pig to detected drugs in 2013and 2010 %

表4 2010年和2013年妊娠豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥耐藥率比較Table 4 Comparison of resistance rate of E.coli from the pregnant pig to detected drugs in 2013and 2010 %

表5 2010年和2013年不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌多藥耐藥結(jié)果Table 5 The results of multidrug resistance rate of E.coli from the pigs at different growth stages in 2013and 2010 %

分析發(fā)現(xiàn)，耐藥情況最輕的妊娠豬源菌，其對(duì)被檢抗菌藥物的耐藥率上升最為明顯；耐藥問(wèn)題最嚴(yán)重的哺乳仔豬除對(duì)安普霉素極顯著下降和對(duì)環(huán)丙沙星極顯著上升外，對(duì)其他抗菌藥物的耐藥率無(wú)顯著性變化（仍然保持較高的耐藥率）；而保育豬主要表現(xiàn)為對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物耐藥轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥。造成這一現(xiàn)象的原因可能是多方面的，通過(guò)對(duì)該養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行調(diào)研發(fā)現(xiàn)，其在2010年以后已經(jīng)改用喹諾酮類(lèi)藥物代替氨基糖苷類(lèi)藥物聯(lián)合β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物進(jìn)行細(xì)菌性疾病的防治，這或許是保育豬對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥率顯著升高，而對(duì)氨基糖苷類(lèi)藥物耐藥率顯著降低的主要原因；也可能是哺乳仔豬對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率顯著上升，而對(duì)安普霉素的耐藥率顯著下降的原因。此外，由于哺乳仔豬抵抗力低，易發(fā)病，使用各種抗菌藥物的頻率較高，因此其對(duì)抗菌藥物的耐藥問(wèn)題最為嚴(yán)重。妊娠豬由于飼養(yǎng)周期最長(zhǎng)，可能接觸抗菌藥物的時(shí)間最久，相應(yīng)的抗菌藥物在其體內(nèi)殘留問(wèn)題最為突出，因此其耐藥率上升最為明顯。該現(xiàn)象也給我們以重要提示：對(duì)處于保育時(shí)期的青年豬改變用藥方案可有效降低大腸埃希菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性。

3.2 不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥物多藥耐藥結(jié)果及趨勢(shì)分析

多藥耐藥結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)哺乳仔豬源菌主要以7耐菌株為主，保育豬源菌以6耐為主，妊娠豬源菌6耐最多。對(duì)比2010年耐藥結(jié)果，哺乳仔豬及保育豬源菌均以5耐居多，而妊娠豬源菌多藥耐藥以0耐為主。表明2013年該豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)期豬源菌多藥耐藥數(shù)增加明顯。此外發(fā)現(xiàn)哺乳仔豬源菌的耐藥問(wèn)題非常嚴(yán)重，7耐菌株接近30.0%；并檢出10株哺乳仔豬源菌對(duì)被檢抗菌藥物都耐藥的菌株，占4.2%。通過(guò)對(duì)該場(chǎng)生產(chǎn)實(shí)際用藥情況調(diào)研發(fā)現(xiàn)，哺乳仔豬抵抗力低易發(fā)病，其抗菌藥物使用特點(diǎn)為頻率高和種類(lèi)多，故其對(duì)上述被檢抗菌藥物的耐藥性最嚴(yán)重。此外，養(yǎng)殖場(chǎng)為避免哺乳仔豬發(fā)病帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失，將抗菌藥物作為添加劑混入飼料和飲水中作為預(yù)防性用藥，再次加快細(xì)菌對(duì)抗菌藥物耐藥性的產(chǎn)生。這可能是造成哺乳仔豬源菌多藥耐藥問(wèn)題嚴(yán)重的主要原因。

3.3 不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)耐藥情況分析

國(guó)內(nèi)大部分地區(qū)豬源大腸埃希菌對(duì)抗菌藥物的耐藥情況已十分嚴(yán)重。以喹諾酮類(lèi)藥物為例，耐藥情況最為嚴(yán)重的為河南地區(qū)（集中在87.0%～96.0%）［12］；其次為廣東地區(qū)（約87.5%）［13］和西南地區(qū)（集中在62.0%～65.8%）［5］；耐藥情況最輕的是保定地區(qū)（在8.0%～23.0%之間）［14］。本研究與我國(guó)其他地區(qū)豬源菌耐藥情況相比，耐藥問(wèn)題最為嚴(yán)重的是保育豬，其對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥率在78.0%～95.8%之間；其次為哺乳仔豬，對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥率主要集中在71.3%～82.9%；耐藥問(wèn)題最輕的是妊娠豬，對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥率在53.3%～74.0%之間。全國(guó)范圍內(nèi)豬源大腸埃希菌對(duì)抗菌藥耐藥問(wèn)題十分嚴(yán)重的主要原因是在生產(chǎn)中用藥不規(guī)范、療程不當(dāng)、用量不足，長(zhǎng)期使用同一類(lèi)藥物或長(zhǎng)期在飼料、飲水中加入預(yù)防性用藥，均可使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性［15］。

該規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)2013年不同生長(zhǎng)期豬源大腸埃希菌對(duì)被檢抗菌藥物（除安普霉素）的耐藥率明顯高于2010年；此外，哺乳仔豬源大腸埃希菌對(duì)頭孢噻呋和阿米卡星的耐藥率上升趨勢(shì)明顯，提示該養(yǎng)殖場(chǎng)謹(jǐn)慎使用上述抗菌藥物，治療細(xì)菌性疾病時(shí)應(yīng)聯(lián)合／交替使用敏感的抗菌藥物。

［1］Aarestrup F M，Oliver D C，Burch D G.Antimicrobial resistance in swine production［J］.Anim Health Res Rev，2008，9（2）：135-148.

［2］Daves P R.Intensive swine production and pork safety［J］.Foodb Pathog Dis，2011，8（2）：189-201.

［3］張業(yè)懷，凌 丁，謝燕妮，等.規(guī)模化蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)大腸埃希菌耐藥性調(diào)查［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（5）：107-109.

［4］阮祥春，曾明華，黃媛媛.安徽省部分地區(qū)致病性大腸埃希菌耐藥性分析［J］.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，4（3）：430-433.

［5］曾 博，王紅寧，鄒立扣，等.西南地區(qū)豬腸外大腸埃希菌毒力基因檢測(cè)及耐藥性研究［J］.中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35（4）：127-129.

［6］南海辰，郭慶勇，夏利寧，等.新疆伊犁某牛場(chǎng)大腸埃希菌耐藥性調(diào)查［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2014，41（8）：232-235.

［7］夏利寧，向 發(fā)，羅小魚(yú)，等.新疆某羊場(chǎng)分離的大腸埃希菌對(duì)抗生素耐藥性調(diào)查［J］.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，51（1）：150-156.

［8］李宏偉，汪 洋，張 蕾，等.洛陽(yáng)地區(qū)禽源大腸埃希菌分離鑒定與耐藥性分析［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（6）：196-198.

［9］蔣 月，盛鵬飛，張秀英.遼寧錦州地區(qū)家禽大腸埃希菌耐藥性研究［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34（11）：85-88.

［10］王利勤，王晶鈺，董 睿，等.雞源致病性大腸埃希菌中氨基糖苷類(lèi)抗生素耐藥基因的檢測(cè)［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（7）：49-53.

［11］夏利寧，趙紅瓊，米克熱木·沙衣布扎提，等.新疆某豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)期的豬源大腸埃希菌對(duì)抗生素耐藥性調(diào)查［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2013，40（3）：216-219.

［12］杜向黨，焦顯芹，陳玉霞，等.河南地區(qū)雞豬源大腸埃希菌的耐藥性監(jiān)測(cè)［J］.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30（12）：956-959.

［13］郭瀟木，楊 銅，賀丹丹，等.廣東地區(qū)豬源大腸埃希菌耐藥性及其系統(tǒng)發(fā)育群的研究［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2014，4（1）：182-186.

［14］趙曉靜，高 婕，宋勤葉，等.保定地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)大腸埃希菌耐藥性調(diào)查與分析［J］.疾病預(yù)防，2013，10（13）：92-93.

［15］唐一鳴.豬源大腸埃希菌和沙門(mén)氏菌耐藥表型與基因型的研究［D］.浙江杭州：浙江大學(xué)，2010.