周曉英，李世兵，張 林，鐘 艷，林星輝

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410208)

發(fā)熱是臨床常見癥狀之一，是由于機(jī)體體溫調(diào)節(jié)系統(tǒng)異常所致，細(xì)菌或其他微生物所產(chǎn)生的外源性致熱源或由微生物、抗原-抗體復(fù)合物或其他刺激物激發(fā)而釋放的內(nèi)源性致熱源均可引起［1］。在近年大量的臨床觀察中，大量的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)證明針刺退熱有起效快、作用持久、無藥毒的作用。有研究表明針刺退熱的作用機(jī)制可能與發(fā)熱介質(zhì)白介素-6(IL-6)、前列腺E2(PGE2)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)等的釋放有關(guān)［2］，因此本項(xiàng)目擬觀察針刺曲池、合谷穴對(duì)發(fā)熱大鼠體溫及下丘腦前列腺素E2(PGE2)含量的影響，以探討針刺退熱的退熱效應(yīng)及其效應(yīng)機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:選用清潔級(jí)健康雄性Wistar 大鼠，6 ～8周齡，體質(zhì)重(200 ±20)g。

1.2 藥品與試劑

阿司匹林粉:上海如吉生物科技發(fā)展公司。銀翹解毒顆粒:組成為金銀花、連翹、薄荷、荊芥、淡豆豉、牛蒡子(炒)、桔梗、淡竹葉、甘草，生產(chǎn)企業(yè):廣州白云山光華制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào):國藥準(zhǔn)字Z44020211。干酵母粉:安琪酵母股份有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào):420528010005。下丘腦前列腺素E2 酶聯(lián)試劑盒:長沙麗欣生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn)的華佗牌一次性針灸針，規(guī)格是φ0.30 ×(25 mm ～50 mm);精密電子天平:GX-200，日本AND;電子體溫計(jì):DT001，深圳和豐醫(yī)療器械有限公司;高速冷凍離心機(jī):GT10-1 型，北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司;超低溫保存箱:MDF-382E，日本三洋。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 酵母致熱模型制備

先將大鼠在室溫為18℃～22℃的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)3天，每天測(cè)體溫3 次(方法:將大鼠固定后待其平靜幾分鐘，擠出直腸內(nèi)糞塊，再將體溫計(jì)探頭的末端涂抹凡士林后，緩緩插入大鼠直腸內(nèi)約2 ～3 cm 處，待顯示器上的數(shù)字穩(wěn)定后讀數(shù))。實(shí)驗(yàn)前10 h 禁食，可自由飲水。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天每只大鼠測(cè)體溫3 次，每次間隔半小時(shí)，剔除體溫波動(dòng)超過0.3℃的大鼠，取3 次體溫的平均值作為基礎(chǔ)體溫。將大鼠隨機(jī)分成6 組，正常組不做處理，模型組背部皮下注射等劑量生理鹽水外，其余4組用酵母致熱法造模，即將20% 酵母混懸液按10 ml/kg于大鼠背部皮下注射，按壓注射部位1 min 以防液體外滲［3］。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組

注射酵母8 h 后選擇體溫上升0.8℃以上者，隨機(jī)分為正常組(灌服蒸餾水)、模型組(灌服蒸餾水)、中藥組(灌服銀翹解毒顆粒)、阿司匹林組(灌服阿司匹林)、針刺組(針刺曲池、合谷)、非經(jīng)非穴組(針刺曲池、合谷穴旁開0.5 cm)，共6 組，每組10 只。

2.3 處理方法

2.3.1 取穴方法 主要參照《常用動(dòng)物針灸穴位圖譜》，同時(shí)結(jié)合模擬人體經(jīng)穴并比較解剖學(xué)方法進(jìn)行。合谷:前肢第1、第2 掌骨間，約當(dāng)?shù)? 掌骨中點(diǎn)橈側(cè);曲池:橈骨近端的關(guān)節(jié)外側(cè)前方凹陷中。

2.3.2 針刺方法 采用0.5 寸、30 號(hào)的華佗牌針灸針，以絡(luò)合碘消毒后分別針刺大鼠雙側(cè)曲池直刺0.4 cm，合谷直刺0.1 cm，用捻轉(zhuǎn)瀉法:大拇指作用力向后時(shí)用力捻轉(zhuǎn)，然后輕力向前退回。捻轉(zhuǎn)幅度為360°，頻率60 次/min，持續(xù)捻針1 min，每15 min 行針1 次，留針30 min。

2.3.3 藥物灌胃方法 將阿司匹林用生理鹽水配置成濃度為10 mg/ml 的阿司匹林混懸液50 ml，銀翹解毒顆粒用生理鹽水配置成濃度為1.5 g/ml 的銀翹解毒顆?；鞈乙?0 ml，0 ～4℃冰箱放置備用。大鼠灌藥容積均為10 ml/kg?？瞻捉M及模型組均灌以等量的蒸餾水。

2.4 觀測(cè)指標(biāo)

各組進(jìn)行治療后的20 min、40 min、1 h、2 h、3 h、4 h分別測(cè)量大鼠體溫1 次，并記錄下來分析統(tǒng)計(jì)，比較各時(shí)間點(diǎn)各組之間的差異情況。

每組按照處理方法給予處理，按照預(yù)定時(shí)間進(jìn)行體溫測(cè)定后，分別于治療后2 h、4 h 測(cè)量體溫后再各取5 只大鼠，腹腔注射麻醉后快速斷頭(2 min 內(nèi)取出)，取出下丘腦，干冰速凍，存放于-70℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。檢測(cè)時(shí)取下丘腦35 mg 左右，加入1 ml PBS(PH7.4)。用勻漿機(jī)將標(biāo)本勻漿充分，離心20 min(2000 ～3000 轉(zhuǎn)/min)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。檢測(cè)方法按照酶聯(lián)檢測(cè)說明書進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

3.1 大鼠體溫變化情況

表1 各組經(jīng)處理后體溫變化情況 (±s，℃)

表1 各組經(jīng)處理后體溫變化情況 (±s，℃)

注:與正常組比較，＊＊P ＜0.05，* P ＜0.01，○P ＞0.05;與模型組相比，##P ＜0.05，#P ＜0.01;與阿司匹林組比較，◆◆P ＜0.05，◆P ＜0.01，☆P ＞0.05;與針刺組比較，△P ＜0.01，△△P ＜0.05，＆P ＞0.05;與基礎(chǔ)體溫比較，□□P ＜0.05，□P ＜0.01，▽P ＞0.05。

圖1 各組體溫變化曲線圖

表2 各組下丘腦PGE2含量 (±s，單位:ng/L)

表2 各組下丘腦PGE2含量 (±s，單位:ng/L)

注:與正常組比較，＊＊P ＜0.05，* P ＜0.01，○P ＞0.05;與模型組比較，#P ＜0.01;與阿司匹林組比較，◆◆P ＜0.05，◆P ＜0.01，☆P ＞0.05;與針刺組比較，△P ＜0.01，△△P ＜0.05，＆P ＞0.05。

由表1 及圖1 可以看出，大鼠注射酵母后，體溫有明顯的下降相和上升相，起始時(shí)體溫先降低，約2 h 后大鼠體溫迅速上升，約7、8 h 左右于峰值平臺(tái)期并能維持?jǐn)?shù)小時(shí)。各組經(jīng)過處理后，除模型組和正常組外，大鼠體溫開始下降，其中針刺組下降曲線較陡，中藥組和阿司匹林組的曲線相對(duì)較接近，非穴組下降曲線較平緩。

在注射酵母懸濁液8 h 后，與正常組相比，模型組、中藥組、阿司匹林組、針刺組及非經(jīng)非穴組大鼠的體溫均顯著升高(P ＜0.01 或P ＜0.05)，說明造模成功。各組經(jīng)過處理后，阿司匹林組、中藥組、針刺組、非經(jīng)非穴組各組體溫與模型組相比，在1 h、2 h、3 h、4 h時(shí)，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)，說明均能使酵母致熱大鼠的體溫下降。經(jīng)處理1 h 后，針刺組與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與基礎(chǔ)體溫相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)處理2 h 后，針刺組與正常組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與阿司匹林組相比其差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。處理4 h 后，中藥組和阿司匹林組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，阿司匹林組、中藥組與基礎(chǔ)體溫相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上說明，針刺曲池、合谷，口服阿司匹林、口服中藥均有退熱效果，但是針刺曲池、合谷起效解熱時(shí)間短、作用持久。非經(jīng)非穴組也有解熱作用，但是退熱效果較其他幾種方式療效稍差。

3.2 大鼠下丘腦PGE2變化情況

圖2 各組下丘腦PGE2含量比較

由圖2 可見，經(jīng)治療2 h 后，阿司匹林組、中藥組、針刺組、非經(jīng)非穴組與模型組相比差異均有顯著意義(P ＜0.01);阿司匹林組、中藥組及非經(jīng)非穴組與正常組相比差異均有顯著意義(P ＜0.01);針刺組與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);針刺組與中藥組、阿司匹林組相比差異均有顯著意義(P ＜0.01);中藥組與阿司匹林組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);非經(jīng)非穴組與阿司匹林組相比差異有顯著意義(P ＜0.01)。處理4 h后，針刺組與正常組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。經(jīng)治療后2 h、4 h 各組的體溫值分別與相應(yīng)PGE2含量進(jìn)行相關(guān)分析，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理二者之間均存在明顯正相關(guān)關(guān)系(r 分別為0.762，0.864，P ＜0.01)。以上說明針刺組在2 h、4 h 時(shí)PGE2含量均明顯低于阿司匹林組、中藥組、非經(jīng)非穴組;阿司匹林組和中藥組在4 h 時(shí)大鼠丘腦PGE2含量相差不大，非經(jīng)非穴組丘腦PGE2含量較其他組均較高?？赏茢噌槾糖?、合谷可降低大鼠下丘腦PGE2含量。

4 討論

發(fā)熱為臨床上常見的癥狀，許多學(xué)者也一直致力于發(fā)熱機(jī)制的研究，對(duì)于發(fā)熱主要是在外源性致熱原的作用下，激活體內(nèi)免疫細(xì)胞，產(chǎn)生內(nèi)源性致熱原(EP)，即大量致熱性細(xì)胞因子，這些因子直接或間接的作用于體溫調(diào)節(jié)中樞，引起調(diào)節(jié)性體溫升高［4］。致熱因子很多，近年來也有一些新的遞質(zhì)被發(fā)現(xiàn)。在目前已知的神經(jīng)遞質(zhì)中，PGE2是最重要的中樞發(fā)熱介質(zhì)之一，已得到大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)［5］，給腦室或視前區(qū)/下丘腦前部(PO/AH)注射PGE2，動(dòng)物均有發(fā)熱反應(yīng)，且發(fā)熱程度與注射量成正比［5-6］。因此，本項(xiàng)目通過測(cè)定下丘腦PGE2含量的變化，探討退熱的作用機(jī)理。現(xiàn)在臨床上的退熱藥僅以支持對(duì)癥治療為主，且隨著耐藥性、毒副作用等問題的日益嚴(yán)重，針灸療法退熱越來越受到人們的歡迎，因此本實(shí)驗(yàn)通過研究針刺退熱的療效及機(jī)理，為臨床提供一定的客觀依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)選取的合谷穴為手陽明大腸經(jīng)原穴，可疏風(fēng)解表、調(diào)和營衛(wèi)，對(duì)熱病無汗者可發(fā)，多汗者可斂。曲池穴，為手陽明大腸經(jīng)合穴，可調(diào)節(jié)全身功能，具有清熱祛風(fēng)、調(diào)和營衛(wèi)等作用，可助陽氣、祛火，治外感發(fā)熱。兩穴相配為治療高熱的經(jīng)驗(yàn)穴，主治頭面、五官咽喉病，有退熱之功效，是治療目赤、流涕、咽喉腫痛及發(fā)熱的要穴，且兩穴均在上肢處，體表定位容易，取穴方便，操作快捷方便，技術(shù)實(shí)用，適合臨床推廣。本研究的結(jié)果表明，針刺曲池、合谷穴的解熱時(shí)間短、作用持久，可以通過降低下丘腦中的PGE2水平從而達(dá)到退熱的效果。

［1］ 繆媛媛，孟慶義. 解析發(fā)熱與不明原因發(fā)熱［J］. 臨床誤診誤治，2013，26(4):5

［2］ 吳曉嵐，趙書芬. IL-1β 致熱機(jī)制的研究進(jìn)展［J］. 解剖科學(xué)進(jìn)展，2004，10(3):267-270

［3］ 唐曉峰，薛漫清，王暉，等. 大鼠發(fā)熱模型及發(fā)熱機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，25(3):327-330

［4］ 張林，鐘艷，賀香嫦，等.針刺退熱的臨床研究進(jìn)展［J］.針灸臨床雜志，2013，29(7):95-96

［5］ 楊金蓉，宋軍，胡榮，等.川芍揮發(fā)油的解熱作用及對(duì)下丘腦PGE2含量的影響［J］.中藥藥理與臨床，2008，24(4):34-36

［6］ 周曉英，鐘艷，李世兵，等.針刺退熱的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.湖南中醫(yī)雜志，2014，30(6):183-184